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소에서 유래한 외래(exogenous) 유전자가 도입 및 적중된 체세포의 핵과 소에서 유래한 탈핵된 난모 세포가 융합된 핵 이식란
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제1항에 있어서, 상기 외래 유전자가 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자임을 특징으로 하는 핵 이식란
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제1항에 있어서, 상기 소는 세포가 성숙한(adult) 개체임을 특징으로 하는 핵 이식란
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제3항에 있어서, 상기 소가 홀스타인종임을 특징으로 하는 핵 이식란
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제1항에 있어서, 상기 소의 핵 이식란이 SNU-B4(KCTC 10450BP)인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란
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소의 유선에서 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소
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제6항에 있어서, 상기 복제소의 형질이 제 1항의 핵 이식란의 형질과 동일한 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소
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제7항에 있어서, 상기 핵 이식란이 SNU-B4(KCTC 10450BP)인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소
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(a) 소에서 유래한 체세포주에 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자를 도입 및 적중시키는 단계를 포함하는 공여핵 세포를 준비하는 단계; (b) 수핵 난자의 난구 세포를 제거하고, 수핵 난자의 제1 극체를 포함한 세포질을 제거하여 난자를 탈핵하는 과정을 포함하는 소 유래의 성숙한 수핵 난자를 준비하는 단계; 및 (c) 상기 단계에서 준비된 공여핵 세포를 탈핵된 난자에 이식하고 융합시키는 단계를 포함하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제9항에 있어서, 상기 체세포가 성숙한 소에서 유래된 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제10항에 있어서, 상기 소가 홀스타인종임을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제9항에 있어서, 상기 세포주에 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자를 도입 및 적중시키는 단계가 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자, 발현 프로모터, 마커 유전자를 포함하는 벡터를 작제하여 수행되는 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제12항에 있어서, 상기 발현 프로모터가 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자가 소의 유선에서 발현하도록 하는 β-카세인 프로모터인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제12항에 있어서, 상기 마커 유전자가 GFP 발현 유전자 및/또는 암피실린 저항성 유전자인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제12항에 있어서, 상기 벡터는 생화학적 방법을 사용하여 도입되는 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제15항에 있어서, 상기 생화학적 방법이 FuGene6을 사용하는 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제9항에 있어서, 상기 체세포가 소의 자궁관류액, 자궁내막, 난관, 귀 또는 근육으로부터 분리된 세포 또는 난구 세포로부터 유래된 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제 방법
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제9항에 있어서, 상기 핵 이식란이 SNU-B4(KCTC 10450BP)인 것을 특징으로 하는 핵 이식란 작제 방법
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(a) 소에서 유래한 체세포주에 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자를 도입 및 적중시키는 단계를 포함하는 공여핵 세포를 준비하는 단계; (b) 수핵 난자의 난구 세포를 제거하고, 수핵 난자의 제1 극체를 포함한 세포질을 제거하여 난자를 탈핵하는 과정을 포함하는 소 유래의 성숙한 수핵 난자를 준비하는 단계; (c) 상기 단계에서 준비된 공여핵 세포를 탈핵된 난자에 이식하고 융합시켜 핵 이식란을 작제하는 단계; 및 상기 핵 이식란을 대리모에 이식하여 산자를 출산하는 단계를 포함하는 소의 유선에서 사람 에리트로포이에틴을 생산하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 체세포가 성숙된 소에서부터 유래된 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제20항에 있어서, 상기 소가 홀스타인종인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 핵 이식란이 SNU-B4(KCTC 10450BP)인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 세포주에 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자를 도입 및 적중시키는 단계가, 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자, 발현 프로모터, 마커 유전자를 포함하는 벡터를 작제하여 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제23항에 있어서, 상기 발현 프로모터가 상기 에리트로포이에틴을 발현하는 유전자가 소의 유선에서 발현하도록 하는 β-카세인 프로모터인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제23항에 있어서, 상기 마커 유전자가 GFP 발현 유전자 및/또는 암피실린 저항성 유전자인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제23항에 있어서, 상기 벡터가 생화학적 방법을 사용하여 도입되는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제26항에 있어서, 상기 생화학적 방법이 FuGene6를 사용하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 체세포가 소의 자궁관류액, 자궁내막, 난관, 귀 또는 근육으로부터 분리된 세포 또는 난구 세포로부터 유래된 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 (a) 단계가 세포주를 계대배양, 혈청기아배양 또는 동결에 의해 보존하는 과정을 더 포함하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 (c) 단계의 수핵 난자의 난구 세포를 제거하는 과정이 수핵 난자를 하이알루로니다제로 처리한 다음, 물리적으로 제거하는 과정을 포함하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 (c) 단계의 난자를 탈핵하는 과정이 미세작업장치를 이용하여 전처리된 난자의 투명대를 절개하여 절개창을 형성시킨 후, 절개창을 통하여 난자의 제1 극체를 포함한 세포질을 10 내지 15% 제거하는 것을 포함하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 (c) 단계의 공여핵 세포를 탈핵 난자에 이식하는 과정이 공여세포를 난자의 투명대에 형성된 절개창으로 주입하는 것을 포함으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제19항에 있어서, 상기 (c) 단계가 작제된 핵 이식란을 대리모에 이식하기 전에 활성화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제33항에 있어서, 상기 핵 이식란의 활성화가 전기 융합을 통해 이루어지는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제34항에 있어서, 상기 전기융합이 직류전압을 0
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제34항에 있어서, 상기 핵 이식란의 활성화가 Ca2+가 첨가된 배지에서 전기융합을 실시하여, 융합과 동시에 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제34항에 있어서, 상기 핵 이식란의 활성화가 Ca2+가 없는 배지에서 전기융합을 실시하고, 암 조건하에 이오노마이신(ionomycin) 용액에서 정치하여 수행하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제33항에 있어서, 상기 단계가 사이클로헥시미드 용액 또는 디엠에이피(DMAP) 용액에 핵 이식란을 침지하고 배양하는 후 활성화 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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제38항에 있어서, 상기 핵 이식란의 후 활성화 단계가 후 활성화된 핵 이식란을 mSOF 배지에 배양하는 체외배양 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제소의 생산방법
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소의 유선에서 사람 에리트로포이에틴을 발현하는 형질전환 복제소의 우유로부터 사람 에리트로포이에틴을 수득하는 것을 특징으로 하는 사람 에리트로포이에틴을 생산하는 방법
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제40항에 있어서, 상기 형질전환 복제소가 소의 핵 이식란 SNU-B4(KCTC 10450BP)으로부터 생산된 것임을 특징으로 하는 사람 에리트로포이에틴을 생산하는 방법
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제40항에 있어서, 상기 형질전환 복제소가 상기 제 17항 내지 제 37항 중 어느 한 항의 방법으로 생산된 것을 특징으로 하는 사람 에리트로포이에틴을 생산하는 방법
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