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식물 이중-하이브리드 시스템을 이용한 단백질 상호작용 검촐방법 및 검출키트

  • 기술번호 : KST2014061317
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 안토시아닌 생합성 조절 IbMYB1 전사인자의 DNA-결합 도메인과 전사활성 도메인을 이용한 식물 이중-하이브리드 시스템을 개발하고 이를 이용한 식물에서의 단백질 상호작용 검출방법 및 검출키트를 제공한다. 본 발명에 따른 식물 이중-하이브리드 시스템은 단백질 상호작용 여부를 안토시아닌 색소 발현을 통해 간단하면서도 정확하게 육안으로 분석할 수 있어 식물에서의 단백질 상호작용, 특히 단백질 결합 여부를 확인하는데 매우 유용하게 적용될 수 있다.
Int. CL C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01)
CPC C12N 15/8243(2013.01) C12N 15/8243(2013.01) C12N 15/8243(2013.01) C12N 15/8243(2013.01)
출원번호/일자 1020110076960 (2011.08.02)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1460231-0000 (2014.11.04)
공개번호/일자 10-2013-0015123 (2013.02.13) 문서열기
공고번호/일자 (20141110) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2012.08.28)
심사청구항수 28

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김차영 대한민국 대전광역시 유성구
2 추효섭 대한민국 대전광역시 유성구
3 우현숙 대한민국 대전광역시 유성구
4 김민수 대한민국 대전광역시 유성구
5 김중수 대한민국 대전광역시 유성구
6 윤병대 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 손민 대한민국 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2011.08.02 수리 (Accepted) 1-1-2011-0597694-62
2 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.08.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0693607-75
3 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2012.08.28 수리 (Accepted) 1-1-2012-0693608-10
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2013.07.02 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2013.08.09 수리 (Accepted) 9-1-2013-0065677-30
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2014.01.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0052906-25
7 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2014.03.21 수리 (Accepted) 1-1-2014-0275638-66
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.04.23 수리 (Accepted) 1-1-2014-0387882-38
9 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.04.23 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-0387883-84
10 등록결정서
Decision to grant		 2014.08.13 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0552244-03
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
삭제
2 2
프로모터, 상기 프로모터의 하류에 위치하는 IbMYB1 전사인자의 DNA-결합 도메인(DB-도메인)을 코딩하는 서열, 상기 DB-도메인의 하류에 위치하는 링커 서열, 상기 링커의 하류에 위치하는 다중 클로닝 부위, 및 상기 다중 클로닝 부위의 하류에 위치하는 터미네이터 서열을 포함하고, 상기 다중 클로닝 부위 내에 베이트 단백질을 코딩하는 서열이 삽입될 수 있는 DB 벡터, 및 프로모터, 상기 프로모터의 하류에 위치하는 다중 클로닝 부위, 상기 다중 클로닝 부위의 하류에 위치하는 링커 서열, 상기 링커의 하류에 위치하는 IbMYB1 전사인자의 전사활성 도메인(AD-도메인)을 코딩하는 서열, 및 상기 AD-도메인의 하류에 위치하는 터미네이터 서열을 포함하고, 상기 다중 클로닝 부위에 프레이 단백질을 코딩하는 서열이 삽입될 수 있는 AD 벡터를 포함하는 식물 이중-하이브리드 시스템을 이용하여, 분석하고자 하는 베이트(bait) 단백질과 그와 상호작용을 할 것으로 예상되는 프레이(prey) 단백질의 상호작용을 검출하는 단계를 포함하는, 식물에서 단백질 상호작용을 검출하는 방법
3 3
제2항에 있어서, 1) 식물 이중-하이브리드 시스템의 DB 벡터 내에 베이트 단백질을 코딩하는 서열을 삽입하여 베이트 DB 발현벡터를 제조하고, AD 벡터 내에 프레이 단백질을 코딩하는 서열을 삽입하여 프레이 AD 발현벡터를 제조하는 단계; 2) 단계 1)에서 제조된 각각의 발현벡터를 식물체에 형질전환하여 일시적으로 발현시키는 단계; 및3) 상기 식물체로부터 안토시아닌 색소의 발현을 확인하여 베이트 단백질과 프레이 단백질의 상호작용 여부를 판정하는 단계를 포함하는 것인 방법
4 4
제2항에 있어서, IbMYB1 전사인자의 DB-도메인을 코딩하는 서열은 서열번호: 2로 기재되는 염기서열을 포함하고, AD-도메인을 코딩하는 서열은 서열번호: 3으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것인 방법
5 5
제2항에 있어서, DB 벡터가 식물 이원(binary) 벡터의 우측 경계(right border, RB)와 좌측 경계(left border, LB) 사이에 프로모터, IbMYB1 전사인자의 DB-도메인을 코딩하는 염기서열, 링커, 다중 클로닝 부위 및 터미네이터가 순서대로 작동가능하게 연결되어 있는 것인 방법
6 6
제2항에 있어서, AD 벡터가 식물 이원 벡터의 우측 경계(RB)와 좌측 경계(LB) 사이에 프로모터, 다중 클로닝 부위, 링커, IbMYB1 전사인자의 AD-도메인을 코딩하는 염기서열 및 터미네이터가 순서대로 작동가능하게 연결되어 있는 것인 방법
7 7
제2항에 있어서, 상기 DB 벡터의 프로모터 또는 AD 벡터의 프로모터가 콜리플라워 모자이크 바이러스(cauliflower mosaic virus, CaMV) 35S 프로모터, CaMV 이중-증강(double-enhanced) 35S(d35S) 프로모터, 벼 액틴 프로모터, 유비퀴틴 프로모터 및 담배 또는 아라비돕시스 유래 화학적 유도성 PR-1 프로모터로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법
8 8
제5항 또는 제6항에 있어서, 식물 이원 벡터가 pGreen 시리즈 벡터, pGA 시리즈 벡터, pCG 시리즈 벡터, pCIT 시리즈 벡터, pGPTV 시리즈 벡터, pBECK2000 시리즈 벡터 및 Binary-BAC(BIbAD) 벡터로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법
9 9
제2항에 있어서, DB 벡터가 서열번호: 6의 염기서열로 기재되는 유전자 절편을 포함하는 벡터인 것인 방법
10 10
제9항에 있어서, DB 벡터가 도 1의 B로 표시되는 개열지도를 갖는 pGreenII0179-d35S-IbDB 벡터인 것인 방법
11 11
제2항에 있어서, AD 벡터가 서열번호: 9의 염기서열로 기재되는 유전자 절편을 포함하는 벡터인 것인 방법
12 12
제11항에 있어서, AD 벡터가 도 1의 C로 표시되는 개열지도를 갖는 pGreenII0179-d35S-IbAD 벡터인 것인 방법
13 13
제3항에 있어서, 상기 베이트 DB 발현벡터는 IbMYB1 전사인자의 DB-도메인과 베이트 단백질이 융합된 재조합 단백질을 발현하는 벡터인 것인 방법
14 14
제3항에 있어서, 상기 프레이 AD 발현벡터는 IbMYB1 전사인자의 AD-도메인과 프레이 단백질이 융합된 재조합 단백질을 발현하는 벡터인 것인 방법
15 15
제3항에 있어서, 단계 2)에서 식물체로의 형질전환이 CaCl2 침전법, CaCl2 침전법에 환원제 DMSO(dimethyl sulfoxide)의 사용을 접목시킨 Hanahan 방법, 전기천공법(electroporation), 인산칼슘 침전법, 원형질 융합법, 실리콘 카바이드 섬유를 이용한 교반법, 아그로박테리움 매개 형질전환법, PEG를 이용한 형질전환법, 리포좀을 이용한 형질전환법, DEAE-덱스트란 매개 형질전환법 및 리포펙타민 매개 형질전환법으로 구성된 군으로부터 선택된 기술에 의해 수행되는 것인 방법
16 16
제15항에 있어서, 단계 2)에서 식물체로의 형질전환이 아그로박테리움 매개 형질전환법에 의해 수행되는 경우, 2-1) 단계 1)에서 제조된 베이트 DB 발현벡터 및 프레이 AD 발현벡터를 각각 아그로박테리움 속 균주 내로 도입하는 단계; 및2-2) 상기 발현벡터가 각각 도입된 아그로박테리움 속 균주를 동시에 식물체에 감염시키는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법
17 17
제3항에 있어서, 단계 2)에서 식물체가 담배인 것인 방법
18 18
제3항에 있어서, 단계 3)에서 식물체로부터 안토시아닌 색소의 발현이 확인되는 경우에 베이트 단백질과 프레이 단백질이 상호작용하는 것으로 판정하는 것인 방법
19 19
삭제
20 20
프로모터, 상기 프로모터의 하류에 위치하는 IbMYB1 전사인자의 DNA-결합 도메인(DB-도메인)을 코딩하는 서열, 상기 DB-도메인의 하류에 위치하는 링커 서열, 상기 링커의 하류에 위치하는 다중 클로닝 부위, 및 상기 다중 클로닝 부위의 하류에 위치하는 터미네이터 서열을 포함하고, 상기 다중 클로닝 부위 내에 베이트 단백질을 코딩하는 서열이 삽입될 수 있는 DB 벡터, 및 프로모터, 상기 프로모터의 하류에 위치하는 다중 클로닝 부위, 상기 다중 클로닝 부위의 하류에 위치하는 링커 서열, 상기 링커의 하류에 위치하는 IbMYB1 전사인자의 전사활성 도메인(AD-도메인)을 코딩하는 서열, 및 상기 AD-도메인의 하류에 위치하는 터미네이터 서열을 포함하고, 상기 다중 클로닝 부위에 프레이 단백질을 코딩하는 서열이 삽입될 수 있는 AD 벡터를 포함하는, 단백질 상호작용을 검출하기 위한 키트
21 21
제20항에 있어서, IbMYB1 전사인자의 BD-도메인을 코딩하는 서열이 서열번호: 2로 기재되는 염기서열을 포함하고, AD-도메인을 코딩하는 서열이 서열번호: 3으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것인 키트
22 22
제20항에 있어서, DB 벡터가 식물 이원 벡터의 우측 경계(RB)와 좌측 경계(LB) 사이에 프로모터, DB-도메인을 코딩하는 염기서열, 링커, 다중 클로닝 부위 및 터미네이터가 순서대로 작동가능하게 연결되어 있는 것인 키트
23 23
제20항에 있어서, AD 벡터가 식물 이원 벡터의 우측 경계(RB)와 좌측 경계(LB) 사이에 프로모터, 다중 클로닝 부위, 링커, AD-도메인을 코딩하는 염기서열 및 터미네이터가 순서대로 작동가능하게 연결되어 있는 것인 키트
24 24
제20항에 있어서, 상기 DB 벡터의 프로모터 또는 AD 벡터의 프로모터가 콜리플라워 모자이크 바이러스(CaMV) 35S 프로모터, CaMV 이중-증강 35S(d35S) 프로모터, 벼 액틴 프로모터, 유비퀴틴 프로모터 및 담배 또는 아라비돕시스 유래 화학적 유도성 PR-1 프로모터로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 키트
25 25
제22항 또는 제23항에 있어서, 식물 이원 벡터가 pGreen 시리즈 벡터, pGA 시리즈 벡터, pCG 시리즈 벡터, pCIT 시리즈 벡터, pGPTV 시리즈 벡터, pBECK2000 시리즈 벡터 및 Binary-BAC(BIbAD) 벡터로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 키트
26 26
제20항에 있어서, DB 벡터가 서열번호: 6의 염기서열로 기재되는 유전자 절편을 포함하는 벡터인 것인 키트
27 27
제26항에 있어서, DB 벡터가 도 1의 B로 표시되는 개열지도를 갖는 pGreenII0179-d35S-IbDB 벡터인 것인 키트
28 28
제20항에 있어서, AD 벡터가 서열번호: 9의 염기서열로 기재되는 유전자 절편을 포함하는 벡터인 것인 키트
29 29
제28항에 있어서, AD 벡터가 도 1의 C로 표시되는 개열지도를 갖는 pGreenII0179-d35S-IbAD 벡터인 것인 키트
30 30
제20항에 있어서, DB 벡터 및 AD 벡터의 다중 클로닝 부위 내에 각각 베이트 단백질과 프레이 단백질을 코딩하는 염기서열을 삽입하기 위한 제한효소 인식부위를 추가로 포함하는 것인 키트
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1 교육과학기술부 한국생명공학연구원 기초연구사업(일반) 분자대사공학기술이용 바이러스 감염, 염증 제어용 스틸벤 화합물 생산시스템 구축