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벤조플로란센 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한확인 방법

  • 기술번호 : KST2014052087
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 벤조플로란센(benzo[k]fluoranthene)의 노출 여부 확인용 바이오마커(biomarker) 및 이를 이용한 확인 방법에 관한 것으로, 구체적으로 다환방향족탄화수소(Polycyclic aromatic hydrocarbon, PAH) 중의 하나인 벤조플로란센에 특이적으로 유전자 발현이 증가하는 바이오마커 및 이를 이용한 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 바이오마커는 바다송사리(Oryzias javanicus) 서브트렉티브 cDNA 라이브러리(subtractive cDNA library)를 통하여 선별된 반응 유전자들을 바이오마커로 이용하여 환경 시료에서 벤조플로란센의 오염을 모니터링 및 판정하는데 유용하게 사용될 수 있으며, 벤조플로란센에 의해 유발되는 독성 및 발암 작용 기작을 규명하는 도구로 이용될 수 있다. 벤조플로란센, 바이오마커, 마이크로어레이, 바다(자바)송사리
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
CPC C12Q 1/6876(2013.01) C12Q 1/6876(2013.01) C12Q 1/6876(2013.01)
출원번호/일자 1020080075999 (2008.08.04)
출원인 한국해양연구원
등록번호/일자 10-1012122-0000 (2011.01.25)
공개번호/일자 10-2010-0015090 (2010.02.12) 문서열기
공고번호/일자 (20110207) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항 심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2008.08.04)
심사청구항수 13

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국해양연구원 대한민국 경기도 안산시 상록구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 염승식 대한민국 경남 거제시
2 우선옥 대한민국 경남 거제시
3 이택견 대한민국 경기 안성시
4 박홍석 대한민국 대전광역시 유성구
5 류재천 대한민국 서울시 종로구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 엠티테크 충청남도 논산시
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2008.08.04 수리 (Accepted) 1-1-2008-0559238-93
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2009.09.14 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2009.10.12 수리 (Accepted) 9-1-2009-0055279-65
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2010.08.05 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2010-0340632-05
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2010.09.06 수리 (Accepted) 1-1-2010-0578804-74
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2010.09.06 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2010-0578805-19
7 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2010.11.10 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2010-0509988-06
8 명세서 등 보정서(심사전치)
Amendment to Description, etc(Reexamination)		 2010.12.07 보정승인 (Acceptance of amendment) 7-1-2010-0050400-99
9 등록결정서
Decision to grant		 2011.01.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0030829-99
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
하기의 모든 유전자 각각의 염기서열의 전부로 구성되는 cDNA 단편 또는 올리고뉴클레오티드, 상기 cDNA 단편에 상보적인 유전자 단편, 또는 상기 올리고뉴클레오티드에 상보적인 올리고뉴클레오티드 분자가 집적된 벤조플로란센(benzo[k]fluoranthene)의 노출 여부 확인용 cDNA 마이크로어레이 칩: 서열번호 1로 기재되는 유전자(14 kDa apolipoprotein-like mRNA), 서열번호 2로 기재되는 유전자(adaptor-related protein complex 2, beta 1 subunit), 서열번호 3으로 기재되는 유전자(aldehyde dehydrogenase 7 family, member A1), 서열번호 4로 기재되는 유전자(annexin A2a), 서열번호 5로 기재되는 유전자(apolipoprotein A1 precursor mRNA), 서열번호 6으로 기재되는 유전자(b2-microglobulin), 서열번호 7로 기재되는 유전자(C1q-like adipose specific protein), 서열번호 8로 기재되는 유전자(chaperonin containing TCP1, subunit 2), 서열번호 9로 기재되는 유전자(Complement component C3-1), 서열번호 10으로 기재되는 유전자(Complement component C3-2), 서열번호 11로 기재되는 유전자(complement factor bfc2), 서열번호 12로 기재되는 유전자(cytochrome c oxidase subunit 1), 서열번호 13으로 기재되는 유전자(cytochrome P450 2P3), 서열번호 14로 기재되는 유전자(fibrinogen beta chain precursor), 서열번호 15로 기재되는 유전자(fructose-bisphosphate aldolase B), 서열번호 16으로 기재되는 유전자(heat shock protein 60), 서열번호 17로 기재되는 유전자(liver-basic fatty acid binding protein), 서열번호 18로 기재되는 유전자(peroxiredoxin 4), 서열번호 19로 기재되는 유전자(pre-B-cell leukemia homeobox 3a), 서열번호 20으로 기재되는 유전자(receptor for activated protein kinase C), 서열번호 21로 기재되는 유전자(superoxide dismutase 3), 서열번호 22로 기재되는 유전자(transferrin)
2 2
제 1항에 있어서, 상기 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자는 바다송사리(또는 자바송사리, Oryzias javanicus)로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 cDNA 마이크로어레이 칩
3 3
제 1항에 있어서, 상기 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자는 벤조플로란센의 노출에 의해 발현이 증가하는 것을 특징으로 하는 cDNA 마이크로어레이 칩
4 4
삭제
5 5
1) 실험군으로서 벤조플로란센에 노출된 것으로 의심되는 바다송사리와 대조군으로서 벤조플로란센에 노출되지 않은 바다송사리를 준비하는 단계; 2) 단계 1)의 각 실험군 및 대조군의 바다송사리 유래 간세포에서 RNA를 분리하는 단계; 3) 단계 2)의 실험군 및 대조군의 RNA로부터 cDNA로 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질로 표지하는 단계; 4) 단계 3)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩과 혼성화시키는 단계; 5) 단계 4)의 반응한 cDNA 마이크로어레이 칩을 분석하는 단계; 및 6) 단계 5)의 분석한 데이터에서 실험군의 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자의 발현 정도가 대조군에 비해 증가하는 경우 상기 실험군이 벤조플로란센에 노출된 것으로 판정하는 단계를 포함하는, 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하기 위해 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 검출하는 방법
6 6
제 5항에 있어서, 단계 2)의 간세포는 간, 또는 간의 세포 및 조직에서 유래한 세포인 것을 특징으로 하는 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하기 위해 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 검출하는 방법
7 7
제 5항에 있어서, 단계 3)의 형광물질은 Cy3, Cy5, FITC(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하기 위해 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 검출하는 방법
8 8
1) 실험군으로서 벤조플로란센에 노출된 것으로 의심되는 바다송사리와 대조군으로서 벤조플로란센에 노출되지 않은 바다송사리를 준비하는 단계; 2) 단계 1)의 각 실험군 및 대조군의 바다송사리 유래 간세포에서 RNA를 분리하는 단계; 3) 단계 2)의 RNA를, 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 사용하여 실시간 RT-PCR(Real-time reverse transcription polymerase chain reaction)을 수행하여 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자의 산물을 얻는 단계; 및 4) 단계 3)의 실험군에서 얻어진 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자 산물의 발현 정도가 대조군에 비해 증가하는 경우 상기 실험군이 벤조플로란센에 노출된 것으로 판정하는 단계를 포함하는, 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하기 위해 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 검출하는 방법
9 9
제 8항에 있어서, 단계 2)의 간세포는 간, 또는 간의 세포 및 조직에서 유래한 세포인 것을 특징으로 하는 벤조플로란센에 대한 노출 여부를 확인하기 위해 제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 검출하는 방법
10 10
제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩을 포함하는 것을 특징으로 하는 벤조플로란센의 노출 여부 확인용 키트
11 11
제 10항에 있어서, 바다송사리 유래 간세포를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 벤조플로란센의 노출 여부 확인용 키트
12 12
제 10항에 있어서, 스트렙타비딘-알칼리 탈인산화효소 접합물질(streptavidin-like phosphatase conjugate), 화학형광물질(chemifluorescence) 및 화학발광물질(chemiluminescence)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 벤조플로란센의 노출 여부 확인용 키트
13 13
제 10항에 있어서, 혼성화에 사용되는 완충용액, RNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 역전사효소, dNTPs 및 rNTPs(사전 혼합형 또는 분리 공급형), 형광 염색제의 화학적 유도제와 같은 표식시약, 및 세척 완충용액으로 이루어진 반응시약군으로부터 선택되는 어느 하나를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 벤조플로란센의 노출 여부 확인용 키트
14 14
제 1항의 cDNA 마이크로어레이 칩에 집적된 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머쌍을 포함하는 벤조플로란센의 노출 여부 확인용 키트
15 15
삭제
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순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 환경부 한국해양연구원 차세대핵심환경기술개발사업 자바송사리의 독성유전체를 활용한 수계환경 위해성 평가