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락토바실러스 균종을 위한 형질전환 방법 및 외래 단백질 발현 백터

  • 기술번호 : KST2015130996
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 유산균 세포내 외래 단백질 발현 벡터 및 이를 이용한 락토바실러스 균종의 형질전환방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 락토바실러스 애시도필러스의 높은 형질전환 효율을 위한 전기천공법 (electroporation)의 조건을 설정하고 형질전환체를 빠르게 선별할수 있는 PCR 프라이머를 제조하였으며 GFP 단백질을 세포내에서 발현할 수 있는 유산균용 벡터 pKU::slpA-GFP를 제조하고, 이를 락토바실러스 애시도필러스 ATCC 43121 (Lactobacillus acidophilus ATCC 43121)에 형질전환시켜 보고유전자로써 GFP의 가능성을 제시하는 것이다. 본 발명의 형질전환 방법과 발현 백터를 이용하여 유산균을 형질전환하면 원래의 특성을 변화시키지 않으며 재조합 단백질을 세포내에서 안정하게 발현시킬 수 있다.
Int. CL C12N 15/74 (2006.01)
CPC C12N 15/746(2013.01) C12N 15/746(2013.01)
출원번호/일자 1020050002471 (2005.01.11)
출원인 고려대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-0635450-0000 (2006.10.11)
공개번호/일자 10-2006-0082206 (2006.07.18) 문서열기
공고번호/일자 (20061017) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2005.01.11)
심사청구항수 6

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김세헌 대한민국 서울 강남구
2 유승권 대한민국 경기 용인시
3 오세종 대한민국 광주 서구
4 한경식 대한민국 서울 중랑구
5 김영훈 대한민국 경기 남양주시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 윤여강 대한민국 경기도 수원시 영통구 광교산로 ***-** (이의동) 경기대학교 창업보육센터 ***호(여강특허기술사업화전문회사)
2 이문섭 대한민국 서울특별시 관악구 남부순환로 ****, ***호 제니스국제특허법률사무소 (봉천동, 청동빌딩)
3 양부현 대한민국 서울특별시 송파구 오금로 **, 태원빌딩 **층, 특허팀(주식회사씨젠)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application		 2005.01.11 수리 (Accepted) 1-1-2005-0014493-22
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2006.01.26 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2006.02.17 수리 (Accepted) 9-1-2006-0010536-03
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2006.05.29 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0310581-99
5 의견서
Written Opinion		 2006.07.31 수리 (Accepted) 1-1-2006-0551171-77
6 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.		 2006.07.31 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2006-0551167-94
7 등록결정서
Decision to grant		 2006.08.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0482408-42
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2007.03.22 수리 (Accepted) 4-1-2007-5043540-16
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2008.03.05 수리 (Accepted) 4-1-2008-5034712-96
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2009.06.09 수리 (Accepted) 4-1-2009-5111177-32
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2010.08.12 수리 (Accepted) 4-1-2010-5149278-93
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.11 수리 (Accepted) 4-1-2014-5018243-16
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.04.22 수리 (Accepted) 4-1-2014-5049934-62
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.10.10 수리 (Accepted) 4-1-2019-5210941-09
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번호 청구항
1 1
그람 양성균의 복제원점 (ori), 복제유도단백질 유전자 (repA), 선별유전자인 클로람페니콜 (choloramphenicol) 저항성 유전자(cmr), 서열번호 1의 염기서열을 갖는 slpA (S-layer protein A) 프로모터, 삽입 외래 유전자 서열, 및 서열번호 2의 염기서열을 갖는 종결 시퀀스를 포함하는 외래 단백질을 발현할 수 있는 도 5의 개열지도를 갖는 유산균용 발현 벡터(pKU::slpA-GFP)
2 2
제 1항에 있어서, 상기 외래 유전자는 GFP(green fluorescent protein) 또는 GFP 융합 유전자인 것을 특징으로 하는 유산균용 발현 벡터
3 3
서열번호 1의 염기서열을 갖는 slpA (S-layer protein A) 프로모터 (제한효소 EcoRⅠ과 XbaⅠ)와 서열번호 2의 염기서열을 갖는 종결시퀀스 (제한효소 PstⅠ과 HindⅢ)를 락토바실러스의 염색체 (chromosome) DNA를 주형으로 하여 PCR 증폭하는 단계, 외래 유전자 (제한효소 XbaⅠ과 PstⅠ)를 준비하는 단계, 각각의 유전자 단편들을 연속적으로 대장균 형질전환 백터인 pUC18의 제한효소자리(EcoRⅠ, XbaⅠ, PstⅠ과 HindⅢ)에 삽입하여 재조합벡터 pUC18::slpA-GFP-T
4 4
락토바실러스 균종의 형질전환에 있어서, 컴피턴트 락토바실러스를 전기충격 전압 12-13 kV/cm, 전기충격 횟수 8-12회, 전기충격의 시간간격 400-600 ms, 플라스미드의 농도 20-30 ng/ul의 조건으로 전기천공하는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 균종의 전기천공법
5 5
제 1항의 유산균용 발현 벡터로 형질전환된 락토바실러스 균종
6 6
서열번호 4 또는 5의 염기서열을 갖는 pNZ123 유래의 재조합 벡터로 형질전환된 헝질전환체에서 클로람페니콜 저항 유전자가 들어있는 pNZ123 유래의 재조합벡터의 빠른 선별을 위한 PCR 프라이머
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서열번호 4 또는 5의 염기서열을 갖는 pNZ123 유래의 재조합 벡터로 형질전환된 헝질전환체에서 클로람페니콜 저항 유전자가 들어있는 pNZ123 유래의 재조합벡터의 빠른 선별을 위한 PCR 프라이머
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.