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단백질이미징과 신약 검색용 신기술로써의 iFRET 탐침과 이미징 장비

  • 기술번호 : KST2014065665
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 iFRET용 탐침 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 신규 iFRET용 탐침, iFRET용 탐침의 제조 방법, iFRET용 탐침을 이용하여 표적 단백질에 특이적인 결합부위 또는 상기 결합부위를 갖는 분자를 검색하는 방법, iFRET용 탐침을 통해 표적 단백질을 이미지화하는 방법에 관한 것이다.본 발명에 따른 iFRET용 탐침은 기존의 FRET 방법과 달리 단백질 내의 아미노산을 형광 주게(donor)로 사용하므로 하나의 형광물질만 사용되어지고, 단백질고유 형광과 분리된 발광파장을 가지므로 높은 특이성과 민감도를 가지므로 다양한 단백질의 양, 활성 및 기작 등을 보다 쉽고 정확하게 분석할 수 있다.
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) C07C 233/87 (2006.01) G01N 21/63 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020120068249 (2012.06.25)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1429247-0000 (2014.08.05)
공개번호/일자 10-2013-0001178 (2013.01.03) 문서열기
공고번호/일자 (20140812) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020110061404   |   2011.06.23
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호 1020140027319;
심사청구여부/일자 Y (2012.06.25)
심사청구항수 41

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 정상전 대한민국 대전광역시 유성구
2 김주환 대한민국 대전광역시 유성구
3 러치키나, 엘레나 러시아 대전광역시 유성구
4 강효진 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 손민 대한민국 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국(산업통상자원부장관) 세종특별자치시 한누리대
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2012.06.25 수리 (Accepted) 1-1-2012-0506144-07
2 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2013.10.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0691041-78
3 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2013.12.04 수리 (Accepted) 1-1-2013-1110604-34
4 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2014.01.06 수리 (Accepted) 1-1-2014-0011683-97
5 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2014.02.07 수리 (Accepted) 1-1-2014-0121715-62
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.03.07 수리 (Accepted) 1-1-2014-0225934-60
7 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application		 2014.03.07 수리 (Accepted) 1-1-2014-0225970-04
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.03.07 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-0225936-51
9 등록결정서
Decision to grant		 2014.07.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0523953-86
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
표적 단백질에 특이적인 결합부위(binding site) 또는 상기 결합부위를 갖는 분자; 및 iFRET 받게(acceptor)기능을 갖는 형광분자로 하기 화학식 I 내지 XXII로 기재되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되어진 분자가 직접 또는 링커를 통해 결합된 iFRET용 탐침으로서, 450 nm 또는 그 이상의 장파장의 빛을 방출하는 iFRET용 탐침을 준비하는 제1단계;상기 표적 단백질에 제1단계에서 준비된 iFRET용 탐침을 처리하는 제2단계; 및표적 단백질 내 아미노산을 여기시키는 파장을 포함하는 빛을 조사하고 발광하는 iFRET용 탐침을 확인하는 제3단계를 포함하여,표적 단백질에 특이적인 결합부위 또는 상기 결합부위를 갖는 분자를 검색하는 방법
2 2
제1항에 있어서,상기 검색 방법에 의해 확인된, 표적 단백질에 특이적인 결합부위 또는 상기 결합부위를 갖는 분자는 상기 표적 단백질이 관여하는 질환을 예방, 개선 또는 치료하기 위한 물질 또는 이의 일부로 사용되는 것이 특징인 검색 방법
3 3
제1항에 있어서,단백질의 고유 형광을 발휘하는 아미노산은 트립토판(Tryptophan), 티로신(Tyrosine), 페닐알라닌(Phenylalanine) 또는 이들의 조합인 것이 특징인 검색 방법
4 4
제1항에 있어서,제2단계는 물, 완충용액, 탄소수 1 내지 6의 저급알콜 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매 내에서 또는 바이오칩, 미세입자 상, 극미세입자상, 세포 또는 조직(tissue)에서 수행하는 것이 특징인 검색 방법
5 5
제1항에 있어서,표적 단백질은 260 내지 300 nm 파장의 빛에 의해 여기되어 290 내지 400 nm 파장의 빛을 발광하고,iFRET용 탐침은 300 내지 400 nm 파장의 빛에 의하여 선택적으로 여기되는 것이 특징인 검색 방법
6 6
삭제
7 7
표적 단백질에 특이적인 결합부위(binding site) 또는 상기 결합부위를 갖는 분자를 다양한 후보군에서 수득하여 단백질의 고유 형광(intrinsic fluorescence)에 대한 받게(acceptor)기능을 갖는 제1 형광분자와 직접 또는 링커를 통해 연결하여 제1 iFRET용 탐침을 제조하는 제1단계;상기 표적 단백질에 제1 iFRET용 탐침을 처리하는 제2단계;표적 단백질 내 아미노산을 여기시키는 파장을 포함하는 빛을 조사하고 발광하는 제1 iFRET용 탐침을 확인하는 제3단계; 및상기 제3단계에서 발광하는 제1 iFRET용 탐침을 구성하는, 표적 단백질에 특이적인 결합부위 또는 상기 결합부위를 갖는 분자를 단백질의 고유 형광에 대한 받게 기능을 갖는 제2 형광분자와 직접 또는 링커를 통해 연결하여 제2 iFRET용 탐침을 제조하는 제4단계를 포함하여 iFRET용 탐침을 제조하는 방법으로서,상기 제1 형광분자 및 제2 형광분자는 각각 독립적으로 하기 화학식 I 내지 XXII로 기재되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되어진 분자이고,제2 iFRET용 탐침은 450 nm 또는 그 이상의 장파장의 빛을 방출하는 것이 특징인 iFRET용 탐침 제조방법
8 8
제7항에 있어서,제1 형광분자 및 제2 형광분자는 동일 또는 상이한 것이 특징인 iFRET용 탐침 제조 방법
9 9
제7항에 있어서,단백질의 고유 형광을 발휘하는 아미노산은 트립토판(Tryptophan), 티로신(Tyrosine), 페닐알라닌(Phenylalanine) 또는 이들의 조합인 것이 특징인 iFRET용 탐침 제조 방법
10 10
제7항에 있어서,제3단계는 물, 완충용액, 탄소수 1 내지 6의 저급알콜 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 용매 내에서 또는 바이오칩, 미세입자 상, 극미세입자상, 세포 또는 조직(tissue)에서 수행하는 것이 특징인 iFRET용 탐침 제조 방법
11 11
삭제
12 12
제7항에 있어서,표적 단백질은 260 내지 300 nm 파장의 빛에 의해 여기되어 290 내지 400 nm 파장의 빛을 방출하고, 제1 iFRET용 탐침은 300 내지 400 nm 파장의 빛에 의하여 선택적으로 여기되는 것이 특징인 iFRET용 탐침 제조 방법
13 13
삭제
14 14
표적 단백질에 특이적인 결합부위(binding site) 또는 상기 결합부위를 갖는 분자; 및 iFRET 받게(acceptor)기능을 갖는 형광분자로 하기 화학식 I 내지 XXII로 기재되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되어진 분자가 직접 또는 링커를 통해 결합된 iFRET용 탐침으로서,450 nm 또는 그 이상의 장파장의 빛을 방출하는 것이 특징인 iFRET용 탐침
15 15
삭제
16 16
제14항에 있어서,표적 단백질은 캐스파제-3(Caspase-3), HSP90(heat shock protein 90) 또는 스트렙트아비딘(streptavidin)인 것이 특징인 iFRET용 탐침
17 17
제14항에 있어서,하기 화학식 XXIII, XXIV, 또는 XXVI 내지 XXXII로 구성된 군으로부터 선택된 화학식으로 표시되는 것이 특징인 iFRET용 탐침
18 18
삭제
19 19
제7항 내지 제10항 및 제12항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 의해 제조된 제2 iFRET용 탐침 또는 제14항, 제16항 및 제17항 중 어느 한 항에 기재된 iFRET용 탐침을, 표적 단백질이 함유된 샘플 내에 첨가하는 제1단계; 및표적 단백질 내 아미노산을 여기시키는 파장을 포함하는 빛을 조사하고 상기 iFRET용 탐침이 발광하는 빛을 확인 또는 추적하는 제2단계를 포함하여,iFRET에 의해 표적 단백질을 검출 또는 이미지화하는 방법
20 20
제19항에 있어서,표적 단백질의 양 또는 표적 단백질의 활성을 측정하거나, 표적 단백질의 작용기전 또는 이동 경로를 추적하는데 사용되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
21 21
제19항에 있어서,상기 iFRET용 탐침과 병용하여 특정 물질을 샘플 내에 첨가하고 표적 단백질 내 아미노산을 여기시키는 파장을 포함하는 빛을 조사하고 상기 iFRET용 탐침이 발광하는 빛을 확인 또는 추적하는 제3단계를 더 포함하고, 특정 물질의 존재 여부에 따라, 표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 빛을 조사하여 상기 iFRET용 탐침이 발광하는 빛의 변화를 확인하여, 표적 단백질에 대해 소정의 기능을 갖는 특정 물질을 스크리닝하거나 상기 특정 물질의 표적 단백질에 대한 기능을 확인하는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
22 22
제21항에 있어서,상기 특정 물질은 표적 단백질과 관련된 질환을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약물 또는 식품 첨가제인 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
23 23
제19항에 있어서,샘플은 표적 단백질 자체, 세포, 조직(tissue), 혈액, 분뇨, 물, 토양, 공기, 식품, 폐기물, 동식물 장내 및 동식물 조직 및 생물체 자체로 구성된 군에서 선택된 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
24 24
제20항에 있어서,표적 단백질의 기능을 확인하거나, 다양한 검체로부터 질병관련 표적 단백질을 검출하는 방법으로 이용하여 질병진단하거나, 식품, 사료, 음료에서 미생물 혹은 미생물 유래 표적 단백질을 검출하는 방법으로 사용되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
25 25
제19항에 있어서,제2단계에서 iFRET용 탐침이 방출하는 빛 중 450nm 또는 그 이상의 장파장의 빛을 확인 또는 추적하는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
26 26
제19항에 있어서,자동화 워크스테이션에 의해 수행되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
27 27
하기 화학식 XXIII로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXIII]
28 28
하기 화학식 XXIV으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXIV]
29 29
하기 화학식 XXVI으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXVI]
30 30
하기 화학식 XXVII으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXVII]
31 31
하기 화학식 XXVIII으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXVIII]
32 32
하기 화학식 XXIX으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXIX]
33 33
하기 화학식 XXX으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXX]
34 34
하기 화학식 XXXI으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXXI]
35 35
하기 화학식 XXXII으로 표시되는 화합물 또는 이의 염:[화학식 XXXII]
36 36
고유 형광 공명 에너지 전이(iFRET)용 탐침을 이용한 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법으로서,상기 iFRET용 탐침은 표적 단백질에 특이적인 결합부위(binding site) 또는 상기 결합부위를 갖는 분자; 및 표적 단백질의 고유 형광(intrinsic fluorescence)에 대한 받게(acceptor)기능을 갖는 형광 분자가 직접 또는 링커를 통해 결합된 것이고, 상기 형광분자는 하기 화학식 I 내지 XXII로 기재되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되어진 분자이고, 상기 iFRET용 탐침은 450 nm 또는 그 이상의 장파장의 빛을 방출하는 것이고,상기 iFRET용 탐침을 표적 단백질이 함유된 시료 내에 도입시키는 제1단계;표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 파장대의 제1 광 및 iFRET용 탐침의 형광분자를 여기하는 파장대의 제2 광을 번갈아 제1단계에서 제조된 시료에 조사하는 제2단계; 및표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 파장대의 제1 광을 시료 상에 조사하여 iFRET 용 탐침에서 생성되는 제1 발광 신호값과, iFRET용 탐침의 형광분자를 여기하는 파장대의 제2 광을 조사하여 iFRET 용 탐침에서 생성되는 제2 발광 신호값을 분석하여, 제1 발광 신호값과 제2 발광 신호값의 비율 계량법(ratiometric measurement)에 의해 제3 발광 신호값을 산출하는 제3단계를 포함하는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
37 37
제36항에 있어서,제1 발광 신호값, 제2 발광 신호값 및 제3 발광 신호값은 시료의 2차원 각 지점에 대응되는 2차원적인 영상값인 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
38 38
제36항에 있어서,제1광의 파장 범위는 260 ㎚ 내지 300 ㎚ 이고, 제2광의 파장 범위는 300 ㎚ 내지 400 ㎚ 인 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
39 39
제36항에 있어서,표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 파장대의 제1 광 및 iFRET용 탐침의 형광분자를 여기하는 파장대의 제2 광을 일정한 시간 간격으로 번갈아 조사하고,표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 파장대의 제1 광을 시료 상에 조사하여 iFRET 용 탐침에서 생성되는 제1 발광 신호값과, iFRET용 탐침의 형광분자를 여기하는 파장대의 제2 광을 조사하여 iFRET 용 탐침에서 생성되는 제2 발광 신호값으로부터 비율 계량법(ratiometric measurement)에 의해 제3 발광 신호값이 일정한 시간 간격으로 산출되고 축적되어, 시간에 따른 표적 단백질의 위치, 양 또는 둘다의 변화를 확인할 수 있는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
40 40
제36항에 있어서,시간에 따른 표적 단백질의 변화는 동영상으로 산출되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
41 41
제36항에 있어서,표적 단백질의 양 또는 표적 단백질의 활성을 측정하거나, 표적 단백질의 작용기전 또는 이동 경로를 추적하는데 사용되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
42 42
제36항에 있어서,상기 iFRET용 탐침과 병용하여 특정 물질을 시료 내에 첨가하고 표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 빛을 조사하여 상기 iFRET용 탐침이 발광하는 빛을 확인 또는 추적하는 제4단계를 더 포함하고,특정 물질의 존재 여부에 따라, 표적 단백질 내 아미노산을 여기하는 빛을 조사하여 상기 iFRET용 탐침이 발광하는 빛의 변화를 확인하여,표적 단백질에 대해 소정의 기능을 갖는 특정 물질을 스크리닝하거나 상기 특정 물질의 표적 단백질에 대한 기능을 확인하는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
43 43
제42항에 있어서,상기 특정 물질은 표적 단백질과 관련된 질환을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약물 또는 식품 첨가제인 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는이미지화 방법
44 44
제36항에 있어서,샘플은 표적 단백질 자체, 세포, 조직(tissue), 혈액, 분뇨, 물, 토양, 공기, 식품, 폐기물, 동식물 장내 및 동식물 조직 및 생물체 자체로 구성된 군에서 선택된 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
45 45
제42항에 있어서,표적 단백질의 기능을 확인하거나, 다양한 검체로부터 질병관련 표적 단백질을 검출하는 방법으로 이용하여 질병진단하거나, 식품, 사료, 음료에서 미생물 혹은 미생물 유래 표적 단백질을 검출하는 방법으로 사용되는 것이 특징인 표적 단백질의 검출 또는 이미지화 방법
46 46
제42항에 있어서,자동화 워크스테이션에 의해 수행되는 것이 특징인 표적 단백질 검출 또는 이미지화 방법
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2 JP06182525 JP 일본 FAMILY
3 JP26522965 JP 일본 FAMILY
4 KR1020140040194 KR 대한민국 FAMILY
5 US20140242606 US 미국 FAMILY
6 WO2012177106 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
7 WO2012177106 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 EP2725357 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
2 EP2725357 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
3 JP2014522965 JP 일본 DOCDBFAMILY
4 JP6182525 JP 일본 DOCDBFAMILY
5 KR20140040194 KR 대한민국 DOCDBFAMILY
6 US2014242606 US 미국 DOCDBFAMILY
7 WO2012177106 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
8 WO2012177106 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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1 교육과학기술부 한국생명공학연구원 미래기반기술개발사업 무표지 바이오 이미징 기술을 이용한 생체신호 관련 단백질 검출 및 특성 연구
2 교육과학기술부 한국생명공학연구원 미래기반기술개발사업 위암 예후/ 약물감수성 지표 표적형 바이오마커 진단용 면역어레이칩 개발