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1) 인간 다능성 줄기세포(Human pluripotent stem cells; hPSCs)를 인슐린 분비 내분비 세포(endocrine cell; EC)로 분화시키는 단계; 및2) 단계 1)에서 분화가 완료된 인슐린 분비 내분비 세포를 내분비 응집체(endocrine aggregate; EA)로 3D 클러스터링(3D clustering)하는 단계를 포함하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포(insulin-producing beta cells)의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 1항에 있어서, 단계 1)의 인간 다능성 줄기세포는 인간 배아줄기세포(human embryonic stem cells; hESCs) 또는 인간 유도 역분화 줄기세포(human induced pluripotent stem cells; hiPSCs)인 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 1항에 있어서, 단계 1)의 분화는a) 인간 다능성 줄기세포(hPSCs)로부터 완전 내배엽(definitive endoderm; DE)으로 분화를 유도하는 단계;b) 상기 단계 a)의 완전 내배엽으로부터 췌장 내배엽(Pancreatic Endoderm; PE)으로 분화를 유도하는 단계;c) 상기 단계 b)의 췌장 내배엽으로부터 인슐린 분비 내분비 전구세포(endocrine progenitor; EP)로 분화를 유도하는 단계; 및d) 상기 단계 c)의 인슐린 분비 내분비 전구세포로부터 인슐린 분비 내분비 세포(EC)로 분화를 유도하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 3항에 있어서, 단계 a)는 인간 다능성 줄기세포(hPSCs)를 액티빈 A(Activin A), CHIR99021 및 LiCl이 포함된 DMEM/F12 배지에 BSA 또는 B27를 처리하여 배양함으로써 완전 내배엽(DE)으로 분화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 3항에 있어서, 단계 b)는 완전 내배엽(DE)을 RA(retinoic acid), 도소모르핀(dorsomorphin; DM), SB431542, 액티빈 A, bFGF(basic fibroblast growth factor) 및 캐드-시클로파민(Kaad-cyclopamine)이 포함된 DMEM 배지에 B27을 처리하여 배양함으로써 췌장 내배엽(PE)으로 분화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 3항에 있어서, 단계 c)는 췌장 내배엽(PE)을 도소모르핀, SB431542 및 DAPT이 포함된 DMEM 배지에 B27 및 아스코르브산(ascorbic acid)를 처리하여 배양함으로써 인슐린 분비 내분비 전구세포(EP)로 분화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 3항에 있어서, 단계 d)는 인슐린 분비 내분비 전구세포(EP)를 dbcAMP, 엑센딘-4(Exendin-4), 도소모르핀, SB431542 및 니코틴산아미드(Nicotinamide)가 포함된 CMRL 배지에 B27, 아스코르브산 및 D-글루코스(D-glucose)를 처리하여 배양함으로써 인슐린 분비 내분비 세포(EC)로 분화를 유도하는 것을 특징으로 하는, 인간 다능성 줄기세포로부터 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체의 제조 방법
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제 1항의 제조 방법으로 제조된, 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체
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제 8항에 있어서, 상기 내분비 응집체는 생체 외에서 글루코스(glucose) 또는 KCl 자극에 반응하여 인슐린 전구체인 C-펩티드(C-peptide)의 분비량이 증가되는 것을 특징으로 하는, 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체
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제 8항에 있어서, 상기 내분비 응집체는 생체 내에 이식되어 글루코스(glucose) 양의 항상성을 조절하는 것을 특징으로 하는, 인슐린 생산 베타 세포의 내분비 응집체
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제 8항의 응집체를 유효성분으로 함유하는 당뇨병 치료용 약학적 조성물
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1) 피검물질을 제 8항의 응집체에 처리하는 단계; 및2) 상기 응집체를 분석하는 단계를 포함하는, 당뇨병 치료제 스크리닝 또는 효능 검증 방법
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