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다수의 스폿(spot)에 의해 기판 상에 도입된 3-아미노프로필트리메톡시실란이 노출되어 있는 어레이(array) 칩을 준비하는 단계;
측정대상이 되는 살아있는 세포나 조직에 5-(바이오틴아미도)펜틸아민(5-(biotinamido)pentylamine)을 처리하여, 인시투 트랜스글루타미나아제의 기질인 글루타민(glutamine)의 아미드(amide) 잔기와 5-(바이오틴아미도)펜틸아민의 아민(amine)기 사이의 아미드교환반응에 의해 생성된 바이오틴 결합 단백질이 포함된 세포 추출물을 습득하는 단계;
상기와 같이 수득된 세포 추출물을 어레이 칩의 스폿 부분에 올려놓고 반응시켜 3-아미노프로필트리메톡시실란의 아민기 말단에 세포 추출물이 도입된 어레이 타입의 칩을 제조하는 단계;
상기 어레이 칩에 도입된 세포 추출물의 말단부에 위치한 바이오틴에 형광표지된 스트렙타비딘(streptavidin)을 도입한 다음 형광스캐너로 분석하여 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도를 측정하는 단계;를 포함함을 특징으로 하는 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도 측정방법
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청구항 1에 있어서, 상기 3-아미노프로필트리메톡시실란이 노출된 다수의 스폿(spot)을 갖는 어레이(array) 칩은 3-아미노프로필트리메톡시실란(3-aminopropyltrimethoxysilane) 함유용액에 기판을 침적하여 기판의 표면에 3-아미노프로필트리메톡시실란을 도입한 다음, 그 표면에 다수개가 천공된 테이프나 박막을 부착함으로써 제조된 것을 특징으로 하는 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도 측정방법
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청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기와 같이 수득된 세포 추출물은 세포나 조직에 5-(바이오틴아미도)펜틸아민을 처리한 후 용해버퍼(50mM Tris·HCl(pH 7
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청구항 3에 있어서, 상기 어레이 칩에 세포 추출물이 반응하지 않은 스폿의 빈 부분을 블로킹(blocking) 용액으로 처리하여 블로킹시키는 것을 포함함을 특징으로 하는 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도 측정방법
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청구항 4에 있어서, 상기 블로킹(blocking) 용액은 PBST(Phosphate buffered saline with Tween 20)에 BSA(Bovine serum albumin)가 1~10중량% 포함되도록 용해시켜 얻은 것임을 특징으로 하는 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도 측정방법
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청구항 4에 있어서,
상기 형광표지된 스트렙타비딘(streptavidin)으로 싸이3(Cy3), 싸이5(Cy5), 알렉사(Alexa), 4,4-다이플루오로-4-보로-3a,4a-다이아자-s-인디센(BODIPY), 로다민(Rhodamine) 또는 양자점(Q-dot)에서 선택된 형광표지물질이 스트렙타비딘에 결합된 것을 사용함을 특징으로 하는 인시투 트랜스글루타미나아제의 활성도 측정방법
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