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가교결합과 가속 질량 분석법의 조합에 의한 단백질-리간드 상호작용의 확인 및 정량화 방법

  • 기술번호 : KST2014035643
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 단백질-리간드 복합체 형성의 정량화를 위한 새로운 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 가교결합 방법과 가속 질량 분석법의 조합에 의해 단백질-DNA 상호작용을 인비트로와 인비보에서 확인하고 정량하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 뉴클레오티드 제거 복구(nucleotide excision repair, NER) 경로를 밝히는 방법을 제공한다.단백질-리간드 상호작용, 가속 질량 분석법, 가교결합법
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) G01N 33/60 (2006.01) G01N 33/72 (2006.01)
CPC G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01)
출원번호/일자 1020090095903 (2009.10.09)
출원인 경희대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1137502-0000 (2012.04.10)
공개번호/일자 10-2010-0083695 (2010.07.22) 문서열기
공고번호/일자 (20120426) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020090002900   |   2009.01.14
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.10.09)
심사청구항수 26

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 경희대학교 산학협력단 대한민국 경기도 용인시 기흥구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 하상수 대한민국 경기도 남양주시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 유수미 대한민국 서울특별시 서초구 서초대로**길 ** (서초동) ***호(새길특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 경희대학교 산학협력단 경기도 용인시 기흥구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2009.10.09 수리 (Accepted) 1-1-2009-0618441-18
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2010.08.18 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2010.09.13 수리 (Accepted) 9-1-2010-0057204-12
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.04.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0211425-03
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.06.15 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0451841-09
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.06.15 수리 (Accepted) 1-1-2011-0451840-53
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.12.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0756517-87
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.12.23 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-1028749-18
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.12.23 수리 (Accepted) 1-1-2011-1028747-27
10 등록결정서
Decision to grant		 2012.03.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0178659-94
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.03.09 수리 (Accepted) 4-1-2015-5029677-09
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.19 수리 (Accepted) 4-1-2019-5164254-26
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
i) 방사성 라벨된 리간드 분자를, 인 비트로(in vitro), 엑스 비보(ex vivo) 또는 인간을 제외한 인 비보(in vivo) 시스템에 도입하는 단계, ii) 리간드 분자를 타겟 단백질에 공유적으로 가교결합시키는 단계, iii) 단백질-리간드 복합체를 분리하는 단계, iv) 분리된 단백질-리간드 복합체를 가속 질량 분석법(Accelerator Mass Spectrometry, AMS)에 의해 측정하는 단계, 및 v) 종래 검출 방법으로부터의 시그널과 AMS로부터의 시그널을 비교하는 단계를 포함하는, 단백질-리간드 상호작용을 확인하고 정량분석하는 방법
2 2
제1항에 있어서, 방사성 라벨된 분자는 방사성 동위원소로 라벨된 약물, 호르몬, 대사물, DNA 또는 RNA 중의 뉴클레오티드, 및 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법
3 3
제2항에 있어서, 방사성 동위원소는 14C인 방법
4 4
제1항에 있어서, 인 비트로, 엑스 비보 또는 인 비보 시스템은 정제된 단백질, 세포 추출물, 핵 추출물, 원핵 세포, 및 진핵 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법
5 5
제1항에 있어서, 리간드와 단백질의 가교결합은 UV 광, 포름알데히드, 글루타르알데히드, 및 광활성화 링커로 이루어진 군으로부터 선택되는 가교결합제에 의해 이루어지는 방법
6 6
제1항에 있어서, 리간드-단백질 복합체의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동, 고성능액체크로마토그래피, 및 고속단백질액체크로마토그래피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법에 의해 이루어지는 방법
7 7
제6항에 있어서, 리간드-단백질 복합체의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동에 의해 이루어지는 방법
8 8
i) 방사성 동위원소-라벨된 분자를 게놈 또는 세포 DNA에 도입하는 단계, ii) 상기 방사성 동위원소-라벨된 분자를 함유한 게놈 또는 세포 DNA와 세포 추출물 또는 핵 추출물을 항온처리하고, DNA와 단백질을 가교결합시키는 단계, iii) 단백질-DNA 복합체를 추출하여 분해시키는 단계, iv) 단백질-DNA 복합체를 분리하는 단계, v) 단백질-DNA 복합체를 가속 질량 분석법에 의해 측정하는 단계, 및 vi) 가속 질량 분석법에 의한 시그널과 DNA-단백질 복합체 확인을 위한 종래의 방법에 의한 시그널을 비교하는 단계를 포함하는, 단백질과 DNA의 상호작용을 확인하고 정량하는 방법
9 9
제8항에 있어서, 방사성 동위원소-라벨된 분자는 방사성 동위원소로 라벨링된 정상 뉴클레오시드, 산화된 뉴클레오시드 또는 DNA-손상 제제(damaging agent)로부터 선택되는 방법
10 10
제9항에 있어서, DNA-손상 제제는 백금계 항암 약물, 질소 머스타드(nitrogen mustard), 사이클로포스파미드, 멜파란(melphalan), 클로람부실, 비스-클로로에틸니트로소우레아, 스트렙토조신, 부설판 및 티오테파로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법
11 11
제8항에 있어서, DNA와 단백질의 가교결합은 UV 광, 포름알데히드, 글루타르알데히드, 및 광활성화 링커로 이루어지는 군으로부터 선택되는 가교결합제에 의해 이루어지는 방법
12 12
제8항에 있어서, DNA-단백질 복합체의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동, 고성능액체크로마토그래피, 및 고속단백질액체크로마토그래피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법에 의해 이루어지는 방법
13 13
제12항에 있어서, DNA-단백질 복합체의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동에 의해 이루어지는 방법
14 14
제8항에 있어서, 방사성 동위원소는 14C인 방법
15 15
i) 방사성 라벨된 뉴클레오티드를 이용하여 주어진 위치에서 방사성 동위원소를 함유한 올리고뉴클레오티드를 제조하는 단계,ii) 상기 올리고뉴클레오티드를 상보성 올리고뉴클레오티드에 어닐링시켜 듀플렉스(duplex) DNA를 형성하는 단계,iii) 상기 듀플렉스 DNA를, 플라스미드에 라이게이션(ligation)시키는 단계,iv) 상기 듀플렉스 DNA를 함유한 플라스미드를 인간을 제외한 인 비보 시스템 또는 엑스 비보 시스템에 도입하는 단계,v) 플라스미드와 단백질을 공유 결합시키는 단계,vi) 플라스미드 DNA-단백질 복합체를 분리하여 분해하는 단계,vii) 상기 플라스미드 DNA-단백질 복합체 분해물을 분리하는 단계, 및viii) 분리된 DNA-단백질 복합체를 가속 질량 분석법에 의해 측정하는 단계를 포함하는 특정 DNA 서열에 대한 결합 단백질을 확인하고 정량하는 방법
16 16
제15항에 있어서, DNA와 단백질의 가교결합을 위해 UV 광, 포름알데히드, 글루타르알데히드, 및 광활성화 링커로 이루어진 군으로부터 선택되는 가교결합제를 사용하는 방법
17 17
제15항에 있어서, 상기 듀플렉스 DNA를 함유한 플라스미드를 세포내로 전기천공(electroporation)시킴으로써 인간을 제외한 인 비보 시스템에 도입하는 방법
18 18
제15항에 있어서, 상기 듀플렉스 DNA를 핵 추출물 또는 세포 추출물과 항온처리하여 엑스 비보 시스템에 도입하는 방법
19 19
제15항에 있어서, 플라스미드 DNA-단백질 복합체 분해물의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동, 고성능액체크로마토그래피, 및 고속단백질액체크로마토그래피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법에 의해 이루어지는 방법
20 20
제19항에 있어서, 플라스미드 DNA-단백질 복합체 분해물의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동에 의해 이루어지는 방법
21 21
제15항에 있어서, 방사성 동위원소는 14C인 방법
22 22
i) 방사성 동위원소 라벨이 상이한 위치에 순차적으로 도입된 올리고뉴클레오티드 세트를 제조하는 단계, ii) 상기 올리고뉴클레오티드 세트의 각 올리고뉴클레오티드에 상보성인 올리고뉴클레오티드를 이용하여 듀플렉스 DNA 세트를 제조하는 단계, iii) 상기 듀플렉스 DNA에 손상(damage)을 도입하는 단계, iv) 상기 듀플렉스 DNA를 NER 효소 또는 핵 추출물과 dNTPs와 항온처리하는 단계, 및 v) 생성된 DNA를 분리하고 가속 질량 분석법에 의해 측정하여 방사성활성을 확인하는 단계를 포함하는 뉴클레오티드 제거 복구(nucleotide excision repair, NER) 경로를 밝히는 방법
23 23
제22항에 있어서, 생성된 DNA의 분리는 플라스미드 DNA-단백질 복합체 분해물의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동, 고성능액체크로마토그래피, 및 고속단백질액체크로마토그래피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 방법에 의해 이루어지는 방법
24 24
제23항에 있어서, DNA의 분리는 폴리아크릴아미드 젤 전기영동에 의해 이루어지는 방법
25 25
제22항에 있어서, 방사성 동위원소는 14C인 방법
26 26
제1항, 제8항, 제15항 및 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성활성의 측정이 가속 질량 분석법 대신 액체 신틸레이션 카운터에 의해 이루어지는 방법
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1 WO2010082743 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
2 WO2010082743 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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