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(a) 자가복제 서열(autonomous replicating sequence); (b) (ⅰ) KmPCLP3(Kluyveromyces maxianus purine-cytosine-like-permease 3) 프로모터(PCLPpro), (ⅱ) 멀티 클로닝 위치(multiple cloning site, MCS) 및 (ⅲ) KmPCLP3 터미네이터(terminator; PCLPter)를 포함하는 발현 모듈(expression module); 및 (c) (ⅰ) 선택 마커(selection marker); 및 (ⅱ) 상기 선택 마커의 양쪽 말단에 결합된 loxP 서열을 포함하는 레스큐 모듈(rescue module; loxP-selection marker-loxP)을 포함하는 효모 발현벡터(yeast expression vector)
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제 1 항에 있어서, 상기 자가복제 서열은 ARS2인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 선택 마커는 kanMX인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 발현벡터는 Cre 리콤비나제(recombinase)에 의해 레스큐되는 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 발현벡터는 상기 발현 모듈의 업스트림 및 레스큐 모듈의 다운스트림에 목적 유전자 단편의 플랭킹 서열(flanking sequence)과 상동적인 서열을 추가적으로 포함하여 염색체 상의 상기 목적 유전자 단편과의 상동재조합(homologous recombination)을 통해 염색체 상으로 통합될 수 있는 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 1 항에 있어서, 상기 효모는 클루이베로미세스 종(Kluyveromyces spp
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제 6 항에 있어서, 상기 효모는 클루이베로미세스 종 또는 사카로마이세스 종인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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(a) 센트로미어 서열(centromere sequence); (b) 목적 유전자의 업스트림 플랭킹 서열(upstream flanking sequence)과 상동적인 서열; (c) (ⅰ) KmPCLP3(Kluyveromyces maxianus purine-cytosine-like-permease 3) 프로모터(PCLPpro), (ⅱ) 멀티 클로닝 위치(multiple cloning site, MCS) 및 (ⅲ) KmPCLP3 터미네이터(terminator; PCLPter)를 포함하는 발현 모듈(expression module); 및 (d) (ⅰ) 선택 마커(selection marker); 및 (ⅱ) 상기 선택 마커의 양쪽 말단에 결합된 loxP 서열을 포함하는 레스큐 모듈(rescue module; loxP-selection marker-loxP); (e) 목적 유전자의 다운스트림 플랭킹 서열과 상동적인 서열을 포함하는 염색체 통합용 효모 발현벡터(yeast expression vector)
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제 8 항에 있어서, 상기 센트로미어 서열은 CENB인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 8 항에 있어서, 상기 선택 마커는 kanMX인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 8 항에 있어서, 상기 발현벡터는 Cre 리콤비나제(recombinase)에 의해 레스큐되는 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 8 항에 있어서, 상기 발현벡터는 상기 발현 모듈의 업스트림 및 레스큐 모듈의 다운스트림에 존재하는 목적 유전자 단편의 플랭킹 서열(flanking sequence)과 상동적인 서열과 염색체 상의 상기 목적 유전자 단편과의 상동재조합(homologous recombination)을 통해 상기 발현 모듈 및 레스큐 모듈이 염색체 상으로 통합될 수 있는 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 8 항에 있어서, 상기 효모는 클루이베로미세스 종, 사카로마이세스 종, 시조사카로마이세스 종, 피키아 종, 파피아 종, 칸디다 종, 탈라로미세스 종, 브레타노미세스 종, 파키솔렌 종 또는 데바리오미세스 종인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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제 13 항에 있어서, 상기 효모는 클루이베로미세스 종 또는 사카로마이세스 종인 것을 특징으로 하는 효모 발현벡터
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다음의 단계를 포함하는 효모에서 하나 이상의 목적 뉴클레오타이드 서열들의 연속적 형질전환 방법:(a) 제 8 항의 벡터의 MCS(multiple cloning site)에 목적 뉴클레오타이드 서열을 클로닝하는 단계;(b) 상기 벡터를 효모에 형질전환시키는 단계;(c) 상기 형질전환된 효모에서 Cre 리콤비나제에 의한 레스큐를 유도하는 단계; 및(d) 상기 단계 (a) 내지 (c)를 다른 목적 뉴클레오타이드 서열로 반복적으로 실시하는 단계
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제 15 항에 있어서, 상기 형질전환은 클루이베로미세스 종, 사카로마이세스 종, 시조사카로마이세스 종, 피키아 종, 파피아 종, 칸디다 종, 탈라로미세스 종, 브레타노미세스 종, 파키솔렌 종 및 데바리오미세스 종으로 구성된 군으로부터 선택된 효모 스트레인에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법
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제 16 항에 있어서, 상기 형질전환은 클루이베로미세스 종 또는 사카로마이세스 종에서 실시하는 것을 특징으로 하는 방법
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