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(1) 칼럼 부착기를 포함하는 단백질의 제조 및 발현 단계;(2) 상기 발현된 단백질을 변성시켜 칼럼에 고정시키는 단계;(3) 고정된 단백질을 재생시키는 단계; 및(4) 재생된 단백질을 분리시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제1항에 있어서 상기 (2)단계는, 상기 발현된 단백질의 응집이 풀리도록 변성되는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제2항에 있어서, 상기 발현된 단백질은 요소로 변성되는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 칼럼 부착기는 단백질 발현시 함께 발현되거나, 또는 단백질 발현 후 추가로 도입되는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제4항에 있어서, 상기 칼럼 부착기는 히스티딘 잔기인 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단백질의 재생은 이미다졸을 포함하는 재생용액을 칼럼에 로딩하여 재생되도록 하는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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7
제1항 또는 제2항에 있어서, 칼럼 부착기를 제거하는 단계를 더 포함하는 단백질 재생방법
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제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단백질의 발현은 SDF-1a (Stromal cell-derived factor-1a)를 코딩하는 서열을 포함하는 발현벡터를 대장균에서 이용하여 발현시킨 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제8항에 있어서, 상기 발현벡터는 6-히스티딘 잔기 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제9항에 있어서, 상기 발현벡터는 Tabacco etch virus (TEV) 프로테아제를 인식하는 서열을 더 포함하는 단백질 재생방법
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제8항에 있어서, 상기 발현벡터는 pET-28a 임을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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제8항에 있어서, 상기 대장균은 BL21(DE3)인 것을 특징으로 하는 단백질 재생방법
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(a) SDF-1a를 코딩하는 서열 및 6-히스티딘 (6xHis-tag) 잔기와 Tabacco etch virus (TEV) 프로테아제를 인식하는 서열을 포함하도록 발현벡터를 제작하는 단계;(b) 상기 발현벡터가 도입된 형질전환 대장균을 배양하여 SDF-1a를 발현시키는 단계;(c) 상기 발현된 SDF-1a 단백질을 응집이 풀어지도록 변성(unfolding)시키는 단계; 및 (d) 상기 변성된 SDF-1a 단백질을 칼럼에 고정시켜 재생(refolding)시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 수용성 SDF-1a 단백질의 제조 방법
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제13항에 있어서,상기 발현벡터는 pET-28a 임을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제13항에 있어서, 상기 대장균은 BL21(DE3)인 것을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제13항에 있어서, 상기 배양된 대장균에 프로테아제 억제제를 첨가하여 파쇄한 세포용해물을 제조하고, 단백질의 응집이 풀어지도록 (unfolding) 상기 세포용해물에 변성제를 첨가하여 변성되는 것을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제16항에 있어서, 상기 변성제는 요소인 것을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제13항에 있어서, 상기 재생된 SDF-1a 단백질에서 6-히스티딘 잔기를 제거하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제18항에 있어서,상기 6-히스티딘 잔기는 TEV프로테아제에 의하여 제거되는 것을 특징으로 하는 수용성 SDF-1a 단백질의 제조방법
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제13항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 따른 방법으로 제조되는 6-히스티딘 잔기가 포함된 수용성 SDF-1a 단백질
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제19항 또는 제20항에 따른 방법으로 제조되는 6-히스티딘 잔기가 제거된 수용성 SDF-1a 단백질
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발현을 원하는 단백질을 코딩하는 서열이 삽입된, 유전자 재조합 방법으로 대장균 내에서 상기 단백질을 생산할 수 있도록 구성된 발현벡터에 있어서, 상기 서열이 SDF-1a 를 코딩하는 서열이고, 활성형 단백질을 생산할 수 있도록 6-히스티딘 (6xHis-tag) 잔기와 Tabacco etch virus (TEV) 프로테아제를 인식하는 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 발현벡터
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제22항에 있어서,상기 발현벡터는 pET-28a인 것을 특징으로 하는 발현벡터
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제22항 또는 제23항에 따른 발현벡터가 도입된 형질전환 대장균
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제 24항에 있어서, 상기 대장균은 BL21(DE3)인 것을 특징으로 하는 형질전환 대장균
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