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유전체 수준의 무작위 돌연변이 유도기술

  • 기술번호 : KST2015022582
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 교정기능이 결손된 변이 DNA 중합효소 델타의 촉매소단위(DNA polymerase delta catalytic subunit) Pol3를 이용한 한세눌라 폴리모파 게놈의 무작위 돌연변이 유도기술에 관한 것으로, 구체적으로 교정기능이 결손된 Pol3 단백질을 생산하는 신규한 발현벡터를 한세눌라 폴리모파에 도입 후, 표적형질을 나타내는 돌연변이 균주를 분리동정하고, 더 이상의 돌연변이 축적을 방지하기 위하여 본 발명의 교정기능이 결손된 Pol3 단백질 발현벡터를 제거하는 방법을 확립하였다. 본 발명의 무작위 돌연변이 유도기술은 산업상 유용한 균주로 알려진 한세눌라 폴리모파의 알려지지 않거나 복합적인 돌연변이를 유도하여 표적형질을 나타내는 돌연변이를 제조하는데 있어서 유용하게 사용될 수 있다.
Int. CL C12N 1/19 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01)
CPC C12N 15/80(2013.01) C12N 15/80(2013.01) C12N 15/80(2013.01)
출원번호/일자 1020130097463 (2013.08.16)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1508635-0000 (2015.03.30)
공개번호/일자 10-2014-0047520 (2014.04.22) 문서열기
공고번호/일자 (20150407) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020120113279   |   2012.10.12
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2013.08.16)
심사청구항수 10

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 권오석 대한민국 대전광역시 유성구
2 오두병 대한민국 대전광역시 유성구
3 김오철 대한민국 대전광역시 유성구
4 황동현 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2013.08.16 수리 (Accepted) 1-1-2013-0744670-51
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2014.02.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2014.03.10 수리 (Accepted) 9-1-2014-0018906-45
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2014.09.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0640837-54
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.10.21 수리 (Accepted) 1-1-2014-1002394-19
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
7 등록결정서
Decision to grant		 2015.03.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0202237-53
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번호 청구항
1 1
1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된 Pol3 단백질에서 317D I E319 아미노산 잔기가 각각 317A G A319로 치환되도록 상기 Pol3 단백질을 암호화하는 유전자를 돌연변이 시켜 핵산말단분해효소 활성이 결여된 돌연변이 Pol3 단백질 발현 유전자를 제조하는 단계;2) 상기 단계 1)의 돌연변이된 유전자, 복제원점, 프로모터, 및 LEU2 유전자 단편(LEU2-C/N) 또는 ADE2 유전자 단편(ADE2-C/N)을 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계; 및3) 상기 단계 2)의 발현벡터를 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 균주에 형질전환시켜 교정기능이 결손된 돌연변이 Pol3 효소를 발현하는 무작위 돌연변이(random mutagenesis) 유도용 한세눌라 폴리모파 균주의 제조방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 Pol3 단백질을 암호화하는 유전자는 한세눌라 폴리모파로부터 유래된 것을 특징으로 하는 무작위 돌연변이 유도용 한세눌라 폴리모파 균주의 제조방법
3 3
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 LEU2 유전자 단편을 포함하는 발현벡터는 도 3a의 벡터 맵(map)을 갖는 pHIF8 벡터인 것을 특징으로 하는 무작위 돌연변이 유도용 한세눌라 폴리모파 균주의 제조방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 ADE2 유전자 단편을 포함하는 발현벡터는 도 3b의 벡터 맵(map)을 갖는 pHIF11 벡터인 것을 특징으로 하는 무작위 돌연변이 유도용 한세눌라 폴리모파 균주의 제조방법
5 5
제 1항에 있어서, 상기 단계 3)의 한세눌라 폴리모파는 한세눌라 폴리모파 DL1-LdU 균주인 것을 특징으로 하는 무작위 돌연변이 유도용 한세눌라 폴리모파 균주의 제조방법
6 6
1) 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된 Pol3 단백질에서 317D I E319 아미노산 잔기가 각각 317A G A319로 치환되도록 상기 Pol3 단백질을 암호화하는 유전자를 돌연변이 시켜 핵산말단분해효소 활성이 결여된 돌연변이 Pol3 단백질 발현 유전자를 제조하는 단계;2) 상기 단계 1)의 돌연변이된 유전자, 복제원점, 프로모터, 및 LEU2 유전자 단편(LEU2-C/N) 또는 ADE2 유전자 단편(ADE2-C/N)을 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계; 3) 상기 단계 2)의 발현벡터를 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha) 균주에 형질전환시켜 교정기능이 결손된 돌연변이 Pol3 효소를 발현하는 한세눌라 폴리모파 균주를 제조하는 단계;4) 상기 단계 3)의 돌연변이 Pol3 효소를 발현하는 한세눌라 폴리모파 균주를 배양하여 무작위 돌연변이를 균주를 유발시키는 단계;5) 상기 단계 4)의 무작위 돌연변이 균주들 중에서 표적형질을 갖는 돌연변이 균주를 선별하는 단계; 및6) 상기 단계 5)의 선별된 돌연변이 균주 중에서 무작위 돌연변이가 축적되는 것을 방지하기 위해, 돌연변이 벡터를 제거하는 단계를 포함하는 한세눌라 폴리모파 균주의 무작위 돌연변이(random mutagenesis) 유도방법
7 7
제 6항에 있어서, 상기 단계 2)의 LEU2 유전자 단편을 포함하는 발현벡터는 도 3a의 벡터 맵(map)을 갖는 pHIF8 벡터인 것을 특징으로 하는 한세눌라 폴리모파 균주의 무작위 돌연변이 유도방법
8 8
제 6항에 있어서, 상기 단계 2)의 ADE2 유전자 단편을 포함하는 발현벡터는 도 3b의 벡터 맵(map)을 갖는 pHIF11 벡터인 것을 특징으로 하는 한세눌라 폴리모파 균주의 무작위 돌연변이 유도방법
9 9
제 6항에 있어서, 상기 단계 3)의 한세눌라 폴리모파는 한세눌라 폴리모파 DL1-LdU 균주인 것을 특징으로 하는 한세눌라 폴리모파 균주의 무작위 돌연변이 유도방법
10 10
제 6항에 있어서, 단계 6)의 벡터의 제거는 LEU2 또는 ADE2 유전자를 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)으로 증폭한 후, 형질전환하여 상동 재조합 방법을 이용하는 것을 특징으로 하는 한세눌라 폴리모파 균주의 무작위 돌연변이 유도방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 농림축산식품부 한국생명공학연구원 차세대 바이오그린21사업 도메인 조합형 인공 2개-인자 신호전달계 개발
2 교육과학기술부 한국생명공학연구원 원천기술개발사업 지능형 바이오부품 모듈화 및 어셈블리 기술 개발
3 교육과학기술부 한국생명공학연구원 주요사업(연구개발과제) 바이오화학 플랫폼케미컬 생산 스마트 세포공장 기술개발