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다음을 포함하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법: 링커를 포함하는 제1 조성물; Fc 결합성 펩타이드를 포함하는 제2 조성물; 및 항체를 포함하는 제3 조성물을 혼합함,이때, 상기 링커 및 상기 Fc 결합성 펩타이드 각각은 하기의 (a) 및 (b)로 표현됨:(a) 하기의 화학식 2의 구조를 갖는 링커: [화학식 2] 여기서, X는 O, N 및 S 중 어느 하나이고, R'은 에스터 그룹 활성화 잔기이고, R''은 사이클로알킨, 및 사이클로알켄 중 선택되는 어느 하나이며, 및 R'''은 치환 또는 비치환된 C1-20 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C2-20 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 알키닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 폴리메틸렌, 치환 또는 비치환된 C5-12 아릴, 치환 또는 비치환된 C5-14 아릴 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C8-16 아릴 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 사이클로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 헤테로사이클로알킬렌, 또는 치환 또는 비치환된 C5-12 헤테로아릴이며, 상기 헤테로알킬렌, 헤테로사이클로알킬렌 또는 헤테로아릴은 N, O 또는 S가 적어도 하나 이상 포함되고, 이때, 상기 치환은 비수소 치환기로 치환된 것으로, 상기 비수소 치환기는 -Ra, -O-, =O, -ORa, -SRa, -S-, -N(Ra)2, =NRa, -C(Rb)3, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N-OH, =N2, -N3, -NHC(=O)Ra, -C(=O)Ra, -C(=O)NRaRa -S(=O)2O-, -S(=O)2OH, -S(=O)2Ra, -OS(=O)2ORa, -S(=O)2NRa, -S(=O)Ra, -C(=O)Ra, 알킬렌-C(=O)Ra, -C(=S)Ra, -C(=O)ORa, 알킬렌-C(=O)ORa, -C(=O)O-, 알킬렌-C(=O)O-, -C(=S)ORa, -C(=O)SRa, -C(=S)SRa, -C(=O)NRaRa, 알킬렌-C(=O)NRaRa, -C(=S)NRaRa, -C(-NRa)NRaRa 및 Rb로 이루어진 군으로부터 하나 이상 선택될 수 있고, 여기서, 상기 Ra는 H, C1-6 알킬, C5-12 아릴, C7-12 아릴알킬 또는 헤테로사이클이고, 및 여기서, 상기 Rb은 F, Cl, Br, 또는 I임; 및 (b) 하기의 화학식 13의 구조를 갖는 Fc 결합성 펩타이드: [화학식 13] D-C-A-W-H-Xa-G-E-L-V-W-C-T 여기서, D는 아스파르트산이고, C는 시스테인이며, A는 알라닌이고, W는 트립토판이며, H는 히스티딘이고, Xa는 이며, G는 글리신이고, E는 글루탐산이며, L은 류신이고, V는 발린이며, 및 T는 트레오닌이며, 여기서, m은 1 이상 4 이하의 정수이고, N 말단의 시스테인과 C 말단의 시스테인은 서로 연결되어 있으며, 상기 Fc 결합성 펩타이드는 N 말단의 아미노산 또는 C 말단의 아미노산 잔기에 제1 클릭화학작용기를 포함하고, 상기 제1 클릭화학작용기는 아세틸렌(Acetylene), 트랜스사이클로옥텐(transcyclooctene), 사이클로옥타인(cyclooctyne), 다이아릴사이클로옥타인(dyarylcyclooctyne), 메틸 에스터 포스핀(methyl ester phosphine), 노르보레인(norbornene), 테트라진(tetrazine), 메틸사이클로프로펜(methylcyclopropene), 아제틴(azetine), 사이아나이드(cyanide), 아자이드(azide), 및 다이벤조사이클로옥틴(dibenzocyclooctyne) 중 어느 하나임
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제1항에 있어서, 상기 링커에서,X는 O 또는 S이고, R'은 N-히드록시석시니미드 기(N-Hydroxysuccinimide group), 파라-니트로페닐기(p-nitrophenyl group), 펜타 플루오로페닐기(pentafluorophenyl group), 또는 말레이미드기(maleimide group)이고, 및 R''' 은 비치환된 C1-6알킬렌, 비치환된 C2-6 알케닐렌, 비치환된 C2-6 알키닐렌, 또는 비치환된 C1-6 헤테로알킬렌이며, 상기 헤테로알킬렌은 N, O, 또는 S를 적어도 하나 이상 포함하는 것을 특징으로 하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 링커에서 X는 O인 것을 특징으로 하는제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 링커에서 R''은 노르보르넨(norbornene)인 것을 특징으로 하는 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 링커에서 R'''은 비치환된 C1-5 알킬렌 또는 비치환된 C1-5 헤테로알킬렌인 것을 특징으로 하는,제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 Fc 결합성 펩타이드는 화학식 14로 표현되는 화합물로 표현되는 것을 특징으로 하는,제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법:[화학식 14]D-C-A-W-H-K-G-E-L-V-W-C-T, 이때, K는 라이신임
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제1항에 있어서, 상기 방법은 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물을 혼합한 후, 상기 제3 조성물을 혼합하는 것을 특징으로 하고, 이때 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물이 혼합되어 제4 조성물이 제조되고,이때 상기 제4 조성물 및 상기 제3 조성물이 혼합되어 제5 조성물이 제조되는 것을 특징으로 하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제7항에 있어서, 상기 제1 조성물과 상기 제2 조성물의 혼합에서 상기 링커와 상기 Fc 결합성 펩타이드가 접촉하여 링커-Fc 결합성 펩타이드가 제조되며, 상기 제4 조성물은 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드를 포함하고, 이때, 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드는 하기의 화학식 4의 구조를 가지는 것을 특징으로 하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법:[화학식 4]이때, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며, 이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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제7항에 있어서, 상기 제4 조성물과 상기 제3 조성물의 혼합에서, 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드와 상기 항체가 접촉하여 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체가 제조되고, 상기 제5 조성물은 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체를 포함하고, 이때, 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체는 하기의 화학식 6의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법:[화학식 6]이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며,이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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제1항에 있어서, 상기 방법은 상기 제1 조성물 및 상기 제3 조성물을 혼합한 후, 상기 제2 조성물을 혼합하는 것을 특징으로 하고, 이때 상기 제1 조성물 및 상기 제3 조성밀이 혼합되어 제6 조성물이 제조되고,이때 상기 제6 조성물 및 상기 제2 조성물이 혼합되어 제7 조성물이 제조되는 것을 특징으로 하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법
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제10항에 있어서, 상기 제7 조성물은 하기의 화학식 6의 구조를 갖는 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법:[화학식 6]이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며,이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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다음을 포함하는 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법: 링커를 포함하는 제1 조성물; Fc 결합성 펩타이드를 포함하는 제2 조성물; 항체를 포함하는 제3 조성물; 및 페이로드를 포함하는 제4 조성물을 혼합함, 이때, 상기 링커, 상기 Fc 결합성 펩타이드, 및 상기 페이로드 각각은 하기의 (a), (b), 및 (c)로 표현됨:(a) 하기의 화학식 2의 구조를 갖는 링커: [화학식 2] 여기서, X는 O, N 및 S 중 어느 하나이고, R'은 에스터 그룹 활성화 잔기이고, R''은 사이클로알킨, 및 사이클로알켄 중 선택되는 어느 하나이며, 및 R'''은 치환 또는 비치환된 C1-20 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C2-20 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 알키닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 폴리메틸렌, 치환 또는 비치환된 C5-12 아릴, 치환 또는 비치환된 C5-14 아릴 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C8-16 아릴 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 사이클로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 헤테로사이클로알킬렌, 또는 치환 또는 비치환된 C5-12 헤테로아릴이며, 상기 헤테로알킬렌, 헤테로사이클로알킬렌 또는 헤테로아릴은 N, O 또는 S가 적어도 하나 이상 포함되고, 여기서, 상기 치환은 비수소 치환기로 치환된 것으로, 상기 비수소 치환기는 -Ra, -O-, =O, -ORa, -SRa, -S-, -N(Ra)2, =NRa, -C(Rb)3, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N-OH, =N2, -N3, -NHC(=O)Ra, -C(=O)Ra, -C(=O)NRaRa -S(=O)2O-, -S(=O)2OH, -S(=O)2Ra, -OS(=O)2ORa, -S(=O)2NRa, -S(=O)Ra, -C(=O)Ra, 알킬렌-C(=O)Ra, -C(=S)Ra, -C(=O)ORa, 알킬렌-C(=O)ORa, -C(=O)O-, 알킬렌-C(=O)O-, -C(=S)ORa, -C(=O)SRa, -C(=S)SRa, -C(=O)NRaRa, 알킬렌-C(=O)NRaRa, -C(=S)NRaRa, -C(-NRa)NRaRa 및 Rb로 이루어진 군으로부터 하나 이상 선택될 수 있고, 여기서, 상기 Ra는 H, C1-6 알킬, C5-12 아릴, C7-12 아릴알킬 또는 헤테로사이클이고, 및 여기서, 상기 Rb은 F, Cl, Br, 또는 I임;(b) 하기의 화학식 13의 구조를 갖는 Fc 결합성 펩타이드: [화학식 13] D-C-A-W-H-Xa-G-E-L-V-W-C-T 여기서, D는 아스파르트산이고, C는 시스테인이며, A는 알라닌이고, W는 트립토판이며, H는 히스티딘이고, Xa는 이며, G는 글리신이고, E는 글루탐산이며, L은 류신이고, V는 발린이며, 및 T는 트레오닌이며, 이때, m은 1 이상 4 이하의 정수이고, N 말단의 시스테인과 C 말단의 시스테인은 서로 연결되어 있으며, 여기서, 상기 Fc 결합성 펩타이드는 N 말단의 아미노산 또는 C 말단의 아미노산 잔기에 제1 클릭화학작용기를 포함하고, 이때 상기 제1 클릭화학작용기는 아세틸렌(Acetylene), 트랜스사이클로옥텐(transcyclooctene), 사이클로옥타인(cyclooctyne), 다이아릴사이클로옥타인(dyarylcyclooctyne), 메틸 에스터 포스핀(methyl ester phosphine), 노르보레인(norbornene), 테트라진(tetrazine), 메틸사이클로프로펜(methylcyclopropene), 아제틴(azetine), 사이아나이드(cyanide), 아자이드(azide), 및 다이벤조사이클로옥틴(dibenzocyclooctyne) 중 어느 하나임; 및 (c) 제2 클릭화학작용기를 포함하는 페이로드, 여기서 상기 제2 클릭화학작용기는 클릭화학반응을 하는 상기 제1 클릭화학작용기에 상보적인 작용기임
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제12항에 있어서, 상기 페이로드는 활성 모이어티(active moiety)를 포함하고, 이때 상기 활성 모이어티는 약물 분자, 이미징 모이어티, 광학 작용제, 비타민 및 독소 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법
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제12항에 있어서, 상기 페이로드는 하나 이상의 약물 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법
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제12항에 있어서,상기 페이로드는 둘 이상의 약물 분자를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법
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제12항에 있어서,상기 방법은 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물을 혼합한 후 상기 제3 조성물을 혼합하고, 이후에 상기 제4 조성물을 혼합하는 것을 특징으로 하고, 이때 상기 제1 조성물 및 상기 제2 조성물이 혼합되어 제5 조성물이 제조되고, 이때 상기 제5 조성물 및 상기 제3 조성물이 혼합되어 제6 조성물이 제조되고, 및이때 상기 제6 조성물 및 상기 제4 조성물이 혼합되어 제7 조성물이 제조되는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법
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제16항에 있어서, 상기 제1 조성물과 상기 제2 조성물의 혼합에서 상기 링커 및 Fc 결합성 펩타이드가 접촉하여 링커-Fc 결합성 펩타이드가 제조되고, 상기 제5 조성물은 링커-Fc 결합성 펩타이드를 포함하고, 이때 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드는 하기의 화학식 4의 구조를 가지는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법:[화학식 4]이때, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며, 이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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제17항에 있어서,상기 제5 조성물과 상기 제3 조성물의 혼합에서 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드와 상기 항체가 접촉하여 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체가 제조되고, 상기 제6 조성물은 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체를 포함하고, 이때, 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체는 하기의 화학식 6의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법:[화학식 6]이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며,이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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제18항에 있어서,상기 제6 조성물 및 상기 제4 조성물의 혼합에서 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체와 상기 페이로드가 접촉하여 항체-페이로드 컨쥬게이트가 제조되고, 상기 제7 조성물은 상기 항체-페이로드 컨쥬게이트를 포함하며, 이때 상기 항체-페이로드 컨쥬게이트는 하기의 화학식 8의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법:[화학식 8] 이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이고,B는 상기 제1 클릭화학작용기 및 상기 제2 클릭화학작용기의 클릭화학반응에 의하여 형성되는 구조들 중 하나이며, Am은 활성 모이어티 또는 이를 포함하는 구조로서, 상기 활성 모이어티는 약물 분자, 이미징 모이어티, 광학 작용제, 비타민 및 독소로부터 선택된 어느 하나이고, 이때, Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결되고, 이때, Ab와 연결된 질소 원자는 상기 항체의 적어도 하나의 Fc의 246번 라이신 또는 248번 라이신으로부터 유래된 것임
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제12항에 있어서,상기 방법은 상기 제1 조성물 및 상기 제3 조성물을 혼합한 후 상기 제3 조성물을 혼합하고, 이후에 상기 제4 조성물을 혼합하는 것을 특징으로 하고, 이때 상기 제1 조성물 및 상기 제3 조성물이 혼합되어 제8 조성물이 제조되고,이때 상기 제8 조성물 및 상기 제2 조성물이 혼합되어 제9 조성물이 제조되고, 및 이때 상기 제9 조성물 및 상기 제4 조성물이 혼합되어 제10 조성물이 제조되는 것을 특징으로 하는,항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법
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제20항에 있어서,상기 제9 조성물은 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체를 포함하고, 이때 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체는 하기의 화학식 6의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법:[화학식 6]이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이며,이때 Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결됨
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제20항에 있어서,상기 제9 조성물 상기 제4 조성물의 혼합에서 상기 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체와 상기 페이로드가 접촉하여 항체-페이로드 컨쥬게이트가 제조되고, 상기 제10 조성물은 상기 항체-페이로드 컨쥬게이트를 포함하며, 이때 상기 항체-페이로드 컨쥬게이트는 하기의 화학식 8의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는, 항체-페이로드 컨쥬게이트의 제조 방법:[화학식 8] 이때, Ab는 항체이고, n은 1 이상 4 이하의 정수이고, Y4는 N이고, Fp는 Fc 결합성 펩타이드이고,B는 상기 제1 클릭화학작용기 및 상기 제2 클릭화학작용기의 클릭화학반응에 의하여 형성되는 구조들 중 하나이며, Am은 활성 모이어티 또는 이를 포함하는 구조로서, 상기 활성 모이어티는 약물 분자, 이미징 모이어티, 광학 작용제, 비타민 및 독소로부터 선택된 어느 하나이고, 이때, Y4는 상기 Fc 결합성 펩타이드의 6번 아미노산 잔기와 연결되고, 이때, Ab와 연결된 질소 원자는 상기 항체의 적어도 하나의 Fc의 246번 라이신 또는 248번 라이신으로부터 유래된 것임
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다음을 포함하는, 제1 클릭화학작용기를 포함하는 항체의 제조 방법:링커-Fc 결합성 펩타이드를 포함하는 제1 조성물; 및 항체를 포함하는 제2 조성물을 혼합함,이때, 상기 링커-Fc 결합성 펩타이드는 하기의 (a)로 표현됨: (a) 하기의 화학식 4의 구조를 갖는 링커-Fc 결합성 펩타이드: [화학식 4] 여기서, X는 O, N, 및 S 중 어느 하나이고, R''은 사이클로알킨, 및 사이클로알켄 중 선택되는 어느 하나이며, 및 R'''은 치환 또는 비치환된 C1-20 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C2-20 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 알키닐렌, 치환 또는 비치환된 C1-10 폴리메틸렌, 치환 또는 비치환된 C5-12 아릴, 치환 또는 비치환된 C5-14 아릴 알킬렌, 치환 또는 비치환된 C8-16 아릴 알케닐렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 사이클로알킬렌, 치환 또는 비치환된 C3-10 헤테로사이클로알킬렌, 또는 치환 또는 비치환된 C5-12 헤테로아릴이며, 상기 헤테로알킬렌, 헤테로사이클로알킬렌 또는 헤테로아릴은 N, O 또는 S가 적어도 하나 이상 포함되고, 이때, 상기 치환은 비수소 치환기로 치환된 것으로, 상기 비수소 치환기는 -Ra, -O-, =O, -ORa, -SRa, -S-, -N(Ra)2, =NRa, -C(Rb)3, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N-OH, =N2, -N3, -NHC(=O)Ra, -C(=O)Ra, -C(=O)NRaRa -S(=O)2O-, -S(=O)2OH, -S(=O)2Ra, -OS(=O)2ORa, -S(=O)2NRa, -S(=O)Ra, -C(=O)Ra, 알킬렌-C(=O)Ra, -C(=S)Ra, -C(=O)ORa, 알킬렌-C(=O)ORa, -C(=O)O-, 알킬렌-C(=O)O-, -C(=S)ORa, -C(=O)SRa, -C(=S)SRa, -C(=O)NRaRa, 알킬렌-C(=O)NRaRa, -C(=S)NRaRa, -C(-NRa)NRaRa 및 Rb로 이루어진 군으로부터 하나 이상 선택될 수 있고, 여기서, Ra는 H, C1-6 알킬, C5-12 아릴, C7-12 아릴알킬 또는 헤테로사이클이고, 여기서, Rb은 F, Cl, Br, 또는 I이며, Y4는 O, N, 및 S 중 어느 하나이고, 및 Fp는 Fc 결합성 펩타이드이고, 상기 Fc 결합성 펩타이드는 제1 클릭화학작용기를 포함함
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