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a) 배양대상 조직원(tissue source)으로부터 셀(cell)을 추출하고, 상기 셀을 일정기간 동안 시트(sheet) 위에서 저밀도로 성장시키는 단계;
b) 일정기간 경과 후 셀이 충분히 성장하여 시트 위에 셀시트(cell sheet)가 완성되면, 상기 시트로부터 셀시트를 분리시키는 단계;
c) 비오염 조건을 유지하는 환경에서 상기 시트로부터 획득된 셀시트를 세정하고, 생체접합제를 이용하여 세정이 완료된 셀시트를 원통형 스캐폴드(scaffold) 표면을 감싸도록 스캐폴드 표면에 부착시키는 단계;
d) 셀배양에 적합한 환경조건을 유지하는 2차 배양시스템에 셀시트가 표면에 부착된 원통형 스캐폴드를 장착한 후 배양시켜, 원통형 스캐폴드 표면에 부착된 상기 셀시트의 양 선단이 상호 접촉하여 상기 원통형 스캐폴드 외형상에 대응하는 튜브형태의 생체조직이 완성될때까지 셀을 성장시키는 단계;
e) 대상물(subject)에 이식할 수 있을 정도로 셀이 충분히 성장하면, 상기 스캐폴드와 배양된 셀을 분리시킴으로서 튜브형상을 갖는 생체조직 또는 생체기관을 획득하는 단계;를 포함하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 1 항에 있어서,
상기 a), b) 단계에서 셀 배양을 위한 상기 시트로서,
일정한 온도조건에서 상변화 특성을 갖는 열감응성 고분자 물질을 사용하는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 2 항에 있어서,
열감응성 특징을 갖는 상기 시트는,
25℃ 온도에서 고체에서 액체로 상이 변화하는 특성을 갖는 나이팜(N-isopropylacrylamide, PIPAAm)인 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 1 항에 있어서,
상기 c)단계에서 원통형 스캐폴드에 셀시트를 부착시키기 위한 생체접합제로서,
혈전을 일으키는 응고인자인 피브린 글루(fibrin glue)를 사용하는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 1 항에 있어서,
상기 d)단계에서의 2차 배양시스템을 이용한 셀시트의 배양은,
배양액을 수용한 배양조 안에서 중력방향과 직각을 이루는 선회축을 기준으로 회전하는 시편 고정대에 상기 원통형 스캐폴드를 장착하고, 상기 배양조에 배양액을 지속적으로 제공해 가면서 상기 원통형 스캐폴드를 일정한 속도로 회전시킴으로써, 스캐폴드 회전에 따라 셀시트에 제공되는 중력에 의한 물리적 자극으로 균일한 조직두께와 분화방향을 가지면서 세포의 성장이 이루어질 수 있도록 하는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 1 항에 있어서,
상기 e)단계에서의 스캐폴드와 배양조직의 분리는,
스캐폴드와 배양조직 분리를 위한 박리제를 이용하여 분리시키는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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제 6 항에 있어서,
상기 박리제로는,
혈전 용해능을 갖는 혈전 용해제(fibrinolytic agent)를 사용하는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양방법
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배양액이 수용된 용기형태의 배양조 및 이 배양조에 수평으로 장착되는 스캐폴드를 포함하는 배양부;
상기 배양부의 배양조 안에서 상기 스캐폴드를 수평으로 고정시켜주는 좌, 우 한 쌍의 시편 고정대;
상기 배양조 측벽을 관통하여 상기 시편 고정대로부터 배양조 좌, 우측 바깥으로 연장되는 좌, 우 한 쌍의 가동축;
배양조 바깥으로 연장된 상기 좌, 우 한 쌍의 가동축 중 어느 한 가동축과 연결되며, 상기 가동축을 매개로 상기 시편 고정대에 스캐폴드를 회전시키기 위한 구동력을 전달하는 구동부; 및
상기 배양조 바깥으로 연장된 상기 좌, 우 한 쌍의 가동축 중 다른 한 가동축과 연결되어 스캐폴드 회전에 의한 상기 다른 한 가동축의 자유회전을 지지하는 지지부;를 포함하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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제 8 항에 있어서,
상기 배양부는,
상부가 개방된 용기형태의 배양조와;
상기 배양조의 개방된 입구를 닫는 밀폐뚜껑과;
상기 배양조를 둘러싸며, 상기 배양조와의 사이 이격공간으로 배양대상 셀의 배양온도를 유지하는 물이 지속적으로 순환하여 상기 배양조의 내부온도를 일정하기 유지시키는 단열용기;로 구성되는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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제 9 항에 있어서,
상기 밀페뚜껑에는 다수의 구멍이 존재하고,
상기 구멍에는 세포배양실험에서 요구되는 환경조건인 온도, 이산화탄소 함유량, 용존산소 함유량, 질소 함유량 및 ph 측정을 위한 다양한 센서가 관입되는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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제 9 항에 있어서,
상기 배양부의 배양조에 제공될 배양액을 수용하고 있는 배양액 병을 포함하며, 상기 배양액 병을 상기 단열용기에 제공될 물과 함께 밀폐된 공간안에 수용하는 배양액 챔버; 및
산소(O2), 질소(N2), 이산화탄소(CO2) 중 어느 하나의 기체 또는 둘 이상의 기체가 혼합된 혼합기체를 상기 배양액 챔버의 배양액 병에 제공하는 가스믹서;를 더 포함하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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제 11 항에 있어서,
상기 배양액 챔버에는,
상기 배양부로 제공될 배양액 및 배양액이 수용된 배양조의 온도유지를 위한 물이 세포배양에 적합한 온도조건을 유지한 채 상기 배양부로 제공될 수 있도록, 상기 배양액 챔버의 배양액 병에 수용된 배양액 및 배양액 챔버에 수용된 물을 적정온도로 가열 및 유지시키는 가열장치가 더 설치되는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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제 8 항에 있어서,
상기 스캐폴드는,
원형 또는 타원형의 단면을 갖는 통형상으로 구성되는 것을 특징으로 하는 튜브형 생체조직 또는 생체기관 재생을 위한 세포배양장치
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