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단백질을 코딩하는 핵산 서열을 정지코돈으로 치환하는 단계; 및,상기 정지코돈에 대응하는 tRNA와 아미노아실 tRNA 합성효소를 사용하여, 상기 단백질 서열 내의 아미노산이 금속 킬레이트 잔기를 함유하는 비천연 아미노산에 의하여 치환된 단백질을 세포 내부에서 번역시키는 단계를 포함하는,단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 금속 킬레이트 잔기는 2,2'-바이피리딘(bipyridine), 또는 8-하이드록시퀴놀린(hydroxyquinoline)을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 1 항에 있어서, 상기 비천연 아미노산은 바이피리딜알라닌(2,2'-bipyridin-5-yl alanine, BPA), 또는 2-아미노-3-(8-하이드록시퀴놀린-3-일)프로판산 (2-amino-3-(8-hydroxyquinolin-3-yl)propanoic acid, HQA)을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 1 항에 있어서, 상기 단백질은 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase,GST)를 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 4 항에 있어서,상기 치환되는 핵산 서열의 일부는, 상기 단백질을 코딩하는 핵산 서열 중 47번째 아미노산인 페닐알라닌 코딩 영역 내지 114번째 아미노산인 리신 코딩 영역 중 어느 하나인 것을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 1 항에 있어서,상기 단백질은 인슐린, 성장 호르몬, 인터페론-감마, 조혈 성장 인자(hematopoietic growth factor), 또는 뼈 형성 단백질(Bone morphogenetic protein)을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 1 항에 있어서, 상기 핵산 서열의 치환은 자리지정 돌연변이에 의하여 수행되는 것을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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제 7 항에 있어서,상기 핵산 서열의 일부가 TGA, TAG, 및 TAA 로 이루어진 군에서 선택되는 것에 의하여 치환되는 것인, 단백질 돌연변이체의 제조 방법
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단백질에 포함된 하나 이상의 아미노산을 금속 킬레이트 잔기를 함유하는 비천연 아미노산에 의하여 치환시킨, 단백질 돌연변이체
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제 9 항에 있어서,상기 금속 킬레이트 잔기는 2,2'-바이피리딘(bipyridine), 또는 8-하이드록시퀴놀린(hydroxyquinoline)을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체
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제 9 항에 있어서,상기 비천연 아미노산은 바이피리딜알라닌(2,2'-bipyridin-5-yl alanine, BPA), 또는 2-아미노-3-(8-하이드록시퀴놀린-3-일)프로판산(2-amino-3-(8-hydroxyquinolin-3-yl)propanoic acid, HQA)을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체
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제 9 항에 있어서,상기 단백질은 글루타티온-S-전이효소(glutathione-S-transferase, GST)인 것을 포함하는 것인, 단백질 돌연변이체
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제 12 항에 있어서, 상기 글루타티온-S-전이효소에 포함된 47번째 아미노산인 페닐알라닌 내지 114번째 아미노산인 리신 중 어느 하나가 상기 금속 킬레이트 잔기를 함유하는 비천연 아미노산에 의해 치환된 것을 포함하는, 단백질 돌연변이체
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제 9 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항의 단백질 돌연변이체를 이용하는 것을 포함하는, 단백질 정제 방법
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제 14 항에 있어서, 상기 단백질 돌연변이체와 금속 이온이 부착된 레진의 상호작용을 이용하는 것을 포함하는, 단백질 정제 방법
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제 15 항에 있어서,상기 금속 이온은 니켈 양이온을 포함하는 것인, 단백질 정제 방법
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제 15 항에 있어서,상기 금속 이온이 부착된 레진은 니켈-니트릴로트리아세트산(Nickel-nitrilotriacetic acid, Ni-NTA) 레진을 포함하는 것인, 단백질 정제 방법
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제 14 항에 있어서,상기 단백질은 글루타티온-S-전이효소, 인슐린, 성장 호르몬, 인터페론-감마, 조혈 성장 인자(hematopoietic growth factor), 또는 뼈 형성 단백질(Bone morphogenetic protein)을 포함하는 것인, 단백질 정제 방법
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