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차세대 시퀀싱 기반 재조합 단백질 발현을 위한 세포 내 핫스팟 영역 탐색 방법(Exploring hotspot method for expression of recombinant protein in cell line using next-generation sequencing)

  • 기술번호 : KST2018003394
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명자들은 재조합 유전자 고발현을 위한 CHO 세포 핫스팟 영역 탐색 방법을 고안하기 위해, 강화된 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; eGFP)을 발현하는 벡터를 유전체 내 통합한 CHO 세포주를 구축하였으며, GFP를 고발현하는 CHO 세포주를 자동 세포 침착 장치를 갖춘 유세포 분석기를 통해 1차 분리하고, 한계 희석법을 통한 단일 클론 획득으로 2차 분리한 후 타겟 PCR을 통하여 eGFP 유전자의 삽입 위치를 증폭하고 차세대 시퀀싱을 통하여 해당 유전자 삽입 위치의 서열을 획득하였으며, 서열 분석을 통한 핫스팟 영역을 찾아내었다.
Int. CL C12Q 1/68 (2018.01.01) C12N 15/65 (2006.01.01) C12N 15/86 (2006.01.01) G06F 19/22 (2017.01.01) G01N 15/14 (2006.01.01) G01N 15/00 (2017.01.01)
CPC C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01)
출원번호/일자 1020160119851 (2016.09.20)
출원인 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단, 한국과학기술원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2018-0031875 (2018.03.29) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2017.12.14)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단 대한민국 대전광역시 유성구
2 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 조병관 대한민국 대전광역시 유성구
2 이남일 대한민국 대전광역시 유성구
3 신종오 대한민국 대전광역시 유성구
4 이균민 대한민국 대전광역시 유성구
5 박진형 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단 대한민국 대전광역시 유성구
2 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.09.20 수리 (Accepted) 1-1-2016-0907898-91
2 [출원인변경]권리관계변경신고서
[Change of Applicant] Report on Change of Proprietary Status		 2017.02.09 수리 (Accepted) 1-1-2017-0135261-11
3 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2017.12.14 수리 (Accepted) 1-1-2017-1247904-43
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2018.04.04 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2018.05.31 수리 (Accepted) 9-1-2018-0024253-74
6 등록결정서
Decision to grant		 2018.12.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2018-0872094-16
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
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번호 청구항
1 1
1) 형광 단백질을 암호화하는 유전자가 삽입된 벡터를 숙주 세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계;2) 상기 단계 1)의 형광 단백질을 고발현하는 단일 클론을 선별하는 단계;3) 상기 단계 2)의 단일 클론으로부터 DNA를 추출하는 단계;4) 상기 단계 3)의 DNA를 하기의 프라이머 세트를 이용하여 순차적으로 증폭시켜 정제 산물을 제조하는 단계; 및a
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 5)의 염기서열 분석은 하기의 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법:i) 차세대 시퀀싱을 통해 리드(Reads)를 생성하고 상기 청구항 제 1항의 단계 1)의 벡터 및 숙주 세포의 유전체 서열을 동시에 가지는 리드(Reads)를 선별하는 단계; 및ii) 상기 단계 i)에서 선별된 리드(Reads)를 상기 청구항 제 1항의 단계 1)의 숙주 세포 유전체 스캐폴드에 맵핑(mapping)하여 분석하는 단계
3 3
제 1항에 있어서, 상기 형광 단백질은 그린 형광 단백질(green fluorescent protein; GFP), 레드 형광 단백질(red fluorescent protein; RFP), 블루 형광 단백질(blue fluorescent protein; BFP), 옐로우 형광 단백질(yellow fluorescent protein; YFP), 시안 형광 단백질(CFP; cyan fluorescent protein) 및 강화된 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; EGFP)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 벡터는 레트로 바이러스, 아데노 바이러스, 아데노 부속 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스 및 렌티바이러스로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
5 5
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 숙주 세포는 CHO(chinese hamster ovary), BHK(baby hamster kidney) 또는 NSO 골수종 세포인 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
6 6
제 1항에 있어서 상기 단계 2)의 선별은, 유세포분석(flow cytometry)을 이용하는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
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제 2항에 있어서 상기 단계 i)의 차세대 시퀀싱은 Illumina 플랫폼을 이용하는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
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패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 한국과학기술원 원천기술개발사업 지능형 바이오 시스템에 의한 고품질 항체 의약품 생산성 극대화(1차년도)
2 미래창조과학부 한국과학기술원 원천기술개발사업 CHO 세포 당대사 엔지니어링을 통한 글리칸 변이체 제작 원천기술 개발(2015)