1 |
1
소의 PrP 아미노산 서열 중 179번째 글루타민이 아르기닌으로 및/또는 230번째 글루타민이 리신으로 치환된 PrP 변이체를 코딩하는 DNA가 도입된 소 유래 체세포 핵을 탈핵된 난자에 이식하여 형성된 소의 핵 이식란
|
2 |
2
제 1항에 있어서, 상기 세포주가 소의 자궁관류액, 자궁내막, 난관, 귀 또는 근육으로부터 분리된 세포, 난구세포 및 태아 섬유아셈포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 세포주
|
3 |
3
제 1항에 있어서, 상기 핵 이식란이 KCTC 10556BP인 것을 특징으로 하는 핵 이식란
|
4 |
4
소의 PrP 아미노산 서열 중 179번째 글루타민이 아르기닌으로 및/또는 230번째 글루타민이 리신으로 치환된 PrP 변이체를 발현하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소
|
5 |
5
제 4항에 있어서, 상기 복제 소의 형질이 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 핵 이식란의 형질과 동일한 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소
|
6 |
6
(1) 소의 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 작제하는 단계; (2) 소에서 유래한 체세포주에 상기 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 도입시키는 단계를 포함하는 공여핵 세포를 준비하는 단계; (3) 수핵 난자의 난구 세포를 제거하고, 수핵 난자의 제 1극체를 포함한 세포질을 제거하여 난자를 탈핵하는 과정을 포함하는 소 유래의 수핵 난자를 준비하는 단계; (4) 상기 단계에서 준비된 공여핵 세포를 탈핵된 수핵 난자에 이식하고 융합시켜 핵 이식란을 작제하는 단계를 포함하는 PrP 변이체를 발현하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
7 |
7
제 6항에 있어서, 상기 단계 (1)의 체세포주가 성숙한 소에서 유래된 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
8 |
8
제 6항에 있어서, 상기 단계 (2)의 소에서 유래한 체세포주에 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 도입시키는 단계를 포함하는 공여핵 세포를 준비하는 단계가 소의 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 포함하는 벡터를 작제하여 수행되는 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
9 |
9
제 8항에 있어서, 상기 벡터가 PrPmut-pCMS/GFP인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
10 |
10
제 8항에 있어서, 상기 벡터가 PrPmut-pIRESpuro2인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
11 |
11
제 8항에 있어서, 상기 벡터는 생화학적 방법을 사용하여 도입되는 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
12 |
12
제 11항에 있어서, 상기 생화학적 방법이 FuGene를 사용하는 것임을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
13 |
13
제 6항에 있어서, 상기 체세포주가 소의 자궁관류액, 자궁내막, 난관, 귀 또는 근육으로부터 분리된 세포 또는 난구 세포로부터 유래된 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
14 |
14
제 10항에 있어서, 상기 핵 이식란이 KCTC 10556BP인 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
15 |
15
제 6항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 소의 PrP 변이체가 소의 PrP 아미노산 서열 중 179번째 글루타민이 아르기닌으로 및/또는 230번째 글루타민이 리신으로 치환된 것을 특징으로 하는 소의 핵 이식란 작제방법
|
16 |
16
(1) 소의 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 작제하는 단계; (2) 소에서 유래한 체세포주에 PrP 변이체를 코딩하는 DNA를 도입시키는 단계를 포함하는 공여핵 세포를 준비하는 단계; (3) 수핵 난자의 난구 세포를 제거하고, 수핵 난자의 제 1극체를 포함한 세포질을 제거하여 난자를 탈핵하는 과정을 포함하는 소 유래의 수핵 난자를 준비하는 단계; (4) 상기 단계에서 준비된 공여핵 세포를 탈핵된 난자에 이식하고 융합시켜 핵 이식란을 작제하는 단계 및 (5) 상기 핵 이식란을 대리모에 이식하여 산자를 출산하는 단계를 포함하는 소의 PrP 변이체를 발현하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
17 |
17
제 16항에 있어서, 상기 (1) 내지 (4) 단계가 제 7항 내지 제 14항 중 어느 한 항의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
18 |
18
제 16항에 있어서, 상기 핵 이식란이 KCTC 10556BP인 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
19 |
19
제 16항에 있어서, 상기 (1) 단계가 세포주를 계대 배양, 혈청기아 배양 또는 동결에 의해 보존하는 과정을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
20 |
20
제 16항에 있어서, 상기 (2) 단계의 난자를 탈핵하는 과정은 미세작업장치를 이용하여 전처리된 난자의 투명대를 절개하여 절개창을 형성시킨 후, 절개창을 통하여 난자의 제 1 극체를 포함한 세포질을 10 내지 15% 제거하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
21 |
21
제 16항에 있어서, 상기 (3) 단계의 수핵 난자의 난구 세포는 수핵 난자를 하이알루로니다제로 처리한 다음, 물리적으로 제거되는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
22 |
22
제 16항에 있어서, 상기 (3) 단계의 공여핵 세포를 탈핵 난자에 이식하는 과정이 공여세포를 난자의 투명대에 형성된 절개창으로 주입하는 것임을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
23 |
23
제 16항에 있어서, 상기 (3) 단계가 작제된 핵 이식란을 대리모에 이식하기 전에 활성화시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
24 |
24
제 23항에 있어서, 상기 핵 이식란의 활성화가 전기 융합을 통해 이루어지는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
25 |
25
제 24항에 있어서, 상기 전기 융합이 직류전압을 0
|
26 |
26
제 23항에 있어서, 상기 단계가 사이클로헥시미드 용액 또는 DMAP 용액에 핵 이식란을 침지하고 배양하는 후활성화 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
27 |
27
제 26항에 있어서, 상기 핵 이식란의 후 활성화 단계가 활성화된 핵 이식란은 mSOF 배지에서 배양하는 체외배양 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
28 |
28
제 16항 내지 제 27항 중 어느 한 항에 있어서, 소의 PrP 변이체가 소의 PrP 아미노산 서열 중 179번째 글루타민이 아르기닌을 및/또는 230번째 글루타민이 리신으로 치환된 것을 특징으로 하는 형질전환 복제 소의 생산방법
|
29 |
29
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 형질전환 복제 소로부터 유래된 정육(meat) 및 가공식품
|
30 |
29
제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 따른 형질전환 복제 소로부터 유래된 정육(meat) 및 가공식품
|