| 1 |
1
다음을 포함하는 시험관내 또는 생체외 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위 교정용 조성물:(a) RNA-유도 엔도뉴클레아제 또는 RNA-유도 엔도뉴클레아제 인코딩 뉴클레오타이드; 및 (b) 다음의 뉴클레오타이드 서열 또는 이들의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 유도 RNA(guiding RNA) 또는 상기 유도 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드:(ⅰ)서열목록 제 1 서열의 뉴클레오타이드 서열; (ⅱ)서열목록 제 2 서열의 뉴클레오타이드 서열; 및 (ⅲ) F8 유전자의 22번 인트론 상의 상기 (ⅰ) 및 상기 (ⅱ) 사이의 562,975bp 길이의 뉴클레오타이드 내에 존재하는 15-25 bp 뉴클레오타이드 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 한 쌍의 뉴클레오타이드 서열로서, 상기 (ⅲ)은 상기 (ⅰ) 및 상기 (ⅱ) 사이의 562,975bp 길이의 뉴클레오타이드 내에서 상기 (ⅰ) 또는 상기 (ⅱ)과 각각 80% 이상의 서열 유사성(sequence homology)을 가지는 뉴클레오타이드 서열이 존재하지 않으며, 동시에 다운스트림에 5’-N(G/A)G-3’뉴클레오타이드가 연결된 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 2 |
2
제 1 항에 있어서, 상기 RNA-유도 엔도뉴클레아제는 Cas9(CRISPR associated protein 9)인 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 3 |
3
제 1 항에 있어서, 상기 유도 RNA(guiding RNA)는 상기 서열목록 제 1 서열의 뉴클레오타이드 서열 및 상기 서열목록 제 2 서열의 뉴클레오타이드 서열 또는 이들의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 유도 RNA(guiding RNA)인 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 4 |
4
제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 22번 인트론에서 발생하는 역위를 교정하는 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 5 |
5
다음을 포함하는 시험관내 또는 생체외 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위 교정용 조성물:(a) RNA-유도 엔도뉴클레아제 또는 RNA-유도 엔도뉴클레아제 인코딩 뉴클레오타이드; 및 (b) 서열목록 제4서열의 뉴클레오타이드 서열 내에 포함되는 15-25 bp 길이의 뉴클레오타이드 서열로서 상기 서열목록 제4서열의 뉴클레오타이드 서열 내에 상기 서열목록 제4서열과 80% 이상의 서열 유사성(sequence homology)을 가지는 뉴클레오타이드 서열이 존재하지 않으며, 동시에 다운스트림에 5’-N(G/A)G-3’뉴클레오타이드가 연결된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 유도 RNA(guiding RNA) 또는 상기 유도 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드
|
| 6 |
6
제 5 항에 있어서, 상기 유도 RNA는 서열목록 제 3 서열의 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 7 |
7
제 5 항에 있어서, 상기 RNA-유도 엔도뉴클레아제는 Cas9(CRISPR associated protein 9)인 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 8 |
8
제 5 항에 있어서, 상기 조성물은 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 1번 인트론에서 발생하는 역위를 교정하는 조성물
|
| 9 |
9
다음 단계를 포함하는 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위가 교정된 유도만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell)의 제조방법:(a) A형 혈우병 환자로부터 분리된 체세포를 역분화시켜 유도만능 줄기세포를 수득하는 단계; (b) 상기 유도만능 줄기세포를 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 조성물과 접촉시키거나 상기 조성물이 삽입된 유전자 전달체로 형질전환시키는 단계
|
| 10 |
10
제 9 항에 있어서, 상기 단계 (a)는 상기 A형 혈우병 환자로부터 분리된 체세포에 OCT4, NANOG, SOX2, LIN28, KLF4 및 c-MYC로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자를 형질전환함으로써 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법
|
| 11 |
11
제 9 항의 방법에 의하여 제조된 유도만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell)
|
| 12 |
12
제 11 항의 유도만능 줄기세포(induced pluripotent stem cell)를 유효성분으로 포함하는 A형 혈우병 치료용 조성물
|
| 13 |
13
다음을 포함하는 시험관내 또는 생체외 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위 유도용 조성물:(a) RNA-유도 엔도뉴클레아제 또는 RNA-유도 엔도뉴클레아제 인코딩 뉴클레오타이드; 및 (b) 다음의 뉴클레오타이드 서열 또는 이들의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 유도 RNA(guiding RNA) 또는 상기 유도 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드:(ⅰ)서열목록 제 1 서열의 뉴클레오타이드 서열; (ⅱ)서열목록 제 2 서열의 뉴클레오타이드 서열; 및 (ⅲ) F8 유전자의 22번 인트론 상의 상기 (ⅰ) 및 상기 (ⅱ) 사이의 562,975bp 길이의 뉴클레오타이드 내에 존재하는 15-25 bp 뉴클레오타이드 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 한 쌍의 뉴클레오타이드 서열로서, 상기 (ⅲ)은 상기 (ⅰ) 및 상기 (ⅱ) 사이의 562,975bp 길이의 뉴클레오타이드 내에서 상기 (ⅰ) 또는 상기 (ⅱ)과 각각 80% 이상의 서열 유사성(sequence homology)을 가지는 뉴클레오타이드 서열이 존재하지 않으며, 동시에 다운스트림에 5’-N(G/A)G-3’뉴클레오타이드가 연결된 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 14 |
14
다음을 포함하는 시험관내 또는 생체외 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위 유도용 조성물:(a) RNA-유도 엔도뉴클레아제 또는 RNA-유도 엔도뉴클레아제 인코딩 뉴클레오타이드; 및 (b) 서열목록 제4서열의 뉴클레오타이드 서열 내에 포함되는 15-25 bp 길이의 뉴클레오타이드 서열로서 상기 서열목록 제4서열의 뉴클레오타이드 서열 내에 상기 서열목록 제4서열과 80% 이상의 서열 유사성(sequence homology)을 가지는 뉴클레오타이드 서열이 존재하지 않으며, 동시에 다운스트림에 5’-N(G/A)G-3’뉴클레오타이드가 연결된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 유도 RNA(guiding RNA) 또는 상기 유도 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드
|
| 15 |
15
제 14 항에 있어서, 상기 유도 RNA는 서열목록 제 3 서열의 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 상보적인 서열을 특이적으로 인식하는 것을 특징으로 하는 조성물
|
| 16 |
16
제 13 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항의 조성물을 정상인으로부터 분리된 체세포에 도입하는 단계를 포함하는 혈액 응고인자 Ⅷ(F8) 유전자의 역위 유도 방법
|
