1 |
1
삭제
|
2 |
2
ⅰ) 알칼리게네스 유트로퍼스 유래의 phbCAB 유전자를 갖는 형질전환된 재조합 대장균을 제조하는 단계;ⅱ)상기 재조합 대장균을 배지 1㎖당 105개 이하의 저농도의 세포 수로 접종하여, 세포 배양하는 단계(세포 생장기);ⅲ) 상기 재조합 대장균으로부터 폴리하이드록시알카노에이트(polyhydroxyalkanoate, PHA) 생성을 유도하는 단계(세포 정지기 및 산물 생성기); 및ⅳ) 상기 재조합 대장균으로부터 PHA의 세포외 분비를 유도하는 단계(산물 분비 및 정제기)를 포함하는 PHA의 대량 생산방법
|
3 |
3
제 2항에 있어서, 상기 phbCAB 유전자 중 phbC 유전자는 서열번호 1로 기재되는 염기서열인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
4 |
4
제 2항에 있어서, 상기 phbCAB 유전자 중 phbA 유전자는 서열번호 2로 기재되는 염기서열인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
5 |
5
제 2항에 있어서, 상기 phbCAB 유전자 중 phbB 유전자는 서열번호 3으로 기재되는 염기서열인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
6 |
6
제 3항 내지 제 5항중 어느 한항에 있어서, 상기 phbCAB 유전자는 서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 3의 순서로 기재되는 염기서열인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
7 |
7
제 2항에 있어서, 단계 i)의 재조합 대장균은 상기 phbCAB 유전자를 포함하는 pTZ18U-PHB 플라스미드로 형질전환되어 제조되는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
8 |
8
제 2항에 있어서, 상기 재조합 대장균은 MG1655/pTZ18U-PHB인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
9 |
9
제 2항에 있어서, 상기 재조합 대장균은 ldh 유전자가 돌연변이된 균주인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
10 |
10
삭제
|
11 |
11
제 2항에 있어서, 상기 세포 생장기에 접종하는 세포수는 배지 1 ㎖당 2× 104개 이하인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
12 |
12
제 2항에 있어서, 단계 ii)의 배지는 박토-트립톤, 박토-효모 추출물 및 NaCl을 포함하는 LB 배지인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
13 |
13
제 12항에 있어서, 상기 LB 배지는 1 ℓ당, 10 내지 30 g의 박토-트립톤, 5 내지 15 g의 박토-효모 추출물, 10 내지 30 g의 NaCl을 포함하는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
14 |
14
제 13항에 있어서, 상기 LB 배지는 1 ℓ당 10 내지 20 g의 박토-트립톤, 5 내지 10 g의 박토-효모 추출물, 10 내지 20 g의 NaCl을 포함하는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
15 |
15
제 2항 또는 13항에 있어서, 단계 ii) LB 배지에 포도당이 10% 이하의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
16 |
16
제 15항에 있어서, 포도당이 7% 이하의 농도로 첨가되는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
17 |
17
제 12항에 있어서, 단계 iii)의 세포 정지기 및 산물 생성기에 포도당을 추가로 첨가하는 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
18 |
18
제 2항에 있어서, 상기 PHA는 폴리하이드록시부티레이트(polyhydroxybutyrate, PHB)인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|
19 |
18
제 2항에 있어서, 상기 PHA는 폴리하이드록시부티레이트(polyhydroxybutyrate, PHB)인 것을 특징으로 하는 대량 생산방법
|