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서열번호 1 내지 4로 기재된 서열 중 1종 이상의 RNA 서열을 포함하는, HCV NS5B 의존적인 앱타자임
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HCV NS5B 의존적인 앱타자임의 제조 방법으로서,
(a) 교류 모듈에 5개의 랜덤 서열을 포함하는 서열번호 5 및 6의 프라이머 세트(5' 프라이머: 5'-TTGGTGTCTGATGAGNNNNNCGCGCC ATATTGTGAGGGGCGCG-3' 및 3' 프라이머: 5'-ACGTTTGGTTTCCCAAACGTTTCGNN NNNCGCGCCCCTCACAAT-3', N은 G, A, T, C가 동수로 포함됨) 및 taq polymerase로 PCR을 수행하는 단계;
(b) 단계 (a)의 PCR 산물에, 서열번호 7 및 8의 프라이머 세트(5'-GGTAATACG ACTCACTATAGGGTTGGTGTCTGATGAG-3' 및 5'-TTTTTTTTTTTTTTTTG GTGTTACGTTTGGTTTCCCAAA-3')와 taq polymerase을 첨가하여, PCR을 수행하는 단계;
(c) 단계 (b)의 PCR 산물을 T7 중합효소를 이용하여 시험관내에서 RNA로 전사하여, HCV NS5B 의존적인 앱타자임 라이브러리를 제작하는 단계;
(d) 상기 HCV NS5B 의존적인 앱타자임 라이브러리를 NS5B 단백질 이외의 단백질 및 NS5B 단백질과 접촉시켜, NS5B 단백질 이외의 단백질 존재하에서는 특이적인 자가-절단을 보이지 않지만 NS5B 단백질 존재하에서는 특이적 자가-절단을 보이는 RNA 풀을 수득하는 단계;
(e) 수득한 앱타자임 RNA 풀 각각을 RT-PCR하여 DNA를 수득하고, 각 염기서열을 확인하는 단계; 및
(f) 염기서열을 동정한 각 앱타자임 RNA를 표지한 다음, NS5B 단백질 이외의 단백질 및 NS5B 단백질과 접촉시켜, NS5B 단백질과의 존재하에서만 특이적 자가-절단을 보이는 앱타자임을 선별하는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는 HCV NS5B 의존적인 앱타자임의 제조 방법
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제4항에 있어서, 상기 HCV NS5B 의존적인 앱타자임은 서열번호 1 내지 4로 기재된 서열 중 1종 이상의 서열을 포함하는 RNA 서열인 것을 특징으로 하는 HCV NS5B 의존적인 앱타자임의 제조 방법
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제1항에 따른 HCV NS5B 의존적인 앱타자임을 포함하는 HCV 진단용 조성물
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제6항에 있어서, 상기 조성물은 Mg2+를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
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Mg2+의 존재하에, 제1항에 따른 HCV NS5B 의존적인 앱타자임을 포함하는 HCV 진단용 조성물과 HCV 감염 의심 샘플을 접촉시키는 단계; 및
HCV NS5B 의존적인 앱타자임의 자가-절단 반응을 확인하는 단계를 포함하며,
HCV NS5B 의존적인 앱타자임의 자가-절단 반응이 확인되면, 상기 샘플을 HCV 양성으로 진단하는 것을 특징으로 하는, HCV 진단을 위한 정보를 제공하는 HCV 검출방법
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