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1) 기판 표면에 인산화 효소에 특이적인 기질 펩타이드가 집적된 인산화 반응 측정용 바이오칩을 제조하는 단계;
2) 피검 시료를 방사성 동위원소로 표지된 ATP와 혼합하는 단계;
3) 단계 2)의 혼합한 피검 시료를 단계 1)의 바이오칩에 처리하여 인산화 반응을 유도하는 단계; 및,
4) 단계 3)의 바이오칩을 세척한 후, 상기 인산화 반응의 세기를 방사선 TLC 이미지 스캐너를 이용하여 검출하는 단계를 포함하는, 인산화 반응 측정방법
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제 1항에 있어서, 상기 바이오칩의 기판은 유리(glass), 플라스틱, 금속 및 실리콘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 측정방법
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제 1항에 있어서, 상기 바이오칩의 기판은 기질 펩타이드의 고정을 위해, 아민기(amine group), 알데하이드기(aldehyde group), 카르복실기(carboxyl group) 및 티올기(thiol group)로 이루어진 군으로부터 선택된 활성기를 이용하여 코팅되는 것을 특징으로 하는 측정방법
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제 1항에 있어서, 상기 인산화 효소에 특이적인 기질 펩타이드는 켐타이드, 말산효소-켐타이드(malic enzyme-kemptide) 융합단백질, 단백질 포스파아제 저해자-2 및 Elk1으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 측정방법
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제 1항에 있어서, 방사성 동위원소로 표지된 ATP는 [γ-33P]ATP 또는 [γ-32P]ATP인 것을 특징으로 하는 측정방법
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제 1항에 있어서, 피검 시료는 세포 및 조직의 추출물, 분획 또는 세포 배양액, 세포 분쇄액, 세포 또는 조직의 조추출물, 소변, 땀, 자액, 눈물 등 각종 분비액, 또는 혈액, 혈장, 림프액 및 혈청으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 측정방법
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제 1항에 있어서, 단계 3)의 반응 시간은 30℃ 또는 37℃에서 30-60분인 것을 특징으로 하는 측정방법
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1) 기판 표면에 피검 시료가 집적된 인산화 반응 측정용 바이오칩을 제조하는 단계;
2) 인산화효소(kinase)와 방사성 동위원소로 표지된 ATP를 단계 1)의 바이오칩에 처리하여 인산화 반응을 유도하는 단계; 및,
3) 단계 2)의 바이오칩을 세척한 후, 상기 인산화 반응의 세기를 방사선 TLC 이미지 스캐너를 이용하여 검출하는 단계를 포함하는, 피검 시료 내에 상기 인산화효소에 특이적인 기질의 검출 방법
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제 8항에 있어서, 상기 바이오칩의 기판은 유리(glass), 플라스틱, 금속 및 실리콘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 상기 바이오칩의 기판은 기질 펩타이드의 고정을 위해, 아민기(amine group), 알데하이드기(aldehyde group), 카르복실기(carboxyl group) 및 티올기(thiol group)로 이루어진 군으로부터 선택된 활성기를 이용하여 코팅되는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 상기 인산화효소에 특이적인, 정해진 농도의 기질이 집적된 바이오칩을 이용하여 시료 내의 상기 기질을 정량하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 피검 시료의 스팟 직경은 40-60 ㎛이며, 간격은 300-500 ㎛인 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 상기 인산화 효소는 암세포 증식(tumor cell proliferation)과 암혈관 신생(tumor angiogenesis)에 관여하는 것으로 알려진 RAF, VEGFR-2, VEGFR-3, PDGFR-β, KIT, FLT-3, RET 등과 많은 종류의 암(고형암)에서 발생하는 단백질인 오로라 카이네이즈(Aurora kinases)로 불리는 BTAK나 STK15, 세포 만성 림프모구 백혈병(B cell chronic lymphocytic leukemia ; B-CLL)을 야기하는 효소인 Lyn이라는 티로신 키나아제(tyrosine kinase), PTK(protein tyrocine kinase), MAPK(MAP kinase), MAPKK (MAP kinase kinase), PKA(protein kinase A), PKC(protein kinase C), ERK(extracellular signal-regulated kinase), CAM KⅡ(calcium/Calnodulin-dependent protein kinase), MEKK(MAP/ERK kinase kinase), JNK(c-Jun N-terminal kinase), SAPK(stress-activated protein kinase), p38K(p38 kinase), phosphatase 2B, cPKC(conventional protein kinase), Serine Kinase IKKβ, Ab1K(Ab1 kinase), BTK(Bruton tyrosine kinase), CDK(cyclin-dependent kinase), VEGF-RTK(Vascular endothelial growth factor-receptor tyrosine kinase), AKT1 kinase, AKT2 kinase, AKT3 kinase, PK(Pyruvate kinase) 및 Tumor M2-pyruvate kinase로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 단계 2)의 반응 시간은 30℃ 또는 37℃에서 30-60분인 것을 특징으로 하는 검출 방법
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제 8항에 있어서, 방사성 동위원소로 표지된 ATP는 [γ-33P]ATP 또는 [γ-32P]ATP인 것을 특징으로 하는 검출 방법
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