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펩티드 아미노기 치환용 화합물 엔－메틸피페라진 아세트산의 동위 이성질체 및 질량 분석기를 이용한 펩티드 정량 방법

  • 기술번호 : KST2015121750
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약 본 발명은 펩티드 아미노기 치환용 화합물 엔－메틸 피페라진 아세트산의 동위 이성질체 및 질량 분석기를 이용한 펩티드 정량 방법으로, 두 개의 단백질 또는 펩티드 복합체에서 개별 단백질 또는 펩티드를 동정하면서 동시에 상대정량하는 방법에 관한 것이다. 구체적으로 엔-메틸피페라진 아세트산 엔-하이드록시숙시마이드 에스테르(N-methylpiperazine acetic acid N-hydroxysuccimide ester)및 이의 동위이성질체(isotopologue)를 준비하고 비교하고자 하는 시료가 단백질 복합체인 경우 따로따로 단백질 분해효소를 이용하여 펩티드로 절단한 뒤, 펩티드 복합체 각각에 대해 상기 시약의 서로 다른 isotopologue로 표지한 다음, 서로 섞어서 질량분석기를 이용하여 질량분석 스펙트럼과 탠덤질량분석스펙트럼을 번갈아가며 스캔하여, 일반 질량분석스펙트럼에서는 개별 펩티드의 isotopologue 유도체 신호세기의 값으로 상대정량하고, 탠덤질량분석스펙트럼으로는 해당 펩티드를 동정하므로써 처음 단백질복합체 또는 펩티드복합체 시료에 들어 있는 개별단백질 또는 펩티드의 양을 시료간에 서로 상대비교할 수 있게 하는 방법이다. 본 발명의 새로운 방법은 기존 방법의 단점을 보완한 효과적인 방법으로 탠덤질량분석스펙트럼상에서 b형 이온과 y형 이온이 골고루 나오게 하여 높은 신뢰도의 동정과 정량을 가능케 한다.　
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) B01D 59/44 (2006.01)
CPC G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01)
출원번호/일자 1020100041323 (2010.05.03)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2011-0121842 (2011.11.09) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.05.03)
심사청구항수 6

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이철주 대한민국 서울특별시 광진구
2 강운범 대한민국 경기도 성남시 중원구
3 염정훈 대한민국 경기도 남양주시
4 신동윤 대한민국 서울특별시 강남구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 리앤목특허법인 대한민국 서울 강남구 언주로 **길 **, *층, **층, **층, **층(도곡동, 대림아크로텔)

최종권리자

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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2010.05.03 수리 (Accepted) 1-1-2010-0285149-82
2 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2011.04.19 수리 (Accepted) 1-1-2011-0290237-54
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2011.05.18 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2011.06.14 수리 (Accepted) 9-1-2011-0048458-25
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.10.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0631013-35
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.12.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-1046150-03
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.12.28 수리 (Accepted) 1-1-2011-1046148-11
8 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2012.05.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0292137-14
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2012.07.18 수리 (Accepted) 1-1-2012-0575242-79
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.07.18 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0575245-16
11 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2012.11.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0719648-82
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.19 수리 (Accepted) 4-1-2014-5022002-69
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번호 청구항
1 1
1) 피검시료에 단백질 분해효소를 처리하여 펩티드로 절단하는 단계;2) 하기의 [화학식 1]로 기재되는 화합물의 구성원소 중 C, N, O 또는 H의 일부 또는 전부가 13C, 15N, 18O 또는 2H로 치환된 동위 이성질체(isotopologue) 화합물을 제조하는 단계;[화학식 1],이때, R은 카르복실산을 보호하는 보호기;3) 단계 1)에서 절단된 두 가지 이상의 펩티드 시료에 서로 다른 상기 단계 2)에서 제조된 동위 이성질체 화합물을 각각 처리하여 표지하는 단계;4) 표지된 펩티드 시료를 혼합하는 단계;5) 혼합된 시료를 질량분석장치를 이용하여 MS 스펙트럼 및 MS/MS 스펙트럼을 스캔하는 단계; 및6) MS/MS 스펙트럼을 분석하여 펩티드를 동정 및 정량하는 단계를 포함하는 엔-메틸피페라진 아세트산 표지 치환을 이용한 펩티드 정량 방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 단백질 분해효소는 트립신(trypsin)인 것을 특징으로 하는 펩티드 정량 방법
3 3
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 [화학식 1]에서 R 잔기는 카르복실산을 보호하는 보호기로써, 메틸, 벤질, t-부틸, 트리메디실린, 디클로로페놀(2,3-dichlorophenol), 테트라플로로페놀(2,3,5,6-tetrafluorophenol), 테트라플로로설포페놀(2,3,5,6-tetrafluoro-4-sulfophenol), 엔-하이드록시숙시마이드(N-hydroxysuccimide) 또는 엔-하이드록시설포숙시마이드(N-hydroxysulfosuccinimide)로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 펩티드 정량 방법
4 4
제 3항에 있어서, 상기 R 잔기는 엔-하이드록시숙시마이드(N-hydroxysuccimide)인 것을 특징으로 하는 펩티드 정량 방법
5 5
제 1항에 있어서, 단계 4)의 질량분석장치는 MALDI 또는 ESI인 것을 특징으로 하는 펩티드 정량 방법
6 6
제 1항에 있어서, 단계 6)의 분석은 상업적으로 입수 가능한 소프트웨어 프로그램 또는 데이터베이스를 이용하는 것을 특징으로 하는 펩티드 정량 방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 프로테오믹스이용기술개발사업단 21C 프런티어 프로테오믹스이용기술 개발사업 대장암, 유방암의 진단 및 모니터링을 위한 단백질표지 개발