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배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법

  • 기술번호 : KST2014035774
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 배추 속(Brassicaceae genus) 식물에서 외부 유전자의 삽입에 의해 발생한 돌연변이체 게놈을 분석하는 TAIL PCR 분석 방법에 관한 것이다. 본 발명의 TAIL PCR 분석 방법은, 외부 유전자의 삽입에 의해 돌연변이가 발생한 배추 속 식물, 또는 이와 유사한 게놈 구조를 갖는 다른 고등 식물의 돌연변이 발생 부위의 DNA를 소량의 DNA로 짧은 시간에 분석할 수 있어, 기능 유전체 연구에 효과적으로 사용할 수 있다.ＴＡＩＬ ＰＣＲ배추, 배추 속, TAIL PCR
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01)
CPC C12Q 1/6844(2013.01) C12Q 1/6844(2013.01)
출원번호/일자 1020090122112 (2009.12.09)
출원인 경희대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1160922-0000 (2012.06.22)
공개번호/일자 10-2011-0065228 (2011.06.15) 문서열기
공고번호/일자 (20120709) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.12.09)
심사청구항수 9

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 경희대학교 산학협력단 대한민국 경기도 용인시 기흥구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박영두 대한민국 경기도 용인시 수지구
2 이기호 대한민국 부산광역시 동래구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이덕록 대한민국 서울특별시 강남구 헌릉로***길 **-**(세곡동) *층, ***호(예일국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 경희대학교 산학협력단 경기도 용인시 기흥구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2009.12.09 수리 (Accepted) 1-1-2009-0761670-77
2 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.08.10 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0448533-16
3 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2011.08.24 수리 (Accepted) 1-1-2011-0655727-20
4 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.10.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0787383-24
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.10.10 수리 (Accepted) 1-1-2011-0787384-70
6 등록결정서
Decision to grant		 2012.03.29 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0190353-11
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.03.09 수리 (Accepted) 4-1-2015-5029677-09
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.19 수리 (Accepted) 4-1-2019-5164254-26
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번호 청구항
1 1
배추 속(Brassicaceae genus) 식물에서 외부 유전자의 삽입에 의해 발생한 돌연변이체 지놈을 분석하는 PCR 분석 방법에 있어서,서열번호 1 내지 서열번호 6에서 선택된 어느 하나의 임의 축퇴 프라이머(arbitrary degenerate primer), 및 제1차 특이적 프라이머를 사용하는 제1차 TAIL(thermal asymmetric interlaced) PCR 반응;상기 선택된 임의 축퇴 프라이머, 및 제2차 특이적 프라이머를 사용하는 제2차 TAIL(thermal asymmetric interlaced) PCR 반응; 및상기 선택된 임의 축퇴 프라이머, 및 제3차 특이적 프라이머를 사용하는 제3차 TAIL(thermal asymmetric interlaced) PCR 반응; 을 포함하되,상기 특이적 프라이머는 상기 배추 속 식물에 삽입된 기지의 외부 유전자 서열에 기반하여 제작되고, 상기 제1차 특이적 프라이머 및 제2차 특이적 프라이머의 3 말단에 있는 3 내지 5bp의 염기서열은, 각각 제2차 특이적 프라이머 및 제3차 프라이머의 5 말단의 서열과 같도록 디자인되며, 상기 제1차 및 제2차 TAIL PCR 반응은,상기 특이적 프라이머를 변성(denature)된 주형(template) DNA에 어닐링(annealing)한 후, 신장(elongation)시키는 제1차 및 제2차 신장 서브 단계; 및 상기 임의 축퇴 프라이머를 상기 제2차 신장 서브 단계를 마친 변성(denature)된 주형(template) DNA에 어닐링(annealing)한 후, 신장(elongation)시키는 제3차 신장 서브 단계;를 각각 10 내지 15 사이클로 반복하여 수행되는 것을 특징으로 하는,배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 제1차 TAIL PCR 반응을 수행하기 전에, 상기 제1차 특이적 프라이머를 변성된 지놈 DNA(genomic DNA)에 어닐링 하여 신장시키는 반응을 5회 내지 8회 반복하여 수행하는 제1예비 신장 서브 단계; 및상기 예비 신장 서브 단계를 마치고, 변성된 DNA에 상기 임의 축퇴 프라이머를 어닐링 한 후, 신장하는 제2예비 신장 서브 단계;로 이루어진 예비 PCR 반응을 더 포함하되,상기 제1예비 신장 서브 단계에서, 상기 지놈 DNA는 93℃ 내지 95℃에서 1분 내지 5분간 가열하여 변성되고, 상기 제2예비 신장 서브 단계에서, 상기 임의 축퇴 프라이머는 25℃ 내지 30℃에서 65℃ 내지 75℃로 2 내지 5분 동안 온도를 상승시키면서 어닐링 된 것을 특징으로 하는 배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
3 3
제1항에 있어서, 상기 제1차 및 제2차 TAIL PCR 반응에서, 상기 특이 프라이머의 어닐링 온도는 제1 사이클에서 65℃로 시작하되, 이후 사이클이 증가할수록 0
4 4
제1항에 있어서, 상기 제3차 TAIL PCR 반응은 상기 선택된 임의 축퇴 프라이머, 및 제3차 특이적 프라이머를 동시에 변형된 DNA 주형에 어닐링 한 후, 신장시키는 반응을 30 내지 50 사이클 반복하여 수행하되, 상기 어닐링 한 프라이머를 신장시키는 반응 시간은 상기 사이클이 증가될 때 마다 1초씩 연장되는 것을 특징으로 하는 배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
5 5
제1항에 있어서,상기 제1차 TAIL PCR 반응의 주형은 지놈 DNA이고, 상기 제2차 TAIL PCR 반응의 주형은 제1차 TAIL PCR 반응 산물이 10 내지 1000배 희석된 DNA이며,상기 제3차 TAIL PCR 반응의 주형은 제2차 TAIL PCR 반응 산물이 10 내지 1000배 희석된 DNA인 것을 특징으로 하는 배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
6 6
제1항에 있어서, 상기 제1차 특이적 프라이머, 제2차 특이적 프라이머, 및 제3차 특이적 프라이머는 순차적으로 각각 서열번호 7, 서열번호8, 및 서열번호 9의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 제1차 특이적 프라이머, 제2차 특이적 프라이머, 및 제3차 특이적 프라이머는 순차적으로 각각 서열번호 11, 서열번호12, 및 서열번호 13의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 배추 속 식물의 유전체 기능 분석용 TAIL PCR 방법
8 8
배추 속 식물의 유전체 기능을 분석하는데 이용되고, 서열번호 1 내지 서열번호 6으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 TAIL PCR용 임의 축퇴 프라이머(arbitrary degenerate primer)
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제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 따른 TAIL PCR 방법에 따라 증폭된 단편의 염기 서열을 분석하는 단계; 상기 분석된 염기서열을 배추 속 식물의 지놈 DNA 서열과 비교하여 외부 유전자의 삽입 위치를 결정하는 단계; 및 상기 외부 유전자의 삽입으로 인해 기능에 이상이 있는 배추 속 식물의 유전자를 동정하는 단계;를 포함하는 TAIL PCR 방법을 사용한 배추 속 식물의 유전체 기능 분석 방법
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