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고체 지지체 결합용 단백질-L-형광단백질로 구성되는 카스파제-3(caspase-3) 활성 검출용 융합단백질:
여기서, 상기 L은 DEVD 아미노산 서열을 포함하는 링커임
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제1항에 있어서, 상기 고체 지지체 결합용 단백질은 글루타치온-S 전이효소(glutathinoe-S transferase, GST), 말토오즈 결합단백질(Maltose Binding Protein, MBP) 및 헥사히스티딘(6×Histidine)으로 구성된 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 융합단백질
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제1항에 있어서, 상기 형광단백질은 EGFP(enhanced green fluorescent protein), ECFP (enhanced cyan fluorescent protein), EBFP (enhanced blue fluorescent protein), EYFP (enhanced yellow fluorescent protein) 및 RFP (red fluorescent protein)로 구성된 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 융합단백질
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제1항에 있어서, 상기 링커는 6~9개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 융합단백질
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제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 융합단백질이 기질 상에 고정되어 있는 것을 특징으로 하는 카스파제-3 활성 검출용 단백질 칩
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제5항에 있어서, 상기 기질은 금속인 것을 특징으로 하는 단백질 칩
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제6항에 있어서, 상기 융합단백질의 고체 지지체 결합용 단백질은 GST이고, 융합단백질의 GST가 글루타치온 금속 기질 표면의 글루타치온에 결합함으로써 고정된 것임을 특징으로 하는 단백질 칩
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8
제7항에 있어서, 상기 금속은 골드(Au)인 것을 특징으로 하는 단백질 칩
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제5항에 있어서, 상기 융합단백질의 고체 지지체 결합용 단백질은 GST이고, 상기 GST가 글루타치온 유리 기질 표면의 글루타치온에 결합함으로써 고정된 것임을 특징으로 하는 단백질 칩
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10
제1항의 융합단백질을 이용하는 것을 특징으로 하는 카스파제-3의 활성 검출방법
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제10항에 있어서, 다음의 단계를 포함하는 카스파제-3의 활성 검출방법:
(a) 고체 지지체에 제1항의 융합단백질을 고정시키는 단계;
(b) 상기 고체 지지체 상에 고정된 융합단백질에 카스파제-3을 처리하는 단계; 및
(c) 상기 카스파제-3 처리된 융합단백질의 형광단백질의 형광 시그널을 분석하여 상기 카스파제-3의 활성을 검출하는 단계
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제10항에 있어서, 다음의 단계를 포함하는 카스파제-3의 활성 검출방법:
(a) 제1항의 융합단백질에 카스파제-3을 처리하는 단계; 및
(b) 상기 카스파제-3 처리된 융합단백질에 상기 융합단백질의 고체 지지체 결합용 단백질에 대한 항체를 이용하여 면역블로팅(immunoblotting)을 수행하여 처리된 카스파제-3의 활성을 검출하는 단계
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제5항의 단백질 칩을 이용하는 것을 특징으로 하는 카스파제-3의 활성 검출방법
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다음의 단계를 포함하는 카스파제-3의 활성 검출방법:
(a) 제6항의 단백질 칩의 표면에 카스파제-3을 도입하여 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 반응시킨 단백질 칩의 SPR(surface plasmon resonance) 이미지를 분석하여 도입된 카스파제-3의 활성을 검출하는 단계
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다음의 단계를 포함하는 카스파제-3의 활성 검출방법:
(a) 제5항의 단백질 칩의 표면에 카스파제-3을 도입하여 반응시키는 단계; 및
(c) 상기 반응시킨 단백질 칩의 형광 이미지를 분석하여 도입된 카스파제-3의 활성을 검출하는 단계
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