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비젤방식의 2차원 단백질분리용 다중채널장치

  • 기술번호 : KST2014020458
  • 담당센터 : 서울서부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-6124-6930
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 비젤방식의 2차원 단백질분리용 다중채널장치에 관한 것으로, 보다 상세하게는 단백질 시료를 pI 별로 1차 분리하는 등전집중부 및 1차로 분리된 단백질을 2차로 분자량별로 분리하는 흐름장흐름분획부를 함유하는 평판형 채널이 하나 이상 병렬구로 연결되어, 다중채널에서 단백질의 동시 분리가 가능하고, 단백질 분리속도가 향상되며, 채널부피 증가로 인한 시료 주입의 한계를 극복할 수 있는 비젤방식의 2차원 단백질분리용 다중채널장치에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 단백질을 pI와 분자량의 크기 순서에 따라 분리할 수 있으며, 단백질 분리공정에 따른 단백질의 변성이 일어나지 않으며, 등전점 분리에 사용되는 양쪽성 전해질의 자동제거가 가능하며, 분리된 단백질을 별도로 검출하여 나노유속 액체크로마토그래피-전자분무이온화-탠덤질량분석법을 적용함으로써 단백질 식별이 가능하다. 단백질 분리, 등전집중, 흐름장-흐름분획, 다중채널 분리
Int. CL G01N 35/00 (2011.01)
CPC G01N 27/44773(2013.01) G01N 27/44773(2013.01) G01N 27/44773(2013.01) G01N 27/44773(2013.01)
출원번호/일자 1020080048842 (2008.05.26)
출원인 연세대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-0958165-0000 (2010.05.07)
공개번호/일자 10-2009-0122836 (2009.12.01) 문서열기
공고번호/일자 (20100514) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2008.05.26)
심사청구항수 26

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 문명희 대한민국 경기도 성남시 분당구
2 김기훈 대한민국 서울특별시 노원구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인다나 대한민국 서울특별시 강남구 역삼로 *길 **, 신관 *층~*층, **층(역삼동, 광성빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2008.05.26 수리 (Accepted) 1-1-2008-0374831-19
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2008.12.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)
2008.12.17 수리 (Accepted) 1-1-2008-0866754-53
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2009.01.12 수리 (Accepted) 9-1-2009-0001789-39
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2009.11.06 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2009-0459185-29
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2009.12.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2009-0792323-65
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2009.12.22 수리 (Accepted) 1-1-2009-0792320-28
8 등록결정서
Decision to grant
2010.05.03 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2010-0186409-50
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2011.12.15 수리 (Accepted) 4-1-2011-5252006-10
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5062749-37
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.06.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5088566-87
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.09.25 수리 (Accepted) 4-1-2014-5114224-78
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
단백질 시료를 pI별로 1차 분리하는 등전집중부 및 1차 분리된 단백질을 2차로 분자량 별로 분리하는 흐름장-흐름분획부로 구분된 유체 채널을 둘 이상 포함하되, 각 채널의 등전집중부는 서로 연결되어 있고, 흐름장-흐름분획부는 일정 거리로 이격되어 병렬 배치되어 있으며, 각 흐름장-흐름분획부의 하단에 구비된 단백질 배출포트를 통해 단백질 분취액을 얻고, 상기 등전집중부 양끝에 전해질 유입포트가 위치하고 있어 튜브연결을 통해 상기 채널 외부에 위치한 전해질 공급부로부터 양 전해질 및 음전해질이 각각 등전집중부로 공급되는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
2 2
제 1 항에 있어서, 단백질 분리 장치는 하부 블록; 하부 블록 상에 배치된 멤브레인; 멤브레인 상에 배치되며, 소정 길이를 갖는 적어도 하나의 절개부가 형성되어 있는 스페이서; 및 스페이서 상에 배치되며, 하부 블록과 체결되는 상부 블록을 포함하여, 스페이서에 형성된 각 절개부는 상부 블록 및 하부 블록에 의하여 유체 채널을 형성하되, 유체 채널은 이웃하는 유채 채널과 연결된 등전집중부 및 이웃하는 유체 채널과 분리된 흐름장-흐름분획부로 구분된 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
3 3
제 2 항에 있어서, 단백질 분리 장치는, 등전집중부의 유체 채널에 단백질 시료를 공급하는 시료 공급부; 등전집중부와 흐름장-흐름분획부의 경계부에 음전해질과 양전해질을 각각 공급하는 제 1 및 제 2 전해질 공급부; 및 등전집중부의 유체 채널 및 흐름장-흐름분획부의 유체 채널에 완충 용액을 각각 공급하는 펌프를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리 장치
4 4
제 1 항에 있어서, 상부 블록은 유체 채널에 대응하는 위치에 장착된 다수의 유입포트 및 배출포트를 포함하되, 유입포트는 시료 공급부, 제 1 및 제 2 전해질 공급부, 펌프와 유체 채널을 연결하며, 배출포트는 흐름장-흐름분획부의 유체 채널에 대응하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리 장치
5 5
제1항에 있어서, 등전집중부의 일 종단과 흐름장-흐름분획부의 유입구까지의 거리는 0
6 6
제2항에 있어서, 상부 블록 및 하부 블록은 아크릴 또는 루싸이트로 제조된 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
7 7
제2항 또는 제6항에 있어서, 하부 블록은 1 내지 10㎛ 깊이의 프릿이 형성되어 있어 단백질이 분리된 후 폐기물이 멤브레인을 통하여 프릿 내로 유입되는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
8 8
제2항에 있어서, 멤브레인은 10 내지 30 kDa의 분자량 투과한계를 갖는 반투과 멤브레인인 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
9 9
제2항 또는 제 8 항에 있어서, 멤브레인은 셀룰로오즈, 폴리술폰 및 폴리프로필렌으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 고분자로부터 제조되는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
10 10
제2항에 있어서, 스페이서는 50 내지 500㎛의 두께를 갖는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
11 11
제1항에 있어서, 흐름장-흐름분획부를 구성하는 유체 흐름 채널은 그 유입구 폭이 1 내지 3cm이고, 유출구 폭이 0
12 12
제4항에 있어서, 전해질 저장부와 연결되는 유입포트는 단백질 시료의 유출을 제어하기 위한 10kDa 이하의 반투과막을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
13 13
제1항에 따른 단백질 분리장치; 및 상기 분리장치에서 분리된 단백질을 분석하는 단백질 검출기를 포함하는 단백질 분석장치
14 14
제13항에 있어서, 단백질 분리장치의 배출 포트에 연결된 분취액분취기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분석장치
15 15
제13항에 있어서, 단백질 분리장치의 배출 포트에 연결된 전자분무이온화 질량분석기를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분석장치
16 16
단백질 시료 및 양쪽성 전해질 용액의 혼합물을 펌프에 채운 다음 등전집중부에 공급하고, 전기장을 걸어 등전집중시켜 pI별로 단백질을 분리하는 단계; 및 등전집중된 단백질 시료를 흐름장-흐름분획부로 유입하여 분자량에 따라 단백질을 분리하는 단계를 포함하는 제1항의 단백질 분리장치를 이용한 단백질의 분리방법
17 17
제 16항에 있어서, 단백질 시료는 미오글로빈(myoglobin), 트립시노겐(trypsinogen), 카보닉 안하이드라아제(carbonic anhydrase), 소혈청알부민(bovine serum albumin), 시토크롬-C, 아포페리틴 및 이스트 알코올 디하이드로게나아제(yeast alcohol dehydrogenase)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
18 18
제16항에 있어서, 양쪽성 전해질 용액은 pH 3 내지 10의 0
19 19
제16항에 있어서, 양쪽성 전해질 용액은 단백질 시료 100 중량부에 대하여 1 내지 2 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
20 20
제16항에 있어서, 단백질을 분자량에 따라 분리하는 단계는 유체저장부의 일측에 연결설치된 제1공급펌프를 작동시켜 유체저장부에 저장된 완충용액을 유체유입포트에 공급하여 분리된 단백질 밴드를 흐르장-흐름분획부로 공급하면서, 또한 제2공급펌프를 작동시켜 완충용액을 집중흐름유입포트에 공급하여 시료이완-집중 및 평형을 유지하는 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
21 21
제20항에 있어서, 흐름장-흐름분획부의 유체유입포트와 집중흐름유입포트로 유입되는 유체의 속도의 비율은 1:9 내지 5:5인 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
22 22
제20항에 있어서, 흐름장-흐름분획부의 유체유입포트와 집중흐름유입포트로 유입되는 유체는 각각 등전집중부와 흐름장-흐름분획부 전체 길이의 10 내지 50%가 되는 위치에서 집중하면서 평형을 이루게 되는 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
23 23
제20항에 있어서, 단백질을 분자량에 따라 분리하는 단계는 시료의 이완-집중 및 평형이 종료된 후 제2공급펌프의 유속을 중단하고, 유체저장부의 완충용액을 제1공급펌프를 통해 유체유입포트로만 유입되도록 하여 흐름장-흐름분획법으로 분자량이 작은 단백질로부터 분자량이 큰 단백질 순서로 단백질을 분리하는 것을 특징으로 하는 단백질의 분리방법
24 24
제16항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따라 단백질을 분리하는 단계; 및 상기에서 분리된 단백질을 단백질 검출기에서 분석하는 단계를 포함하는 단백질의 분석방법
25 25
제24항에 있어서, 단백질 분리장치의 단백질 배출포트를 전자분무이온화 질량분석기에 모세관 연결하여 단백질을 분석하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질의 분석방법
26 26
제24항에 있어서, 단백질 분리장치에서 분리된 단백질 시료를 회수하여 프로테옴을 분석하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질의 분석방법
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4 WO2009145532 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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1 교육부 연세대학교산학협력단 기초연구지원기초과학(단독연구) 2차원 단백질 분리를 위한 NON-GEL 방식의 새로운 다중채널분리장치 개발