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다음의 단계를 포함하는 YlMpo1(Yarrowia lipolytica MNN4 homologue MPO1) 효소를 이용하여 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법:(a) 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6 또는 서열번호 8의 아미노산 서열로 표시되는 YlMpo1 효소를 이용한 만노스인산화 효소반응을 통해 당사슬에 만노스-6-인산-1-만노스를 부가시키는 단계; 및(b) 상기 만노스-6-인산-1-만노스가 부가된 당사슬의 바깥쪽 만노스를 제거하여 만노스-6-인산이 부가된 당사슬을 생성시키는 단계
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제1항에 있어서, 상기 YlMpo1(Yarrowia lipolytica MNN4 homologue MPO1)은 야로위아 리포리티카(Yarrowia lipolytica) 유래인 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 당사슬은 Man3-9GlcNAc2 (M3-9)인 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 당사슬에 만노스-6-인산-1-만노스를 부가시키는 과정은 완충용액, 금속이온 및 GDP-만노스(mannose)가 추가로 첨가되는 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제4항에 있어서, 상기 완충용액은 pH 5
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제4항에 있어서, 상기 금속이온은 칼슘이온 또는 망간이온인 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제4항에 있어서, 상기 (a) 단계의 당사슬에 만노스-6-인산-1-만노스를 부가시키는 과정은 계면활성제(surfactant)가 추가로 첨가되는 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제7항에 있어서, 상기 계면활성제(surfactant)는 노닐 페녹시폴리에톡시에탄올(nonyl phenoxypolyethoxylethanol; NP-40), 폴리옥시에틸렌옥틸페닐에테르(polyoxyethylene octyl phenyl ether; Triton X-100), 폴리옥시에칠렌소르비톨모노라우레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate; Tween-20), 폴리옥시에틸렌 (23) 라우릴 에테르(Polyoxyethylene (23) lauryl ether; Brij-35) 및 3-[(3-콜아미도프로필)디메틸암모니오]-1-프로페인셀퍼네이트(3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate; CHAPS)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 만노스-6-인산-1-만노스가 부가된 당사슬의 바깥쪽 만노스를 제거하는 과정은 약산 가수분해 또는 캡핑 제거(uncapping) 효소를 이용하는 것을 특징으로 하는 당사슬에 만노스-6-인산을 부가시키는 방법
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제9항에 있어서, 상기 약산은 0
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제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 방법에 의해 만노스-6-인산을 부가하는 것을 특징으로 하는 당단백질의 제조방법
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제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 만노스-6-인산이 부가된 당사슬과 단백질을 화학적 또는 물리적으로 결합시키는 것을 특징으로 하는 당단백질의 제조방법
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제11항에 있어서, 상기 단백질은 병원체 단백질(pathogen protein), 라이소좀 단백질(lysosomal protein), 성장 인자(growth factor), 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine), 항체 또는 이의 항원-결합 단편(antigen-binding fragment), 또는 융합 단백질(fusion protein)인 것을 특징으로 하는 만노스-6-인산이 부가된 당단백질의 제조방법
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제13항에 있어서, 상기 라이소좀 단백질(lysosomal protein)은 라이소좀 저장질환(lysosomal storage disease) 관련된 분해효소인 것을 특징으로 하는 만노스-6-인산이 부가된 당단백질의 제조방법
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제12항에 있어서, 상기 단백질은 병원체 단백질(pathogen protein), 라이소좀 단백질(lysosomal protein), 성장 인자(growth factor), 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine), 항체 또는 이의 항원-결합 단편(antigen-binding fragment), 또는 융합 단백질(fusion protein)인 것을 특징으로 하는 만노스-6-인산이 부가된 당단백질의 제조방법
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제15항에 있어서, 상기 라이소좀 단백질(lysosomal protein)은 라이소좀 저장질환(lysosomal storage disease) 관련된 분해효소인 것을 특징으로 하는 만노스-6-인산이 부가된 당단백질의 제조방법
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