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표적 막 단백질을 발현하는 살아있는 세포에서 후보물질의 처리 전후의 표적 막 단백질의 확산계수를 구하고, 이를 통해 얻어진 하나 이상의 표적 막 단백질의 확산계수의 변화를 분석하는 단계를 포함하는 상기 후보물질과 표적 막 단백질의 결합양상을 분석하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 표적 막 단백질과 후보물질의 결합양상의 분석은 표적 막 단백질과 후보물질의 결합 유무, 전체 표적 막 단백질 중 후보물질에 결합한 표적 막 단백질의 비율, 표적 막 단백질과 결합한 후보물질의 분자량, 표적 막 단백질과 후보물질간의 해리상수, 또는 표적 막 단백질과 후보물질간의 복합체 형성과정의 분석인 방법
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제1항에 있어서, 상기 표적 막 단백질은 내재성 막 단백질(integral membrane protein), 표재성 막 단백질(peripheral membrane protein), 막관통 단백질(transmembrane protein), 막 당단백질(membrane glycoprotein) 및 지질 공정 막 단백질(lipid anchored membrane protein)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 방법
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제1항에 있어서, 상기 후보물질은 화합물, 핵산, 당, 탄수화물, 지질, 펩티드 및 단백질로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 것인 방법
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제1항에 있어서, 표적 막 단백질의 확산계수는 단일 입자 추적(single particle tracking, SPT)을 통해 막 단백질의 세포막 내 이동을 탐지함으로써 얻는 것인 방법
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제5항에 있어서, 상기 확산계수는 하기 수학식 1 및 수학식 2를 이용하여 얻는 것인 방법:[수학식 1](△: 표적 막 단백질 입자의 좌표 간 스텝 크기(Step size), △는 자연수다, MSD(△): 표적 막 단백질 입자의 좌표 간 스텝 크기에 대한 표적 막 단백질 입자의 이동한 거리 제곱의 평균 (Mean Square Displacement), N: 하나의 궤적을 이루는 표적 막 단백질 입자의 좌표의 총 수, (xn, yn): 하나의 궤적 내의 표적 막 단백질 입자의 n번째 위치 좌표, (x1, y1): 하나의 궤적의 시작점에서의 표적 막 단백질 입자의 위치 좌표, (xN,yN): 하나의 궤적의 종료점에서의 표적 막 단백질 입자의 위치 좌표
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제1항에 있어서, 상기 확산계수의 변화는 하기 수학식 3을 이용하여 얻어지는 것인 방법:[수학식 3]확산계수의 변화(%)= 100*|1-(Dc2/Dc1)|상기 식에서, Dc1은 세포 주변환경의 후보물질 농도 c1 에서의 표적 막 단백질의 단일 세포 수준에서의 확산계수, Dc2는 세포 주변환경의 후보물질 농도 c2에서의 표적 막 단백질의 단일 세포 수준에서의 확산계수이다
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제7항에 있어서, 상기 수학식 3에서 얻어진 확산계수의 변화(%)가 2% 이상인 경우 상기 후보물질을 표적 막 단백질과 결합하는 리간드로 결정하는 것인 방법
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제5항에 있어서, 막 단백질의 세포막 내 이동의 탐지는 표적 막 단백질과 형광 단백질의 융합 단백질을 발현하는 세포에서 상기 형광 단백질의 형광을 탐지함으로써 수행되는 것인 방법
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제9항에 있어서, 상기 형광 단백질은 GFP(Green Fluorescent Protein) 계열, BFP(Blue fluorescent protein) 계열, Cyan 계열, YFP(Yellow Fluorescent Protein) 계열, RFP(Red Fluorescent Protein) 계열, Orange 계열, Far-red 계열, Near-IR, 광활성 단백질(Photoactivatable protein), 광전환 단백질(Photoconvertible protein), 및 광스위치 단백질(Photoswitchable protein)로 이루어진 군으로부터 1종 이상 선택되는 것인 방법
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제9항에 있어서, 상기 형광 단백질은 EGFP(enhanced green fluorescent protein), Emerald, Superfolder GFP, Azami green mWasabi, TagGFP, AcGFP, T-sapphire, mUKG, Clover, mNeonGreen, EBFP(enhanced blue fluorescent protein), EBFP2, Azurite, mTagBFP, mKalama1, Sirius, ECFP(enhanced cyan fluorescent protein), mECFP(monomeric ECFP), Cerulean, mTurquoise, mTurquoise2, CyPet, TagCFP, mTFP1(Teal), SCFP3A, monomeric Midoriishi Cyan, EYFP(enhanced yellow fluorescent protein), Topaz, Benus, mCitrine, YPet, TagYFP, PhiYFP, mBanana, SYFP2, mRuby, mRuby2, mApple, mStrawberry, mRFP1, mCherry, mRaspberry, dKeima-Tandem(monomeric version), HcRed-Tandem(monomeric version), mPlum, mKate2, mNeptune, mKate2, mNeptune, TagRFP657, IFP1
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제1항에 있어서, 표적 막 단백질과 형광 단백질의 융합 단백질을 발현하는 세포는 HEK(human embryonic kidney) 세포, HEK 293 세포, 3T3-L1 세포, C6 세포, CHO (Chinese hamster ovary) 세포, CHO？K1 세포, NIH/3T3 세포, BHK(baby hamster kidney) 세포, COS1 세포, COS7 세포, HaCaT 세포, HeLa 세포, HeLa S3 세포, HepG2 세포, HL-60 세포, HUV-EC-C 세포, Jurkat 세포, K-562 세포, L6 세포, MCF7 세포, MDCK 세포, NIH/3T3 세포, RAW 264
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제5항에 있어서, 막 단백질의 세포막 내 이동의 탐지는 형광물질이 결합되어 있고, 표적 막 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 프로브에 의해 수행되는 것인 방법
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제13항에 있어서,상기 프로브는 항체 압타머, 또는 비항체 단백질 골격(non-antibody protein scaffold)인 방법
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제13항에 있어서,상기 형광물질은 유기형광염료인 방법
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제15항에 있어서, 상기 유기형광염료는 Atto 488, Alexa Flour 488, Dy505, Rhodamine 123, Atto 520, Dy 530, ATTO 532, Alexa Fluor 532, Fluorescein, FITC, Cy2, Cy3B, Alexa Flour 568, TAMRA, Cy3, Cy3
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제1항에 있어서, 후보물질 처리 후의 표적 막 단백질의 확산계수를 여러 시점에서 구하고, 이를 통해 얻어진 하나 이상의 표적 막 단백질의 확산계수의 변화를 경시적으로 분석하는 단계를 추가로 포함하는 방법
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제17항에 있어서,표적 막 단백질의 확산계수의 변화를 경시적으로 분석함으로써 막 단백질 특이적 세포내섭취(endocytosis)의 유무를 판단하는 단계를 추가로 포함하는 방법
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제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따라 후보물질과 표적 막 단백질의 결합양상을 분석하는 단계; 및상기 결합양상을 이용하여 상기 후보물질 중에서 상기 표적 막 단백질에 특이적으로 작용하는 약물을 결정하는 단계를 포함하는, 표적 막 단백질에 대한 약물을 스크리닝 하는 방법
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