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암 줄기세포 특이적 세포막 단백체 및 항체 발굴 방법 및 그 응용

  • 기술번호 : KST2020016971
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 a) 암 줄기세포주에 파지디스플레이 기법으로 바이오패닝을 진행하고, 바이오패닝으로 각 라운드별로 확보한 파지항체 풀(pool)을 각각 발현시킨 후 암 줄기세포 및 정상 세포에 대한 결합력을 분석하고, b) 상기 항체 풀로부터 싱글 콜로니를 분리하여 각 단일클론 항체의 암 줄기세포주에 대한 결합력을 분석하여 정상세포에는 결합하지 않으면서 암 세포주에만 특이적으로 결합하는 단일클론 항체를 선별하고, c) 상기 선별된 항체는 파지-단쇄가변분절(scFv)에서 전체(whole) IgG와 유사한 기능을 하는 scFv-고정부위(Fc) 항체 형태로 제작하고, d) 암 줄기세포 및 암세포에 IgG 또는 상기 scFv-Fc항체를 넣고 항체결합 반응을 진행한 후 암 줄기세포 및 암세포 파쇄액을 획득한 후 상층액을 분리하고, 분리한 상층액은 풀 다운(pull down)을 진행한 후 정제된 세포표면 단백체-항체 결합체를 분리하고, 획득한 세포표면 단백체-항체 결합체 샘플은 분석하여 암 줄기세포 항체가 인식하는 특이적 암 줄기세포막 단백질을 동정하는 것을 포함하는 암줄기세포에 결합하는 항체 발굴과 암줄기세포에 대한 의약품이 될만한(druggable) 타겟 단백질을 동시에 검출하는 방법에 관한 것이다.
Int. CL G01N 33/68 (2006.01.01) G01N 33/569 (2017.01.01) G01N 33/50 (2017.01.01) G01N 30/72 (2006.01.01) C07K 16/28 (2006.01.01)
CPC G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01) G01N 33/6854(2013.01)
출원번호/일자 1020190057048 (2019.05.15)
출원인 강원대학교산학협력단
등록번호/일자 10-2185755-0000 (2020.11.26)
공개번호/일자 10-2020-0132109 (2020.11.25) 문서열기
공고번호/일자 (20201202) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 국내출원/신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2019.05.15)
심사청구항수 11

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 강원대학교산학협력단 대한민국 강원도 춘천시

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김미경 강원도 춘천시 후석로 ***
2 김은희 강원도 춘천시 우석로*
3 이정현 경기도 의정부시 신흥로 ***번

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인키 대한민국 서울특별시 서초구 강남대로**길 **-**(서초동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 강원대학교 산학협력단 강원도 춘천시
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2019.05.15 수리 (Accepted) 1-1-2019-0497586-14
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.11.05 수리 (Accepted) 4-1-2019-5230938-29
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2019.12.10 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2020.01.08 수리 (Accepted) 9-1-2020-0000738-13
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2020.05.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0343079-15
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견서·답변서·소명서
2020.07.16 수리 (Accepted) 1-1-2020-0739552-96
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.07.16 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0739558-69
8 등록결정서
Decision to grant
2020.11.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0822164-56
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
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a) 암 줄기세포주에 파지디스플레이 기법으로 바이오패닝을 진행하고, 바이오패닝으로 각 라운드별로 확보한 파지항체 풀(pool)을 각각 발현시킨 후 암 줄기세포 및 정상 세포에 대한 결합력을 분석하고,b) 상기 항체 풀로부터 싱글 콜로니를 분리하여 각 단일클론 항체의 암 줄기세포주에 대한 결합력을 분석하여 정상세포에는 결합하지 않으면서 암 줄기세포 및/또는 암 세포주에만 특이적으로 결합하거나 정상세포보다 암 줄기세포 및/또는 암 세포주에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체를 선별하고,c) 상기 선별된 항체는 파지-단쇄가변분절(scFv)에서 전체(whole) IgG와 유사한 기능을 하는 항체 또는 그 기능적 단편 형태로 제작하고,d) 암 줄기세포 및 암세포에 IgG 또는 상기 기능적 단편을 넣고 항체결합 반응을 진행한 후 암 줄기세포 및 암세포 파쇄액을 획득한 후 상층액을 분리하고, 정제된 세포표면 단백체-항체 결합체를 분리하고, 획득한 세포표면 단백체-항체 결합체 샘플은 분석하여 암 줄기세포 항체가 인식하는 특이적 암 줄기세포막 단백질을 동정하는 것을 포함하고,여기서 상기 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체와 암 줄기세포막 타겟 단백질은 액체크로마토그래피 질량분석기(LC-MS/MS)로 분석하는 것을 특징으로 하는 암줄기세포에 결합하는 항체 발굴과 암줄기세포에 대한 진단 및/또는 의약품이 될만한(druggable) 타겟 단백질을 동시에 검출하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 정상세포는 말초 혈액 단핵세포(PBMC) 세포인 것을 특징으로 하는 방법
3 3
제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 결합력 분석은 유동세포 분석법으로 수행한 것을 특징으로 하는 방법
4 4
제1항에 있어서, 상기 c) 단계는 항체의 기능적 단편을 PCR기법으로 증폭하고 동물세포 발현용 벡터에 상기 기능적 단편으로 서브-클로닝한 후 발현하거나 항체 또는 그 기능적 단편과 태그가 결합된 것을 대장균에서 발현한 후 각각의 항체 또는 기능적 단편을 정제하는 것을 특징으로 하는 방법
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삭제
6 6
제1항에 있어서, 상기 암 줄기세포막 타겟 단백질은 CD44, 또는 CD71인 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 암 줄기세포막 타겟 단백질이 CD44인 경우에 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체는 3C7항체인 것을 특징으로 하는 방법
8 8
제1항 또는 제7항에 있어서, 상기 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체는 3C7항체이고, 상기 3C7항체는 서열번호 1로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 2로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 3으로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 4로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 5로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 6으로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 단클론 항체, 또는 그 기능적 단편인 것을 특징으로 하는 방법
9 9
제1항에 있어서, 상기 암 줄기세포막 타겟 단백질이 CD71인 경우에 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체는 1E12항체 또는 2E1항체인 것을 특징으로 하는 방법
10 10
제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체는 1E12항체이고, 상기 1E12항체는 서열번호 7로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 8로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 9로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 11로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 12로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 단클론 항체, 또는 그 기능적 단편인 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제1항 또는 제9항에 있어서, 상기 선별된 암 줄기세포에 특이적인 항체는 2E1항체이고, 상기 2E1 항체는 서열번호 13으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 14로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 15로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 16으로 기재되는 CDR1 영역, 서열번호 17로 기재되는 CDR2 영역 및 서열번호 18로 기재되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄를 포함하는 단클론 항체, 또는 그 기능적 단편인 것을 특징으로 하는 방법
12 12
제1항의 방법의 암 줄기세포 대신 암세포, 염증 질환 및 자가면역질환을 포함한 다른 특이적 질환에 대한 세포 및 줄기세포를 사용하여 해당 질환 세포에 결합하는 항체 발굴과 해당 질환의 세포에 대한 진단 및 치료 의약품이 될만한(druggable) 타겟 단백질을 동시에 검출하는 방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육부 강원대학교 산학협력단 이공학 개인 기초 연구 항암제 내성기전관련 암줄기세포 특이적 세포막 단백체 발굴 및 이를 응용한 항암내성 치료법 개발 연구
2 교육부 강원대학교 산학협력단 이공학 개인 기초 연구 염증질환관련 basigin의 발현 기전과 기능 연구 및 이를 적용한 신규 의약품 개발