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글리코실화된 단백질(glycosylated proteins)을 정제하는 중공사막(hollow fiber)을 포함하는 정제용 컬럼;안정동위원소로 치환된 물; 완충용액; 및 효소;를 포함하되,상기 중공사막은 10 kDa의 분자량 차단(M
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제 1항에 있어서,상기 완충용액은 중탄산 암모늄(ammonium bicarbonate) 및 디티오트레이톨(Dithiothreitol, DTT)의 혼합물인 것을 특징으로 하는 키트
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제 1항에 있어서, 상기 효소는 트립신, 키모트립신, 펩신, 프로티나제 K, 및 엔도프로테아제로 부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 키트
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제 1항에 있어서,상기 안정동위원소는 16O, 17O, 18O, 및 2H로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 키트
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제 5항에 있어서,상기 안정동위원소는 18O인 것을 특징으로 하는 키트
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1) 제 1항에 따른 안정동위원소 표식 펩타이드 정량 분석용 키트를 이용하여 단백질체 시료의 단백질을 가수분해하는 단계; 및2) 상기 가수분해된 단백질로부터 안정동위원소(stable isotope)로 치환된 펩타이드를 수득하여 정량분석하는 단계;를 포함하는 안정동위원소 표식 펩타이드 정량방법
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제 7항에 있어서,상기 안정동위원소 표식 펩타이드 정량방법은 1-1) 단백질체 시료에 18O로 치환된 물과 완충액을 첨가하여 전처리하는 단계;1-2) 상기 전처리된 단백질체 시료에 트립신, 키모트립신, 펩신, 프로티나제 K, 및 엔도프로테아제로 부터 선택된 어느 하나의 효소를 첨가하여 가수분해하는 단계;2-1) 상기 가수분해된 단백질체 시료로부터 18O 치환된 펩타이드를 제조하는 단계;2-2) 상기 제조된 18O 치환된 펩타이드를 중공사막을 이용하여 동일한 분자량으로 용리되어 정제하는 단계; 및2-3) 상기 용리되어 정제된 18O 치환된 펩타이드를 정량분석하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 정량방법
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제 8항에 있어서,상기 2-2)의 중공사막은 중공사막의 내부에는 첨가된 효소가 존재하고, 중공사막의 외부에는 10 kDa 분자량 이하의 18O 치환된 펩타이드만이 선택적으로 용리되는 것을 특징으로 하는 정량방법
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제 7항 또는 제 8항에 있어서, 상기 정량분석은 LC/MS 질량 분석법, ESI-MS 질량 분석법, 및 LC-ESI-MS 질량분석법으로부터 선택되는 어느 하나의 방법에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 정량방법
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효소와 단백질이 유동하는 유동라인;상기 유동라인 상에 설치되며, 상기 효소와 단백질 상의 글리코실화된 단백질(glycosylated proteins)을 정제하는 중공사막;상기 유동라인 상의 상기 중공사막 상류단에 설치되며, 상기 효소와 단백질을 공급받아 상기 중공사막으로 공급하는 인젝터(injector);상기 유동라인 상의 상기 인젝터 상류단에 설치되며, 상기 인젝터로 안정동위원소(stable isotope)로 치환된 물과 완충용액을 공급하는 펌프(syringe pump); 및상기 유동라인 상의 상기 중공사막 하류단에 설치되며, 상기 정제된 단백질을 포집하여 분석하는 정량 분석장치;를 포함하는, 중공사막을 이용한 안정동위원소 표식 펩타이드의 정량 분석용 장치
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제 11항에 있어서,상기 중공사막은 다수개로 구비되며,상기 유동라인 상의 상기 중공사막과 분석장치 사이에는 각각의 중공사막에서 공급되는 정제된 단백질을 취합하여 분석장치로 공급하는 커넥터(connector)가 더 구비되는 것을 특징으로 하는 장치
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제 11항에 있어서,상기 장치는 상기 인젝터(injector)로부터 단백질 및 효소를 공급받아 하류단으로 주입하기 위한 주입수단; 상기 주입수단과 연결되고, 주입수단의 반대편 말단이 폐쇄되어 있는 중공사막(hollow fiber);상기 중공사막 외부에 연결되어 있으며, 중공사막 내부에서 효소에 의해 분해(digestion)되어 중공사막을 통과한 18O 치환된 펩타이드들을 포집하는 수단; 및상기 18O 치환된 펩타이드들의 포집수단과 연결되어 있는 포집된 18O 치환된 펩타이드 용리를 위한 배출수단;을 포함하되,상기 중공사막은 상기 주입수단과 연결되고, 상기 주입수단의 반대편 말단이 폐쇄되어 있는 것인 장치
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제 13항에 있어서,상기 중공사막은 10 kDa의 분자량 차단(M
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제 11항에 있어서,상기 정량 분석장치는 LC/MS 질량 분석법, ESI-MS 질량 분석법, 및 LC-ESI-MS 질량분석법으로부터 선택되는 어느 하나의 방법을 이용하여 분석하는 장치인 것을 특징으로 하는 장치
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