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미분화 다능성줄기세포의 제작, 유지 및 증식을 위한 뉴로펩타이드 Ｙ를 포함하는 배지 조성물 및 이를 이용한 다능성줄기세포의 배양 방법

  • 기술번호 : KST2014046084
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 다능성줄기세포 (pluripotent stem cell)의 미분화 증식 및 유지에 효과적인 뉴로펩타이드 Y(Neuropeptide Y; NPY)를 포함하는 배지 조성물, 이를 이용한 미분화 다능성줄기세포 배양 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 뉴로펩타이드 Y 를 미분화 다능성줄기세포 배양 배지 조성물로 사용함으로써 미분화 상태의 다능성줄기세포를 효과적으로 증식 및 배양할 수 있고, 특히, 영양세포유래인자 또는 동물 혈청을 이용하지 않는 조건에서도 영양세포와의 공배양 조건 또는 영양세포 배양 conditioned medium을 사용한 경우와 유사한 성능으로 미분화 상태의 다능성줄기세포를 장기간 연속 계대 배양할 수 있음을 확인하였다. 따라서, 본 발명은 미분화 상태의 다능성줄기세포의 배양 과정을 개선하고, 궁극적으로는 임상적용 가능한 다능성줄기세포 자원을 확보할 수 있는 대량 배양 시스템을 개발하는데 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명은 뉴로펩타이드 Y(Neuropeptide Y; NPY)를 포함하는 역분화용 배지 조성물, 이를 이용한 역분화 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 뉴로펩타이드 Y 를 역분화 유도 과정의 배지 조성물에 첨가하였을 경우 역분화 효율을 유의하게 향상시킬 수 있었으며, 상기 방법에 의해 제조된 유도만능줄기세포는 다능성줄기세포로서의 특성을 정상적으로 가짐을 확인하였다. 따라서, 본 발명은 역분화 유도 배양 과정을 개선하고, 임상적용 가능한 유도만능줄기세포 제작 기술을 개발하는데 기여함으로써 궁극적으로는 줄기세포 세포 치료제를 개발하는데 유용하게 이용될 수 있다.
Int. CL C12N 5/02 (2006.01) C12N 5/071 (2010.01)
CPC
출원번호/일자 1020100056696 (2010.06.15)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1166257-0000 (2012.07.10)
공개번호/일자 10-2010-0135197 (2010.12.24) 문서열기
공고번호/일자 (20120719) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020090053383   |   2009.06.16
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.06.15)
심사청구항수 28

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 조이숙 대한민국 대전광역시 유성구
2 손미영 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 손민 대한민국 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(산업통상자원부장관) 세종특별자치시 한누리대
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2010.06.15 수리 (Accepted) 1-1-2010-0384781-62
2 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.10.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0631963-84
3 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.12.27 수리 (Accepted) 1-1-2011-1039737-28
4 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.01.30 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0077740-57
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2012.01.30 수리 (Accepted) 1-1-2012-0077739-11
6 등록결정서
Decision to grant		 2012.07.05 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0389342-19
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
다능성줄기세포를 미분화 상태로 유지시키기에 충분한 양의 뉴로펩타이드 Y(neuropeptide Y)를 포함하는 미분화 상태의 다능성줄기세포 유지 및 배양용 다능성줄기세포의 배지 조성물
2 2
제1항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 배아줄기세포 또는 유도만능줄기세포인 것을 특징으로 하는 배지 조성물
3 3
제1항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 배지 조성물
4 4
제1항에 있어서, 상기 뉴로펩타이드 Y의 농도는 0
5 5
제1항에 있어서, 상기 조성물은 동물혈청 및 영양세포유래인자가 포함되지 않은 상태에서 N2 보충물, B27보충물, bFGF 및 TGFβ로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 배지 조성물
6 6
제5항에 있어서, 상기 N2 보충물과 B27 보충물은 1:1의 비율로 제공되고, 상기 bFGF는 4-100 ng/㎖의 농도로 제공되고, 상기 TGFβ는 1-10ng/㎖의 농도로 제공되는 것을 특징으로 하는 배지 조성물
7 7
다능성줄기세포; 및 상기 다능성줄기세포가 다수의 연속 계대 배양을 통해서 미분화 상태로 유지되도록 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 배지 조성물을 포함하며, 상기 배지 조성물은 동물 혈청 및 영양세포유래인자를 포함하지 않으며, 동물 혈청이나 영양세포유래인자에 노출된 적이 없는 것임을 특징으로 하는 시험관 내 세포 배양물
8 8
제7항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 배아줄기세포 또는 유도만능줄기세포인 것을 특징으로 하는 시험관 내 세포 배양물
9 9
제7항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 시험관 내 세포 배양물
10 10
유도만능줄기세포를 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 배지 조성물을 포함하는 배양 조건 하에서 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 상태로 유지될 수 있는 유도만능줄기세포의 제작방법
11 11
삭제
12 12
제10항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 방법
13 13
다수의 연속 계대 배양을 통해서 다능성줄기세포를 미분화 상태로 유지시키기도록 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 배지 조성물 상에서 다능성줄기세포를 배양하는 단계를 포함하는 미분화 상태로 다능성줄기세포를 배양하는 방법
14 14
제13항에 있어서, 상기 방법은 동물 혈청 및 영양세포유래인자를 이용하거나 또는 이용하지 않는 상태로 다능성줄기세포를 미분화 상태로 유지시키는 것을 특징으로 하는 방법
15 15
제13항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 방법
16 16
제13항에 있어서, 상기 다능성줄기세포는 배아줄기세포 또는 유도만능줄기세포인 것을 특징으로 하는 방법
17 17
제13항에 있어서, 상기 방법은 다능성줄기세포를 15계대 이상 영양세포 없이 미분화 상태로 유지시키는 것을 특징으로 하는 방법
18 18
제13항에 있어서, 상기 다능성줄기세포의 미분화 상태의 유지는 ALP(alkaline phosphatase), OCT-4, SOX2, hTERT(human telomerase reverse transcriptase), TDGF(teratocarcinoma-derived growth factor) 및 SSEA-4로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 발현이 뉴로펩타이드 Y를 포함하지 않는 최소배지에서 배양된 다능성줄기세포에 비해 증가되는 것으로 확인하는 것을 특징으로 하는 방법
19 19
제13항에 있어서, 상기 다능성줄기세포의 미분화 상태의 유지는 뉴로펩타이드 Y 수용체 Y1 및 Y5의 활성 촉진에 의한 것임을 특징으로 하는 방법
20 20
제19항에 있어서, 상기 뉴로펩타이드 Y 수용체 Y1 및 Y5의 활성의 촉진은 AKT, ERK1/2, PKA, CREB 및 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 신호전달경로의 활성의 촉진에 의해 이루어지는 것임을 특징으로 하는 방법
21 21
뉴로펩타이드 Y(neuropeptide Y)를 포함하는 체세포 또는 전구세포에서 유도만능줄기세포로의 역분화 효율 증진용 배지 조성물
22 22
제21항에 있어서, 상기 배지 조성물은 체세포 또는 전구세포의 전부 또는 일부를 미분화된 유도만능줄기세포로 역분화시키는 것을 특징으로 하는 배지 조성물
23 23
삭제
24 24
제21항에 있어서, 상기 유도만능줄기세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 배지 조성물
25 25
제21항에 있어서, 상기 뉴로펩타이드 Y의 농도는 0
26 26
제21항, 제22항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항의 배지 조성물에서 체세포 또는 전구세포를 배양하여 유도만능줄기세포로 역분화시키는 단계를 포함하는 체세포 또는 전구세포에서 유도만능줄기세포로의 역분화 유도 방법
27 27
삭제
28 28
체세포 또는 전구세포를 제21항, 제22항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항의 배지 조성물을 포함하는 배양 조건 하에서 배양하여 유도만능줄기세포로 역분화시키는 단계를 포함하는 유도만능줄기세포의 제작 방법
29 29
삭제
30 30
제28항에 있어서, 상기 체세포 또는 전구세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 방법
31 31
체세포 또는 전구세포; 및 제21항, 제22항, 제24항 및 제25항 중 어느 한 항의 배지 조성물을 포함하며, 상기 체세포 또는 전구세포는 유도만능줄기세포로 역분화되는 시험관 내 세포 배양물
32 32
삭제
33 33
제 31항에 있어서, 상기 체세포 또는 전구세포는 인간 유래인 것을 특징으로 하는 세포 배양물
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1 US08628963 US 미국 FAMILY
2 US20120171766 US 미국 FAMILY
3 WO2010147395 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
4 WO2010147395 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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1 US2012171766 US 미국 DOCDBFAMILY
2 US8628963 US 미국 DOCDBFAMILY
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부/ 교육과학기술부 한국생명공학연구원/ 한국생명공학연구원 바이오연구 개발사업/ 기관고유사업 줄기세포 분화 신호전달체계 조절 물질 발굴 및 기전 규명/ 인간 질병모델 개발을 위한 역분화 줄기세포 확립 및 특성 분석