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1) 0 내지 1 g/ℓ의 복수의 농도의 부탄올 표준 용액, 효모 유래 알콜 디하이드로게나제(alcohol dehydrogenase), 반응완충용액 및 조효소 NAD+를 혼합한 반응액을 반응시키는 단계;
2) 단계 1)의 반응액의 흡광도를 340 ㎚에서 측정하여 표준 곡선을 그리는 단계;
3) 부탄올을 포함할 것으로 예상되는 시료를 이용하여 단계 1)의 반응을 수행하는 단계;
4) 단계 3)의 반응액의 흡광도를 340 ㎚에서 측정하는 단계; 및
5) 단계 4)의 측정값을 단계 2)의 표준 곡선과 비교하여, 부탄올 함량을 계산하는 단계를 포함하는 시료내 부탄올 함량 측정 방법
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제 1항에 있어서, 단계 1)의 반응완충용액은 50 mM Tris-HCL(pH 8
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제 1항에 있어서, 단계 4)의 흡광도 측정값이 0
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1) 클로스트리디움 베이저링키(Clostridium beijerinckii) NCIMB 8052 야생형 균주를 돌연변이 시키는 단계;
2) 단계 1)에서 생존한 변이 균주들을 세포막 합성저해 화학물질인 페니실린 또는 하이드록실아민이 포함된 고체배지에서 배양하는 단계;
3) 단계 2)에서 생존한 상기 화학물질에 내성을 갖는 변이 균주들을 액체 배지로 옮겨 혐기성 조건에서 배양하여 부탄올을 생산하는 단계; 및,
4) 단계 3)의 배양 상등액을 수득하여 생성된 부탄올 생산량을 상기 제 1항의 부탄올 함량 측정방법으로 측정하고, 부탄올 생산량이 높은 변이 균주를 선별하는 단계를 포함하는 부탄올 내성 및 부탄올 고생산 균주의 제조방법
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제 4항에 있어서, 단계 1)의 돌연변이는 돌연변이 유발물질 처리에 따른 화학적 돌연변이법에 의한 돌연변이, UV 처리에 따른 물리적 변이법에 의한 돌연변이 및 유전공학 조작에 의한 돌연변이인 것을 특징으로 하는 제조방법
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제 5항에 있어서, 돌연변이 유발물질은 NTG(N-Methyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguanidine), EMS(ethyl methane sulfonate) 및 트리에틸렌 멜라민(triethylene melamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법
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삭제
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8
삭제
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제 4항의 방법으로 제조하여 기탁번호 KCTC 11731 BP로 기탁 된 부탄올 내성 및 부탄올 고생산 균주
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1) 제 4항의 방법으로 제조된 부탄올 내성 및 부탄올 고생산 균주를 종배양하는 단계;
2) 단계 1)의 종배양액의 600 ㎚에서의 흡광도가 1
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11
제 10항에 있어서, 단계 1)의 부탄올 내성 및 부탄올 고생산 균주는 기탁번호 KCTC 11731 BP로 기탁 된 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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제 10항에 있어서, 단계 2)의 흡광도가 2인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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13
제 10항에 있어서, 단계 2)의 본배양 배지에 추가로 삼투압 보호제를 포함하는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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14
제 13항에 있어서, 삼투압 보호제는 프롤린, 콜린 및 베테인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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제 14항에 있어서, 프롤린은 0
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제 15항에 있어서, 프롤린은 1
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제 14항에 있어서, 콜린은 0
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제 17항에 있어서, 콜린은 1
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제 14항에 있어서, 베테인은 0
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제 19항에 있어서, 베테인은 1
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제 10항에 있어서, 단계 2)의 부피비가 15%(v/v)인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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제 10항에 있어서, 단계 3)의 배양시간은 17시간인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
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제 10항에 있어서, 단계 4)의 본배양액의 pH를 5
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