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형광표지 유전자 라이브러리를 이용한 결합단백질 스크리닝 방법

  • 기술번호 : KST2014066522
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 형광표지 유전자 라이브러리를 이용한 새로운 결합단백질 스크리닝 방법에 관한 것으로서 보다 상세하게는 (a) (i) 목적물질(bait), 제1표지물질 및 이동모듈을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 제2표지물질을 포함하는 제2구성물이 공동으로 발현하는 세포를 제조하는 단계; (b) 표적물질과 목적물질간 상호작용이 이루어지도록 하는 단계; 및 (c) 제1구성물 및 제2구성물의 세포내 분포를 검출하여 표적물질과 목적물질간 상호작용을 확인하는 단계를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 방법 등에 관한 것이다. 본 발명은 세포내에서 일어나는 물질결합(binding) 및 상호작용(interaction)을 살아있는 세포에서 실시간으로 검출하여 목적물질과 결합 또는 상호작용하는 미지의 표적물질을 스크리닝 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 현재까지 알려진 생체물질 상호작용 탐색 방법들이 가지는 부정확성 및 복잡성 등의 단점을 극복하였고, 구성물 모두에 표지를 함으로써 정확도를 더욱 높일 수 있을 뿐 아니라 고속/대용량으로 결합여부를 판별할 수 있어 종래의 분석기술과 차별화되는 새로운 고속/대용량 결합단백질 검출 방법을 제공하는 효과가 있다.
Int. CL G01N 33/58 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)
CPC C12Q 1/02(2013.01) C12Q 1/02(2013.01) C12Q 1/02(2013.01) C12Q 1/02(2013.01) C12Q 1/02(2013.01)
출원번호/일자 1020100037714 (2010.04.23)
출원인 한국기초과학지원연구원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2011-0118231 (2011.10.31) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2014.05.01)
심사청구항수 15

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국기초과학지원연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이지원 대한민국 대전광역시 유성구
2 김수현 대한민국 대전광역시 유성구
3 황정미 대한민국 대전광역시 유성구
4 김건화 대한민국 대전광역시 서구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 김석만 대한민국 서울시 강남구 테헤란로**길 ** *층 (역삼동, JS빌딩)(시원국제특허법률사무소)
2 이희숙 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 **길 ** *층 (역삼동, JS빌딩)(시원국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2010.04.23 수리 (Accepted) 1-1-2010-0261309-39
2 보정요구서
Request for Amendment
2010.04.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2010-0037613-54
3 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment
2010.04.27 수리 (Accepted) 1-1-2010-0272347-11
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2011.10.21 수리 (Accepted) 4-1-2011-5212108-42
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2012.08.31 수리 (Accepted) 4-1-2012-5184293-13
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2012.08.31 수리 (Accepted) 4-1-2012-5184331-50
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.04.15 수리 (Accepted) 4-1-2013-5058386-17
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.04.15 수리 (Accepted) 4-1-2013-5058545-81
9 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)
2014.05.01 수리 (Accepted) 1-1-2014-0420027-48
10 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2015.03.10 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
11 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2015.05.11 수리 (Accepted) 9-1-2015-0031740-58
12 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2015.10.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0752301-88
13 거절결정서
Decision to Refuse a Patent
2016.01.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0052857-55
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.06.22 수리 (Accepted) 4-1-2020-5135881-88
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
하기 단계를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 방법: (a) (i) 목적물질(bait), 제1표지물질 및 이동모듈을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 제2표지물질을 포함하는 제2구성물이 공동으로 발현하는 세포를 제조하는 단계;(b) 표적물질과 목적물질간 상호작용이 이루어지도록 하는 단계; 및(c) 제1구성물 및 제2구성물의 세포내 분포를 검출하여 표적물질과 목적물질간 상호작용을 확인하는 단계
2 2
하기 단계를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 방법: (a) (i) 목적물질(bait) 및 제1표지물질을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey), 제2표지물질 및 이동모듈을 포함하는 제2구성물이 공동으로 발현하는 세포를 제조하는 단계;(b) 표적물질과 목적물질간 상호작용이 이루어지도록 하는 단계; 및(c) 제1구성물 및 제2구성물의 세포내 분포를 검출하여 표적물질과 목적물질간 상호작용을 확인하는 단계
3 3
하기 단계를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 방법:(a) (i) 목적물질(bait), 제1표지물질 및 이동모듈을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 제2표지물질을 포함하는 제2구성물이 공동으로 발현하는 세포를 제조하는 단계;(b) 신호물질을 처리하여 표적물질과 목적물질간 상호작용이 이루어지도록 하는 단계; 및(c) 제1구성물 및 제2구성물의 세포내 분포를 검출하여 표적물질과 목적물질간 상호작용을 확인하는 단계
4 4
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이동모듈은 단백질 인산화효소 C(protein kinase C) 및 이들의 변이체로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법
5 5
제4항에 있어서, 단백질 인산화효소 C 및 이들의 변이체는 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5 및 서열번호 7로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법
6 6
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1표지물질은 GFP(Green Fluorescent Protein), EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein), RFP(Red Fluorescent Protein), mRFP(Monomeric Red Fluorescent Protein), DsRed(Discosoma sp
7 7
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2표지물질은 GFP(Green Fluorescent Protein), EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein), RFP(Red Fluorescent Protein), mRFP(Monomeric Red Fluorescent Protein), DsRed(Discosoma sp
8 8
하기 단계를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 방법:(a) (i) 목적물질(bait), RFP(Red Fluorescent Protein)인 제1표지물질 및 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5 및 서열번호 7로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 가지는 이동모듈을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 GFP(Green Fluorescent Protein)인 제2표지물질을 포함하는 제2구성물이 공동으로 발현하는 세포를 제조하는 단계;(b) 신호물질을 처리하여 표적물질과 목적물질간 상호작용이 이루어지도록 하는 단계; 및(c) 제1구성물 및 제2구성물의 세포내 분포를 검출하여 표적물질과 목적물질간 상호작용을 확인하는 단계
9 9
제8항에 있어서, 상기 신호물질의 처리는 PMA(Phorbol 12-myristate 13-acetate, Phorbol ester)를 50nM 내지 5μM의 농도로 처리하는 것임을 특징으로 하는 방법
10 10
(i) 목적물질(bait), 제1표지물질 및 이동모듈을 포함하는 제1구성물 및 (ii) 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 제2표지물질을 포함하는 제2구성물을 포함하는 세포
11 11
제10항에 있어서, 상기 세포는 (i) 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 목적물질(bait), 제1표지물질 및 이동모듈을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 (ii) 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 제2표지물질을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 공동형질전환된 것임을 특징으로 하는 세포
12 12
제10항에 있어서, 상기 세포는 (i) 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 목적물질(bait), RFP(Red Fluorescent Protein)인 제1표지물질 및 서열번호 1, 서열번호 3, 서열번호 5 및 서열번호 7로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 가지는 이동모듈을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 벡터 및 (ii) 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 오폼(ORFeome) 라이브러리에서 선택된 표적물질(prey) 및 GFP(Green Fluorescent Protein)인 제2표지물질을 암호화하는 뉴클레오티드를 포함하는 벡터로 공동형질전환된 것임을 특징으로 하는 세포
13 13
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 CHO-k1 세포, HEK293 세포, HeLa 세포, SH-SY5Y 세포, Swiss 3T3 세포, 3T3-L1 세포, NIH/3T3 세포, L-929 세포, Rat2 세포, RBL-2H3 세포 및 MDCK 세포로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 세포
14 14
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항의 세포를 포함하는 목적물질(bait)과 상호작용하는 표적물질(prey)의 스크리닝 키트
15 15
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스크리닝 방법은 자동화된(automated) 방법인 것을 특징으로 하는 방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 한국기초과학지원연구원,중소기업청 한국기초과학지원연구원,한국기초과학지원연구원 세포막단백질 분석기술 개발 및 활용,산연 공동기술개발지원사업 대사질환관련 기능성 막단백질 표적 개발,신약후보물질 스크리닝을 위한 실시간 단백질결합 분석시스템 개발