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타겟 핵산서열의 계층적 제조방법

  • 기술번호 : KST2014047415
  • 담당센터 : 서울서부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-6124-6930
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 1 kb 이상의 타겟 핵산서열의 계층적(Hierarchical) 제조방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 다중 층(multiple layers)으로 이루어진 플랭킹 DNA 서열을 포함하는 DNA 마이크로칩(microchip)에서 합성 된 올리고뉴클레오타이드를 이용하여 종래의 방법으로는 불가능하였던 1 kb 이상의 타겟 핵산서열 합성을 효과적으로 실시할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법을 통한 유전자 합성 비용은 레진-기반된 올리고뉴클레오타이드를 이용한 종래 방법에 비해 3배 이상 저렴하다. 따라서, 본 발명의 방법은 유전자 합성 비용을 현저하게 감소시킬 수 있는 매우 우수한 수단을 제공한다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
CPC C12N 15/10(2013.01) C12N 15/10(2013.01) C12N 15/10(2013.01)
출원번호/일자 1020110069626 (2011.07.13)
출원인 연세대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-1264295-0000 (2013.05.08)
공개번호/일자 10-2013-0008930 (2013.01.23) 문서열기
공고번호/일자 (20130704) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2011.07.13)
심사청구항수 8

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 방두희 대한민국 서울특별시 동대문구
2 김황범 대한민국 서울특별시 서대문구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 양부현 대한민국 서울특별시 송파구 오금로 **, 태원빌딩 **층, 특허팀(주식회사씨젠)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 서울특별시 서대문구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2011.07.13 수리 (Accepted) 1-1-2011-0539605-71
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2011.12.15 수리 (Accepted) 4-1-2011-5252006-10
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2012.02.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2012.02.20 수리 (Accepted) 9-1-2012-0014860-71
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2012.11.12 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0678966-90
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.01.02 수리 (Accepted) 1-1-2013-0002004-71
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.01.02 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0002005-16
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5062749-37
9 등록결정서
Decision to grant		 2013.05.01 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0303390-42
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.06.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5088566-87
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.09.25 수리 (Accepted) 4-1-2014-5114224-78
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
다음의 단계를 포함하는 타겟 핵산서열의 계층적(Hierarchical) 제조방법:(a) 5' to 3' 방향으로 5'-말단 제1공통적 프라이밍 서열(generic priming sequence), 제1차 5'-제한효소 절단 서열, 중첩하는(overlapping) 타겟 일부 서열, 제1차 3'-제한효소 절단 서열 및 3'-말단 제1공통적 프라이밍 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 풀을 준비하는 단계; 상기 올리고뉴클레오타이드 풀에 있는 상기 중첩하는 타겟 일부 서열들은 서로 중첩하는 경우 타겟 핵산서열 전체를 포함하며, 상기 올리고뉴클레오타이드의 제1차 5'-제한효소 절단 서열과 제1차 3'-제한효소 절단 서열은 서로 동일하며; 상기 올리고뉴클레오타이드 풀 중에서 제1중간산물의 5'-말단 부위를 생성시키기 위한 제1올리고뉴클레오타이드는 5'-제한효소 절단 서열의 다운스트림에 5' to 3' 방향으로 5'-제2공통적 프라이밍 서열과 제2차 5'-제한효소 절단 서열을 추가적으로 포함하고, 제1중간산물의 3'-말단 부위를 생성시키기 위한 제2올리고뉴클레오타이드는 3'-제한효소 절단 서열의 업스트림에 3' to 5' 방향으로 3'-제2공통적 프라이밍 서열과 제2차 3'-제한효소 절단 서열을 추가적으로 포함하며;제2중간산물의 5'-말단 부위를 생성시키기 위한 제3올리고뉴클레오타이드는 5'-제한효소 절단 서열의 다운스트림에 5' to 3' 방향으로 5'-제3공통적 프라이밍 서열과 제3차 5'-제한효소 절단 서열을 포함하고, 제2중간산물의 3'-말단 부위를 생성시키기 위한 제4올리고뉴클레오타이드는 3'-제한효소 절단 서열의 업스트림에 3' to 5' 방향으로 3'-제3공통적 프라이밍 서열과 제3차 3'-제한효소 절단 서열을 추가적으로 포함하고; (b) 상기 올리고뉴클레오타이드 풀을 상기 5'-말단 제1공통적 프라이밍 서열 및 3'-말단 제1공통적 프라이밍 서열에 혼성화 되는 제1차 프라이머 세트를 이용하여 PCR(polymerase chain reaction) 증폭하는 단계; (c) 상기 단계 (b)의 증폭 결과물을 상기 제1차 5'-제한효소 절단 서열과 제1차 3'-제한효소 절단 서열에 작용하는 제한효소로 절단하는 단계; 상기 절단에 의해 상기 5'-말단 제1공통적 프라이밍 서열 및 3'-말단 제1공통적 프라이밍 서열이 상기 올리고뉴클레오타이드로 풀로부터 해리(release) 되고; 상기 제1올리고뉴클레오타이드의 5'-말단에 제2공통적 프라이밍 서열이 위치하고, 상기 제2올리고뉴클레오타이드의 3'-말단에 제2공통적 프라이밍 서열이 위치하며, 상기 제3올리고뉴클레오타이드의 5'-말단에 제3공통적 프라이밍 서열이 위치하고, 상기 제4올리고뉴클레오타이드의 3'-말단에 제3공통적 프라이밍 서열이 위치하며;(d) (i) 상기 제1올리고뉴클레오타이드의 제2공통적 프라이밍 서열 및 제2올리고뉴클레오타이드의 제2공통적 프라이밍 서열에 혼성화 되는 프라미어 세트를 포함하는 제1어셈블리 증폭 반응물 1 및 (ii) 상기 제3올리고뉴클레오타이드의 제3공통적 프라이밍 서열 및 제4올리고뉴클레오타이드의 제3공통적 프라이밍 서열에 혼성화 되는 프라이머 세트를 포함하는 제1어셈블리 증폭 반응물 2를 이용하여 제1차어셈블리 PCR을 실시하여 각각 제1중간산물(intermediates) 및 제2중간산물을 생성시키는 단계; (e) 상기 단계 (d)의 제1중간산물 및 제2중간산물을 (i) 상기 제1올리고뉴클레오타이드의 제2차 5'-제한효소 절단 서열과 상기 제2올리고뉴클레오타이드의 제2차 3'-제한효소 절단 서열에 작용하는 제한효소 및 (ii) 상기 제3올리고뉴클레오타이드의 제3차 5'-제한효소 절단 서열과 상기 제4올리고뉴클레오타이드의 제3차 3'-제한효소 절단 서열에 작용하는 제한효소로 절단하는 단계; 및,(f) 상기 단계 (e)의 결과물을 어셈블리 하여 타겟 핵산서열을 수득하는 단계
2 2
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (a)의 올리고뉴클레오타이드 풀은 DNA 마이크로칩으로부터 유래된 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
3 3
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (a)의 제1중간산물 및 제2중간산물을 형성하는 올리고뉴클레오타이드의 수는 최소 3개 이상인 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
4 4
제 3 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 수는 최소 4개 이상인 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
5 5
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (a)의 제2차 제한효소 절단 서열과 제3차 제한효소 절단 서열은 서로 다른 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
6 6
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (b)의 제1중간산물 및 제2중간산물의 증폭은 서로 다른 튜브에서 실시하는 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
7 7
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (b)의 제1중간산물 및 제2중간산물의 크기는 300-500 bp인 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
8 8
제 1 항에 있어서, 상기 방법에서 실시하는 어셈블리 PCR은 65℃ 이상의 어닐링 온도에서 실시하는 것을 특징으로 하는 계층적 제조방법
9 9
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 연세대학교 산학협력단 기초연구사업(대), 일반 연구자 지원 사업(중), 신진연구_연구비지원(소) 저비용의 오류없는 유전자 및 게놈 합성 기술 개발