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서열번호 1로 이루어진 마이코플라즈마 알기니(Mycoplasma arginini) 유전자에 특이적인 PNA 프로브;서열번호 2로 이루어진 마이코플라즈마 퍼멘턴스(Mycoplasma fermentans) 유전자에 특이적인 PNA 프로브; 및서열번호 3으로 이루어진 마이코플라즈마 오레일(Mycoplasma orale) 유전자에 특이적인 PNA 프로브;를 모두 포함하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출용 PNA 프로브 세트
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제1항에 있어서,상기 PNA 프로브는 리포터 물질(reporter molecule) 및 소광물질(quencher molecule)을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출용 PNA 프로브 세트
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제2항에 있어서,상기 리포터 물질은 FAM( 6-carboxyfluorescein), HEX(2', 4', 5', 7'-tetrachloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), 플루오레신(fluorescein), 플루오레신 클로로트리아지닐(fluorescein chlorotriazinyl), 로다민 그린(rhodamine green), 로다민 레드(rhodamine red), TRITC(tetramethyl rhodamine isothiocyanate), FITC(fluorescein isothiocyanate), 오레곤 그린(Oregon green), 알렉사 플루오로(Alexa Fluor), JOE(6-carboxy-4', 5'-dichloro-2', 7'-dimetoxyfluorescein), ROX(6-carboxy-X-rhodamine), 텍사스 레드(Texas Red), TET(2', 7'-dichloro-6-carboxy-4,7-dichlorofluorescein), TAMRA(N,N,N',N'-tetramethyl-6-carboxyrhodamine), 시아닌(Cyanine) 계열 염료 및 씨아디카르보시아닌(thiadicarbocyanine) 염료로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출용 PNA 프로브 세트
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제2항에 있어서,상기 소광물질은 답실(Dabcyl), 카르복시테트라메틸로다민(TAMRA), 이클립스(Eclipse), 딥 다크 퀸처(DDQ), QSY, 블랙베리 퀸처(Blackberry Quencher), 블랙홀 퀸처(Black Hole Quencher), 아이오와 블랙 FQ(Iowa black FQ), 아이오와 블랙 RQ(Iowa black RQ) 및 IRDye QC-1 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출용 PNA 프로브 세트
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대상 시료에서 DNA를 분리하는 단계;상기 분리된 DNA를 주형으로 PCR(polymerase chain reaction)을 수행하여 표적 서열을 증폭하는 단계;상기 PCR 증폭 산물에 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 PNA 프로브 세트를 주입하고 real-time PCR을 시키는 단계;온도를 변화시키면서 상기 real-time PCR에 의해 증폭된 증폭산물을 융해시켜 융해곡선을 얻는 단계; 및상기 융해곡선의 융해온도를 확인하여 마이코플라즈마를 동정하는 단계;를 포함하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출 방법
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제5항에 있어서,상기 PCR은 서열번호 4 및 서열번호 5로 이루어진 프라이머 세트를 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제5항에 있어서,상기 PCR은 비대칭PCR(Asymmetric PCR)로 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제7항에 있어서,상기 비대칭 PCR은 역방향 프라이머를 정방향 프라이머에 비해 9배 내지 11배로 더 넣어 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제5항에 있어서,상기 융해곡선을 얻는 단계는 온도를 증가시키면서 형광세기를 측정하여, 온도 대비 형광 값을 분석하여 얻는 것을 특징으로 하는 방법
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제9항에 있어서,상기 형광세기의 측정은 25℃ 내지 80℃로 온도를 증가시키면서 측정하는 것을 특징으로 하는 방법
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제5항에 있어서,상기 융해온도가 45~47 ℃ 인 경우, 마이코플라즈마 오레일;상기 융해온도가 66~68 ℃ 인 경우, 마이코플라즈마 알기니; 및상기 융해온도가 71~73 ℃ 인 경우, 마이코플라즈마 퍼멘턴스로 판별하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 프로브 세트를 포함하는 마이코플라즈마 알기니, 마이코플라즈마 퍼멘턴스 및 마이코플라즈마 오레일 동시 검출용 키트
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