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건조 들깻잎에 대하여 증류수를 이용한 환류 냉각추출을 수행하는 단계;
상기 환류 냉각추출 단계로부터 얻어진 추출물에 대하여 원심분리를 수행하여 상등액을 얻는 단계;
상기 상등액을 여과한 여과액을 감압농축 및 동결건조시킴으로써 들깻잎 추출 분말을 얻는 단계;
상기 들깻잎 추출 분말을 복수 개의 추출용매를 사용하여 순차적으로 추출함으로써 분획물들을 제조하는 단계; 및
상기 분획물들 중 가장 높은 γ-GCS 활성을 나타내는 분획물을 분리 및 정제하는 단계
를 포함하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 환류 냉각추출 단계는 건조 들깻잎 100g에 대해서 0
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제1항에 있어서, 상기 원심분리 단계는 4℃의 온도에서, 7,500rpm의 속도로 25분 내지 30분 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 분획물 제조 단계는 제1 추출용매, 제2 추출용매, 제3 추출용매 및 제4 추출용매로 이루어진 4가지 추출용매를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제4항에 있어서, 상기 분획물 제조 단계는,
상기 들깻잎 추출 분말을 상기 제1 추출용매 중에 용해시킨 후 교반하여 제1 유기용매층 및 제1 증류수층으로 층분리시킴으로써 상기 제1 유기용매층으로부터 제1 분획물을 수득하는 단계;
상기 제1 증류수층을 상기 제2 추출용매와 혼합한 후 교반하여 제2 유기용매층 및 제2 증류수층으로 층분리시킴으로써 상기 제2 유기용매층으로부터 제2 분획물을 수득하는 단계;
상기 제2 증류수층을 상기 제3 추출용매와 혼합한 후 교반하여 제3 유기용매층 및 제3 증류수층으로 층분리시킴으로써 상기 제3 유기용매층으로부터 제3 분획물을 수득하는 단계; 및
상기 제3 증류수층을 상기 제4 추출용매와 혼합한 후 교반하여 제4 유기용매층 및 제4 증류수층으로 층분리시킴으로써 상기 제4 유기용매층으로부터 제4 분획물을 수득하고 상기 제4 증류수층으로부터 제5 분획물을 수득하는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 카페인산을 제조하는 방법
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제5항에 있어서, 상기 제1 , 제2, 제3 및 제4 추출용매는 각각 증류수와 헥산의 혼합 용액, 클로로포름, 아세트산에틸 및 부탄올인 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 카페인산을 제조하는 방법
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제6항에 있어서, 상기 제1 추출용매는 증류수 100 중량부에 대해서 헥산 100 내지 120 중량부를 혼합한 혼합 용액인 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 카페인산을 제조하는 방법
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제6항에 있어서, 상기 제1 증류수층과 제2 추출용매, 상기 제2 증류수층과 제3 추출용매 및 상기 제3 증류수층과 제4 추출용매의 혼합비는 각각, 상기 제1 증류수층, 제2 증류수층 및 제3 증류수층 100 중량부에 대해서, 상기 제2 추출용매, 제3 추출용매 및 제4 추출용매 100 내지 120 중량부인 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제1항에 있어서, 상기 분리 및 정제 단계는 컬럼 크로마토그래피 장치를 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제9항에 있어서, 상기 분리 및 정제 단계는,
상기 분획물들에 대하여 정지상으로서 폴리스티렌-디비닐벤젠계 공중합체 수지를 사용하고 이동상으로서 메탄올 수용액을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하는 1차 분리 단계;
상기 1차 분리 단계의 결과물들에 대하여 정지상으로서 히드록시프로필화 덱스트란 수지를 사용하고 이동상으로서 메탄올 수용액을 사용하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하는 2차 분리 단계; 및
상기 2차 분리 단계의 결과물들 중 가장 높은 γ-GCS 활성을 나타내는 결과물을 선별하여 정제하는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제10항에 있어서, 상기 1차 분리 단계는 각각 증류수:메탄올의 중량비가 100:0, 75:25, 50:50, 25:75 및 0:100인 5 종류 이동상들을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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제10항에 있어서, 상기 2차 분리 단계는 증류수:메탄올의 중량비가 30:70인 이동상을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 들깻잎으로부터 γ-GCS의 활성을 증가시키는 카페인산을 제조하는 방법
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