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(a) 폴딩 (folding) 리포터 단백질이 표적 단백질의 다양한 내부 위치에 삽입된 융합 단백질을 갖는 표적 단백질 라이브러리를 제조하는 단계;(b) 표적 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 폴딩 리포터 단백질이 융합된 대조군보다 리포터 단백질의 활성이 높은 콜로니를 상기 표적 단백질 라이브러리로부터 선별하는 단계; (c) 상기 선별된 콜로니의 융합 단백질 서열을 분석하여 폴딩 리포터 단백질이 삽입된 위치를 확인하는 단계를 포함하는, 표적 단백질 중 수정이 가능한 허용 위치 (permissive site)를 선별하는 단계; 및(d) 상기 선별된 허용 위치에 돌연변이, 화학적 수식 또는 이종 단백질의 융합을 수행하는 단계를 포함하는, 변형된 표적 단백질을 제조하는 방법으로서,상기 변형된 표적 단백질은 야생형에 비해 안전성이 개선된 것인 방법
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(a) 폴딩 (folding) 리포터 단백질이 표적 단백질의 다양한 내부 위치에 삽입된 융합 단백질을 갖는 표적 단백질 라이브러리를 제조하는 단계;(b) 표적 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 폴딩 리포터 단백질이 융합된 대조군보다 리포터 단백질의 활성이 높은 콜로니를 상기 표적 단백질 라이브러리로부터 선별하는 단계; (c) 상기 선별된 콜로니의 융합 단백질 서열을 분석하여 폴딩 리포터 단백질이 삽입된 위치를 확인하는 단계를 포함하는, 표적 단백질 중 수정이 가능한 허용 위치 (permissive site)를 선별하는 단계; 및(d) 상기 선별된 허용 위치에 돌연변이, 화학적 수식 또는 이종 단백질의 융합을 수행하는 단계를 포함하는, 변형된 표적 단백질을 제조하는 방법으로서,상기 변형된 표적 단백질은 야생형에 비해 타겟 세포로 도입이 개선된 것인 방법
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(a) 폴딩 (folding) 리포터 단백질이 표적 단백질의 다양한 내부 위치에 삽입된 융합 단백질을 갖는 표적 단백질 라이브러리를 제조하는 단계;(b) 표적 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 폴딩 리포터 단백질이 융합된 대조군보다 리포터 단백질의 활성이 높은 콜로니를 상기 표적 단백질 라이브러리로부터 선별하는 단계; (c) 상기 선별된 콜로니의 융합 단백질 서열을 분석하여 폴딩 리포터 단백질이 삽입된 위치를 확인하는 단계를 포함하는, 표적 단백질 중 수정이 가능한 허용 위치 (permissive site)를 선별하는 단계; 및(d) 상기 선별된 허용 위치에 돌연변이, 화학적 수식 또는 이종 단백질의 융합을 수행하는 단계를 포함하는, 변형된 표적 단백질을 제조하는 방법으로서,상기 표적 단백질은 인간 성장 호르몬인 것인 방법
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제18항에 있어서, 상기 인간 성장 호르몬의 야생형은 서열번호 1로 기재된 아미노산이고, 허용 위치는 49번째의 글루타민 (Q), 50번째의 쓰레오닌 (T), 51번째의 세린 (S), 129번째의 글루탐산 (E), 130번째의 아스파라긴산 (D), 131번째의 글리신 (G), 133번째의 프롤린 (P), 134번째의 알지닌 (R), 135번째의 쓰레오닌 (T), 136번째의 글리신 (G), 141번째의 글루타민 (Q), 142번째의 쓰레오닌 (T), 143번째의 타이로신 (Y), 144번째의 세린 (S), 155번째의 알라닌 (A), 156번째의 루이신 (L), 157번째의 루이신 (L) 및 158번째의 라이신 (K) 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산인 것인 방법
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서열번호 1로 기재된 인간 성장 호르몬에 있어서, 허용 위치인 49번째의 글루타민 (Q), 50번째의 쓰레오닌 (T), 51번째의 세린 (S), 129번째의 글루탐산 (E), 130번째의 아스파라긴산 (D), 131번째의 글리신 (G), 133번째의 프롤린 (P), 134번째의 알지닌 (R), 135번째의 쓰레오닌 (T), 136번째의 글리신 (G), 141번째의 글루타민 (Q), 142번째의 쓰레오닌 (T), 143번째의 타이로신 (Y), 144번째의 세린 (S), 155번째의 알라닌 (A), 156번째의 루이신 (L), 157번째의 루이신 (L) 및 158번째의 라이신 (K) 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산에 돌연변이, 화학적 수식 또는 이종 단백질을 융합시킨 변형된 인간 성장 호르몬
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제20항에 있어서, 상기 아미노산의 돌연변이는 아스파라진 (N) 또는 시스테인 (C)으로 치환시킨, 변형된 인간 성장 호르몬
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제20항에 있어서, 허용 위치인 49번째의 글루타민 (Q), 129번째의 글루탐산 (E), 134번째의 알지닌 (R) 및 141번째의 글루타민 (Q) 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 각각을 아스파라진 (N)으로 돌연변이시켜서 당쇄화시킨 변형된 인간 성장 호르몬
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제20항에 있어서, 허용 위치인 49번째의 글루타민 (Q), 129번째의 글루탐산 (E), 134번째의 알지닌 (R) 및 141번째의 글루타민 (Q) 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 각각을 시스테인 (C)으로 치환시킨 후, 페길화시킨 변형된 인간 성장 호르몬
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제20항에 있어서, 허용 위치인 49번째의 글루타민 (Q), 50번째의 쓰레오닌 (T), 51번째의 세린 (S), 129번째의 글루탐산 (E), 130번째의 아스파라긴산 (D), 131번째의 글리신 (G), 133번째의 프롤린 (P), 134번째의 알지닌 (R), 135번째의 쓰레오닌 (T), 136번째의 글리신 (G), 141번째의 글루타민 (Q), 142번째의 쓰레오닌 (T), 143번째의 타이로신 (Y), 144번째의 세린 (S), 155번째의 알라닌 (A), 156번째의 루이신 (L), 157번째의 루이신 (L) 및 158번째의 라이신 (K) 아미노산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 각각에 당쇄를 부가한 변형된 인간 성장 호르몬
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