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시차 주사 형광측정법(differential scanning fluorimetry; DSF)을 이용한 단백질 정량방법으로서,(a) 목적 단백질, 및 소수성 부분을 포함함으로써 단백질의 소수성 부분에 대해 결합력을 갖고 자외선 내지 가시광선 범위에서 고유의 흡수 스펙트럼을 가지며, 가시광선 영역에서 고유의 형광 스펙트럼을 갖는 염료를 포함하는 시료용액을 준비하는 단계;(b) 20 내지 100℃의 범위에서 온도를 변화시키면서 상기 염료의 형광파장에서 상기 시료용액으로부터의 형광세기를 측정하는 단계;(c) 상기 측정된 형광세기의 최대값과 최소값의 차이를 도출하는 단계; 및(d) 상기 (c) 단계로부터 도출된 값을 목적 단백질을 2개 이상의 상이한 기지농도로 포함하는 시료에 대한 측정값으로부터 작성한 표준곡선과 비교하는 단계를 포함하는 단백질 정량방법
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제1항에 있어서,상기 단백질은 정제된 단백질 또는 세포 용해물에 포함된 단백질인 것인 단백질 정량방법
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제3항에 있어서,상기 세포는 특정 단백질을 과발현하는 것인 단백질 정량방법
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제4항에 있어서,상기 특정 단백질은 외래 도입된 단백질인 것인 단백질 정량방법
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제1항에 있어서,상기 정량은 효소활성에 의해 측정된 농도와 비교하여 10% 이내의 오차범위로 측정되는 것이 특징인 단백질 정량방법
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제1항에 있어서,상기 정량은 분석하고자 하는 단백질의 정제과정 없이 세포 용해물로부터 직접 측정되는 것이 특징인 단백질 정량방법
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(a) 세포를 배양하여 재조합 단백질을 발현시키는 단계;(b) 상기 (a) 단계의 세포 배양으로부터 세포를 포함하여 시료를 채취하는 단계;(c) 상기 채취한 시료를 용해시킨 세포 용해물에, 소수성 부분을 포함함으로써 단백질의 소수성 부분에 대해 결합력을 갖고 자외선 내지 가시광선 범위에서 고유의 흡수 스펙트럼을 가지며, 가시광선 영역에서 고유의 형광 스펙트럼을 갖는 염료를 첨가하고 이의 시차 주사 형광(DSF)을 측정하는 단계;(d) 상기 측정한 DSF로부터 형광세기의 최대값과 최소값의 차이를 도출하는 단계;(e) 상기 (d) 단계로부터 도출된 값을 재조합 단백질을 2개 이상의 상이한 기지농도로 포함하는 시료에 대한 측정값으로부터 작성한 표준곡선과 비교하여 세포 용해물 내의 재조합 단백질을 정량하는 단계; 및(f) 상기 정량된 수치를 정상 수치와 비교하여 비정상적으로 낮거나 높은 경우 배양조건이나 첨가물의 양의 조절 여부 또는 배양 지속 여부를 판단하는 단계를 포함하는, 재조합 단백질 생산 공정의 품질관리(quality control; QC) 방법
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제8항에 있어서,상기 세포는 특정 단백질을 과발현하도록 조작된 것이 특징인 품질관리 방법
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제8항에 있어서,상기 (b) 단계 내지 (d) 단계는 전체 세포 배양기간 동안 1회 내지 10회 반복하여 수행되는 것이 특징인 품질관리 방법
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제8항에 있어서,상기 품질관리는 측정시점까지 배양기간을 고려하여 (d) 단계에서 재조합 단백질 정량값이 일정 기준 미만인 경우, 세포의 재조합 단백질 생산능이 불량한 것으로 판단하는 것이 특징인 품질관리 방법
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(a) 분석하고자 하는 세포를 배양하는 단계;(b) 상기 세포 배양으로부터 세포를 포함하여 시료를 채취하는 단계;(c) 상기 채취한 시료를 용해시킨 세포 용해물에, 소수성 부분을 포함함으로써 단백질의 소수성 부분에 대해 결합력을 갖고 자외선 내지 가시광선 범위에서 고유의 흡수 스펙트럼을 가지며, 가시광선 영역에서 고유의 형광 스펙트럼을 갖는 염료를 첨가하고 이의 시차 주사 형광(DSF)을 측정하는 단계;(d) 상기 DSF 곡선으로부터 Tm값(녹는점; melting temperature)의 존재 여부를 판단하는 단계; 및(e) Tm값이 존재하는 경우 다른 세포 함유물에 비해 상대적으로 높은 수준으로 발현되는 특정한 단백질이 존재하는 것으로 판단하는 단계를 포함하는 DSF를 이용하여 특정 단백질을 과발현하는 세포의 스크리닝 방법
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제12항에 있어서,상기 (d) 단계로부터 Tm값이 존재하는 것으로 판단된 시료에 대해 상기 Tm값으로부터 과발현되는 단백질의 후보군을 선발하는 단계를 추가로 포함하는 것인 스크리닝 방법
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제13항에 있어서,상기 선발된 단백질 후보군에 대한 활성평가를 추가로 수행하여 단백질을 동정하는 단계를 추가로 포함하는 것이 특징인 스크리닝 방법
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