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서열목록 서열번호 1에 기재된 염기서열을 갖되, 상기 서열은 서열번호 2에 기재된 녹색형광단백질(GFP, Green Fluorescent Protein) 유전자의 ORF 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 녹색형광단백질 레포터 넉인벡터(knock-in vector)
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넉아웃 시키고자 하는 유전자의 프로모터 서열; 및
서열번호 2에 기재된 염기서열을 갖는 녹색형광단백질 유전자의 ORF 서열을 포함하되,
상기 프로모터 서열은 상기 ORF 서열의 5' 말단 쪽에 연결되고, 상기 연결에 의해 ORF 서열이 넉아웃 시키고자 하는 유전자의 개시코돈을 대체하는 것을 특징으로 하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터(knock-out vector)
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제2항에 있어서,
녹색형광단백질 유전자의 ORF 서열은 제1항의 녹색형광단백질 레포터 넉인벡터로부터 유래한 것인 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터
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삭제
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제2항에 있어서,
프로모터 서열은 서열번호 11에 기재된 것임을 특징으로 하는 넉아웃 벡터
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제2항에 있어서,
넉아웃 시키고자 하는 유전자가 TIEG1(Transforming Growth Factor β-inducible early gene 1) 인 것을 특징으로 하는 넉아웃 벡터
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i) 녹색형광단백질(GFP) 유전자 서열을 변이시켜 제조된 서열번호 2에 기재된 GFP 유전자의 ORF 서열을 포함하는, 서열번호 1에 기재된 염기서열을 갖는 GFP 레포터 넉인벡터를 제조하는 단계;
ii) 넉아웃 시키고자 하는 유전자의 프로모터 서열 및 이에 연결되는, 상기 i) 단계에서 GFP ORF 서열 제조 시 결실된 GFP의 5' 말단부의 염기로 이루어진 폴리뉴클레오티드를 제조하는 단계; 및
iii) 상기 i) 단계에서 제조된 GFP 레포터 넉인벡터에 포함된 GFP의 ORF 서열의 5' 말단 쪽에 ii) 단계에서 제조한 프로모터 서열 및 폴리뉴클레오티드를 연결하는 단계를 포함하는,
녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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제7항에 있어서,
프로모터 서열은 서열번호 11에 기재된 염기서열인 것을 특징으로 하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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제7항에 있어서,
폴리뉴클레오티드 서열은 서열번호 10에 기재된 염기서열인 것을 특징으로 하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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10
제7항에 있어서,
넉아웃 시키고자 하는 유전자가 TIEG1(Transforming Growth Factor β-inducible early gene 1) 인 것을 특징으로 하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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제7항에 있어서,
GFP의 ORF의 3' 말단 쪽에, GFP의 ORF의 삽입으로 인해 결실되는 엑손을 제외한 넉아웃 유전자의 3' 말단부의 나머지 엑손의 염기서열을 연결하는 단계를 추가로 포함하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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제11항에 있어서,
넉아웃 유전자의 3' 말단부의 염기서열은 서열번호 15에 기재된 것임을 특징으로 하는 녹색형광단백질 레포터 유전자를 포함하는 넉아웃 벡터의 제조방법
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제2항에 기재된 넉아웃 벡터로 형질전환, 형질감염 또는 감염된 분리된 숙주세포
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제13항에 있어서,
R1 생쥐 배아줄기세포인 숙주세포
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제2항에 기재된 넉아웃 벡터를 이용하여 동종 재조합 방법에 의해 인간을 제외한 포유동물 게놈상의 유전자를 넉아웃 시키는 방법
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제15항에 있어서,
녹색형광단백질의 발현 여부에 따라 나타나는 형광도를 측정하여 넉아웃 여부를 확인하는 것을 특징으로 하는 인간을 제외한 포유동물 게놈 상의 유전자를 넉아웃 시키는 방법
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제15항의 방법에 따라 수득될 수 있는 TIEG1(Transforming Growth Factor β-inducible early gene 1)의 기능이 넉아웃된, 인간을 제외한 형질전환 동물
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