요약 | 본 발명은 재조합 생산이 어려운 난발현성 단백질(non-producible protein)을 발현 및 분비생산 할 수 있는 맞춤형 단백질융합인자(translational fusion partner: TFP)를 다양한 유전자원으로부터 초고속으로 선별하는 기술에 관한 것이다. 단백질융합인자(translational fusion partner: TFP), 효모, 난발현성 단백질(non-producible protein), 인버테이즈 |
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Int. CL | C12Q 1/68 (2006.01) |
CPC | C12Q 1/6806(2013.01) C12Q 1/6806(2013.01) |
출원번호/일자 | 1020040003610 (2004.01.17) |
출원인 | 한국생명공학연구원 |
등록번호/일자 | 10-0626753-0000 (2006.09.14) |
공개번호/일자 | 10-2005-0075661 (2005.07.21) 문서열기 |
공고번호/일자 | (20060925) 문서열기 |
국제출원번호/일자 | |
국제공개번호/일자 | |
우선권정보 | |
법적상태 | 등록 |
심사진행상태 | 수리 |
심판사항 | |
구분 | |
원출원번호/일자 | |
관련 출원번호 | |
심사청구여부/일자 | Y (2004.01.17) |
심사청구항수 | 8 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 한국생명공학연구원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 최의성 | 대한민국 | 대전광역시유성구 |
2 | 손정훈 | 대한민국 | 대전광역시서구 |
3 | 배정훈 | 대한민국 | 경기도과천시 |
4 | 윤남경 | 대한민국 | 대전광역시대덕구 |
5 | 성혜영 | 대한민국 | 대전광역시중구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 손민 | 대한민국 | 서울특별시 송파구 법원로 ***, *층(문정동)(특허법인한얼) |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 한국생명공학연구원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | 특허출원서 Patent Application |
2004.01.17 | 수리 (Accepted) | 1-1-2004-0020662-04 |
2 | 명세서 등 보정서 Amendment to Description, etc. |
2004.01.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2004-0028854-49 |
3 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2005.05.09 | 수리 (Accepted) | 4-1-2005-0016474-59 |
4 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2005.11.16 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2005-0579067-83 |
5 | 의견서 Written Opinion |
2006.01.16 | 수리 (Accepted) | 1-1-2006-0031294-21 |
6 | 명세서등보정서 Amendment to Description, etc. |
2006.01.16 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2006-0031296-12 |
7 | 등록결정서 Decision to grant |
2006.06.15 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2006-0274076-19 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2008.04.10 | 수리 (Accepted) | 4-1-2008-5054980-73 |
9 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2015.02.05 | 수리 (Accepted) | 4-1-2015-0007152-08 |
번호 | 청구항 |
---|---|
1 |
1 (1)진핵세포인 숙주 세포에서의 발현율이 낮은 난발현성 단백질의 유전자(X)와 인프레임(in -frame)으로 연결된 인버테이즈, 아밀레이즈, 글루코아밀레이즈, 갈락토시데이즈, 수크레이즈, 셀루레이즈, 자일라네이즈 및 말테이즈로 구성되는 군으로부터 선택되는 자동 선별용 리포터 유전자(R)의 융합 유전자(X-R)를 포함하는 자동 선별 벡터를 제조하는 단계;(2) 상기 난발현성 유전자와 리포터 유전자의 융합유전자(X-R)에 의해 코딩되는 난발현성 융합 단백질의 분비를 유도하는 단백질융합인자(TFP: translational fusion partner)를 포함하는 게놈성 DNA 또는 cDNA를 상기 자동 선별 벡터와 연결하여 단백질융합인자 라이브러리를 제조하는 단계; (3) 상기 리포터 유전자의 활성이 없는 세포에 상기 단백질융합인자 라이브러리를 형질 전환시켜 리포터 단백질의 활성을 검출하는 단계; 및(4) 리포터 단백질의 활성을 나타내는 형질전환 세포로부터 유전자를 분리하여 단백질융합인자를 선별하는 방법 |
2 |
2 삭제 |
3 |
3 제 1항에 있어서, 난발현성 단백질이 사이토카인, 혈청단백질, 면역글로불린, α-,β-,및γ-인터페론, 콜로니 자극인자, 혈소판 유도된 성장 인자(PDGF), 포스포리파제-활성화 단백질(PLAP) , 인슐린, 종양 괴사 인자(TNF), 성장 인자, 호르몬, 칼시토닌(calcitonin), 칼시토닌 유전자 관련 펩타이드, 엔케팔린(enkephalin), 소마토메딘, 에리스로포이에틴, 시상하부 분비 인자, 프롤락틴, 만성 고나도트로핀, 조직 플라스미노겐 활성화제, 성장호르몬 분비 펩타이드(GHPR) , 흉선 체액성 인자(THF), 탄수화물- 특이적 효소, 단백질 분해 효소, 산화환원 효소, 트랜스퍼라제, 하이드롤라제, 라이아제, 이소머라제 및 리가제로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법 |
4 |
4 제 1항에 있어서, 난발현성 단백질이 인체 인터류킨-2 (IL-2)또는 인체 콜로니 자극인자(G-CSF)인 방법 |
5 |
5 제 1항에 있어서, 게놈성 DNA 또는 cDNA가 캔디다(Candida), 디베리오마이세스(Debaryomyces), 한세눌라(Hansenula) , 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 피키아(Pichia), 스키조사카로마이세스(Schizosaccharomyces), 야로이야(Yarrowia), 사카로마이세스(Saccharomyces), 아스퍼질러스(Aspergillus), 페니실리엄(Penicillium), 라이조퍼스(Rhizopus) 및 트리코더마(Trichoderma)로 구성되는 군으로부터 유래되는 것인 방법 |
6 |
6 제 1 항에 있어서, 리포터 유전자의 활성이 없는 세포가 캔디다(Candida), 디베리오마이세스(Debaryomyces), 한세눌라(Hansenula), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces), 피키아(Pichia), 스키조사카로마이세스(Schizosaccharomyces), 야로이야(Yarrowia), 사카로마이세스(Saccharomyces), 아스퍼질러스(Aspergilluse), 페니실리엄(Pemicillimu), 라이조퍼스(Rhizopus) 및 트리코더마(Trichoderma)로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법 |
7 |
7 제 1항에 있어서, 선별 벡터가 프로모터 유전자, 번역개시 및 종결코돈이 제거된 난발현성 단백질을 코딩하는 유전자 및 이에 인프레임으로 융합된 인버테이즈 코딩 유전자를 포함하는 것인 방법 |
8 |
8 제 1항에 있어서, 선별 벡터에 포함되는 프로모터가 GAPDH, PGK, ADH, PHO5, GAL1, 및 GAL10으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법 |
9 |
9 (1) 인버테이즈 유전자인 INV2(Ⅰ) 를 결실시킨 효모변이주를 제조하는 단계;(2) 효모 GAL10 프로모터에 의해서 발현이 조절되며 인버테이즈(Ⅰ) 유전자와 효모에서 발현율이 낮은 난발형성 유전자(X)가 인프레임(in-frame)으로 융합된 유전자 (X-I)를 함유하는 효모 HTS(high throughput selection)벡터 pYHTS를 제조하는 단계;(3)상기 난발현성 유전자(X)가 코딩하는 단백질과 인버테이즈의 융합 단백질을 분비시킬수 있는 단백질 융합인자(TFP: translational fusion partner)를 포함하는 게놈성 DNA 또는 cDNA를 pYHTS 벡터에 연결하여 단백질 융합인자 라이브러리를 제조하는 단계;(4) 제조된 라이브러리를 단계(1)에서 제조된 효모에 형질전환하고 수크로즈를 단일탄소원으로 포함하고 있는 배지에서 배양하는 단계; 및(5) 상기 수크로즈 배지에서 성장한 효모를 배양하여 배지로 분비된 단백질을 확인하는 단계; 및(6)난발현성 단백질을 분비한 효모로부터 유전자를 분리하여 단백질 융합인자를 선별하는 방법 |
10 |
9 (1) 인버테이즈 유전자인 INV2(Ⅰ) 를 결실시킨 효모변이주를 제조하는 단계;(2) 효모 GAL10 프로모터에 의해서 발현이 조절되며 인버테이즈(Ⅰ) 유전자와 효모에서 발현율이 낮은 난발형성 유전자(X)가 인프레임(in-frame)으로 융합된 유전자 (X-I)를 함유하는 효모 HTS(high throughput selection)벡터 pYHTS를 제조하는 단계;(3)상기 난발현성 유전자(X)가 코딩하는 단백질과 인버테이즈의 융합 단백질을 분비시킬수 있는 단백질 융합인자(TFP: translational fusion partner)를 포함하는 게놈성 DNA 또는 cDNA를 pYHTS 벡터에 연결하여 단백질 융합인자 라이브러리를 제조하는 단계;(4) 제조된 라이브러리를 단계(1)에서 제조된 효모에 형질전환하고 수크로즈를 단일탄소원으로 포함하고 있는 배지에서 배양하는 단계; 및(5) 상기 수크로즈 배지에서 성장한 효모를 배양하여 배지로 분비된 단백질을 확인하는 단계; 및(6)난발현성 단백질을 분비한 효모로부터 유전자를 분리하여 단백질 융합인자를 선별하는 방법 |
지정국 정보가 없습니다 |
---|
순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
---|---|---|---|---|
1 | EP01713930 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
2 | EP01713930 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
3 | EP02275556 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
4 | EP02275556 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
5 | JP05148879 | JP | 일본 | FAMILY |
6 | JP05662363 | JP | 일본 | FAMILY |
7 | JP19517519 | JP | 일본 | FAMILY |
8 | JP24105675 | JP | 일본 | FAMILY |
9 | KR100798894 | KR | 대한민국 | FAMILY |
10 | KR1020050076139 | KR | 대한민국 | FAMILY |
11 | KR1020070101190 | KR | 대한민국 | FAMILY |
12 | US08673822 | US | 미국 | FAMILY |
13 | US09012367 | US | 미국 | FAMILY |
14 | US20070275385 | US | 미국 | FAMILY |
15 | US20140220631 | US | 미국 | FAMILY |
16 | WO2005068658 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
---|---|---|---|---|
1 | CN1954083 | CN | 중국 | DOCDBFAMILY |
2 | CN1954083 | CN | 중국 | DOCDBFAMILY |
3 | JP2007517519 | JP | 일본 | DOCDBFAMILY |
4 | JP2012105675 | JP | 일본 | DOCDBFAMILY |
5 | JP5148879 | JP | 일본 | DOCDBFAMILY |
6 | JP5662363 | JP | 일본 | DOCDBFAMILY |
7 | US2007275385 | US | 미국 | DOCDBFAMILY |
8 | US8673822 | US | 미국 | DOCDBFAMILY |
국가 R&D 정보가 없습니다. |
---|
특허 등록번호 | 10-0626753-0000 |
---|
표시번호 | 사항 |
---|---|
1 |
출원 연월일 : 20040117 출원 번호 : 1020040003610 공고 연월일 : 20060925 공고 번호 : 특허결정(심결)연월일 : 20060615 청구범위의 항수 : 4 유별 : C12Q 1/68 발명의 명칭 : 재조합 단백질 생산용 맞춤형 단백질융합인자의 초고속선별 방법 존속기간(예정)만료일 : |
순위번호 | 사항 |
---|---|
1 |
(권리자) 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구... |
제 1 - 3 년분 | 금 액 | 256,500 원 | 2006년 09월 15일 | 납입 |
제 4 년분 | 금 액 | 216,000 원 | 2009년 08월 13일 | 납입 |
제 5 년분 | 금 액 | 216,000 원 | 2010년 08월 17일 | 납입 |
제 6 년분 | 금 액 | 216,000 원 | 2011년 08월 30일 | 납입 |
제 7 년분 | 금 액 | 404,000 원 | 2012년 08월 21일 | 납입 |
제 8 년분 | 금 액 | 404,000 원 | 2013년 09월 03일 | 납입 |
제 9 년분 | 금 액 | 404,000 원 | 2014년 09월 16일 | 납입 |
제 10 년분 | 금 액 | 700,400 원 | 2015년 09월 17일 | 납입 |
제 11 년분 | 금 액 | 680,000 원 | 2016년 09월 19일 | 납입 |
제 12 년분 | 금 액 | 680,000 원 | 2017년 08월 24일 | 납입 |
제 13 년분 | 금 액 | 400,000 원 | 2018년 08월 06일 | 납입 |
제 14 년분 | 금 액 | 400,000 원 | 2019년 08월 05일 | 납입 |
제 15 년분 | 금 액 | 290,000 원 | 2019년 12월 20일 | 납입 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | 특허출원서 | 2004.01.17 | 수리 (Accepted) | 1-1-2004-0020662-04 |
2 | 명세서 등 보정서 | 2004.01.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2004-0028854-49 |
3 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2005.05.09 | 수리 (Accepted) | 4-1-2005-0016474-59 |
4 | 의견제출통지서 | 2005.11.16 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2005-0579067-83 |
5 | 의견서 | 2006.01.16 | 수리 (Accepted) | 1-1-2006-0031294-21 |
6 | 명세서등보정서 | 2006.01.16 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2006-0031296-12 |
7 | 등록결정서 | 2006.06.15 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2006-0274076-19 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2008.04.10 | 수리 (Accepted) | 4-1-2008-5054980-73 |
9 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2015.02.05 | 수리 (Accepted) | 4-1-2015-0007152-08 |
기술번호 | KST2014066987 |
---|---|
자료제공기관 | 미래기술마당 |
기술공급기관 | 한국생명공학연구원 |
기술명 | 효모 기반 맞춤형 재조합 단백질 대량 생산기술 |
기술개요 |
본 발명은 재조합 생산이 어려운 난발현성 단백질(non-producible protein)을 발현 및 분비생산 할 수 있는 맞춤형 단백질융합인자(translational fusion partner: TFP)를 다양한 유전자원으로부터 초고속으로 선별하는 기술에 관한 것이다. 단백질융합인자(translational fusion partner: TFP), 효모, 난발현성 단백질(non-producible protein), 인버테이즈 |
개발상태 | 연구실환경 테스트 |
기술의 우수성 |
1) inv2에 형질전환하여 sucrose 배지에서 성장하는 균주 또는 성장이 매우 빠른 균주를 선별
2) 현재까지 발현이 매우 어려웠던 다수의 난발현“difficult-to express" 단백질에서도 최적의 TFP를 발굴하고 발현 및 분비가 가능하기 때문에 본 기술은 의약용 뿐만 아니라 산업용이나 연구용 단백질 생산을 위한 원천기술로서 활용가능 3) 기존의 효모 발현시스템으로 분비생산이 불가능했던 인체 IL-2의 분비(수mg/liter 이하)를 약 400-500mg/liter까지 유도하는 분비융합인자 TFP-1을 초고속 선별하여 배양한 결과 약 400-500mg/liter의 인체 IL-2가 분비생산됨을 확인함 4) 상기 예 이외에도 G-CSF, GM-CSF, PDGF, IL-6, IL-1β 및 IFNγ 등 다수의 단백질을 수백 mg/liter 수준으로 고효율 분비생산하였고, 산업효소 CalB를 약 2 grams/liter 분비생산하는 데 성공하였음 5) 효모유전체 및 cDNA 유래의 약 5000종의 TFP library를 구축하고 다양한 목표단백질 유전자와 용이하게 in-frame으로 연결하여 high-throughput하게 최적의 TFP를 발굴할 수 있는 세포내 재조합 시스템을 개발 6) 다수의 난발현 단백질을 대상으로 5000종의 TFP library로부터 38종의 신규 유용 TFP를 발굴하고 특성분석하여 효모유래의 핵심 TFP(core TFP library)로 활용 7) 38종의 핵심 TFP 유전자에 해당하는 ORF를 효모 유전체로부터 PCR로 회수하고 38종의 유전자의 3’말단을 점진적으로 결실시킨 1000종이상의 random deletion library를 제조하여 확장된 핵심 TFP library(Enlarged core TFP library)를 구축 |
응용분야 | ○ 본 기술은 단백질 특성이나 종류에 따라 최적의 TFP를 초고속 선별하는 단백질 맞춤형 생산기술로 난발현 단백질을 포함한 다수의 유용 단백질의 대량생산에 적용가능 |
시장규모 및 동향 |
1) 단백질 의약품에 대한 세계 시장은 2007년 868억 달러에 달했고, 2013년까지 10.9%로 성장하여 1,601억 달러 규모에 이를 것으로 전망됨 2) 2012년 이후 블록버스터급 단백질 의약품 특허가 만료가 이어질 예정이며, 단백질의약품의 제네릭인 바이오시밀러 시장이 성장할 수 있는 여건이 조성되고 있음 |
희망거래유형 | |
사업화적용실적 | |
도입시고려사항 |
과제고유번호 | 1350011850 |
---|---|
세부과제번호 | R01-2004-000-10742-0 |
연구과제명 | 유전체단위검색을통한단백질분비인자발굴및특성분석연구 |
성과구분 | 등록 |
부처명 | 교육과학기술부 |
연구관리전문기관명 | 한국과학재단 |
연구주관기관명 | 한국생명공학연구원 |
성과제출연도 | 2006 |
연구기간 | 200409~200708 |
기여율 | 1 |
연구개발단계명 | 개발연구 |
6T분류명 | BT(생명공학기술) |
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