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호스트-게스트 화학반응을 이용하여 표면 막단백질을 선택적으로 농축분리정제하는 유무기복합체에 있어서,
게스트 화합물, 상기 표면 막단백질과 결합되는 부분, 또는 상기 게스트 화합물과 상기 표면 막단백질 결합부분을 연결하는 이황화결합 작용기,
상기 게스트 화합물과 결합하는 호스트 화합물, 또는 상기 호스트 화합물이 코팅된 자성물질을 포함하는, 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제1항에 있어서, 상기 게스트 화합물, 상기 표면 막단백질과 결합되는 부분, 또는 상기 게스트 화합물과 상기 표면 막단백질 결합부분을 연결하는 이황화결합 작용기를 포함하는 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology Information) 연결자와, 상기 호스트 화합물 또는 상기 호스트 화합물이 코팅된 자성물질을 포함하는 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology Information) 자성입자로 이루어지는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제2항에 있어서, 상기 MEPSET 연결자는 하기 화학식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제2항에 있어서, 상기 MEPSET 연결자는 친수성인 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제2항에 있어서, 상기 MEPSET 연결자는 표면 막단백질의 세포 외부에 노출되어 있는 시스테인 잔기 또는 라이신 잔기와 반응하는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제2항에 있어서, 상기 표면 막단백질의 세포 외부에 노출되어 있는 형태는, 상기 MEPSET 연결자에 포함된 표면 막단백질의 질량차이에 의해 나타나는 질량 테그(mass-tag)에 따라 추론하는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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7
제2항에 있어서, 상기 MEPSET 자성입자는 하기 구조식 1로 표시되는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제2항에 있어서, 상기 MEPSET 자성입자는 상기 호스트 화합물이 부착된 마이크로 또는 마크로 크기의 비드, 캡슐, 다각형, 또는 판형을 포함하는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 MEPSET 자성입자와 상기 표면 막단백질에 표지된 MEPSET 연결자를 사용하여, 상기 표면 막단백질을 농축, 분리, 또는 정제하는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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제1항 또는 제2항에 있어서, 형광물질인 이소티오시아네이트가 공유결합된 α-시클로덱스트린(α-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate), β-시클로덱스트린(β-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate), 또는 γ-시클로덱스트린(γ-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate) 중 적어도 어느 하나 이상을 도입한 상기 MEPSET 자성입자와 상기 표면 막단백질에 표지된 MEPSET 연결자를 사용하여, 상기 표면 막단백질에 표지된 MEPSET 연결자의 분포를, 형광을 인식하는 공초점현미경(confocal microscopy)으로 관찰할 수 있는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체
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세포표면에 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology Information) 연결자를 도입하는 단계;
상기 MEPSET 연결자 도입된 세포를 분쇄하는 단계;
상기 분쇄된 세포에 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology Information) 자성입자를 포함시켜 상기 분쇄 세포의 MEPSET 연결자와 호스트-게스트 결합시키는 단계;
상기 호스트-게스트 결합된 상기 분쇄 세포를 자석에 가까이하여 상기 자석에 끌리는 상기 분쇄 세포를 반복 분리하여 농축시키는 단계;
상기 자석에 끌리지 않는 상등액을 제거하는 단계;
상기 자석을 제거하고, 상기 농축된 분쇄 세포가 포함된 용액에서 상기 MEPSET 자성입자로 상등액을 반복하여 제거하는 정제단계;
상기 정제된 분쇄 세포를 세척하고, 상기 정제된 분쇄 세포의 이황화결합을 절단한 후 상기 표면 막단백질을 용출하는 단계;
상기 용출된 표면 막단백질을 건조시키고, 효소 처리하는 단계;
상기 효소 처리된 표면 막단백질을 질량분석기로 분석하는 단계; 및
상기 분석된 표면 막단백질을 데이터베이스와 비교 또는 데이터베이스 검증하는 단계;를 포함하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제방법
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제11항에 있어서, 상기 분쇄된 세포에 형광물질인 이소티오시아네이트가 공유결합된 α-시클로덱스트린(α-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate), β-시클로덱스트린(β-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate), 또는 γ-시클로덱스트린(γ-cyclodextrin-fluorescein isothiocyanate) 중 적어도 어느 하나 이상을 도입한 상기 MEPSET 자성입자를 포함시켜, 상기 분쇄 세포의 MEPSET 연결자와 호스트-게스트 결합시키고, 형광을 인식하는 공초점현미경으로 세포에 도입된 MEPSET 연결자를 관찰하는 단계를 더 포함하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제방법
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제1항에 기재된 표면 막단백질 선택적 농축분리정제용 MEPSET(Membrane Protein Selective Enrichment and Topology) 유무기복합체를 사용한 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제 키트
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제13항에 있어서, 상기 표면 막단백질 선택적 농축분리정제 키트는 신약 연구용 막단백질 기능 및 활성평가, 막단백질 구조 규명, 막단백질 발현, 막단백질 정제, 신규 막단백질 발굴, 신약개발, 또는 백신개발에 사용되는 것을 특징으로 하는 표면 막단백질의 선택적 농축분리정제 키트
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