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서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 더머스 칼도필러스(Thermus caldophilus) GK24 균주 유래의 내열성 알파-글루칸 포스포릴라제(α-glucan phospholyase)
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제 1항의 알파-글루칸 포스포릴라제를 코딩하는 유전자
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제 2항에 있어서, 상기 유전자는 서열번호 3으로 기재되는 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 유전자
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제 3항에 있어서, 상기 유전자는 상기 서열번호 3의 윗 영역(upstream)에 RNA 폴리머라제 결합부위인 TATA 박스를 포함하는 서열번호 4로 기재되는 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 유전자
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제 2항의 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드 pJGlgP
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제 5항의 재조합 플라스미드 pJGlgP로 형질전환된 대장균
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제 6항에 있어서, 상기 대장균은 MV1184[pJGlgP]인 것을 특징으로 하는 대장균
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ⅰ) 더머스 칼도필러스 GK24 균주로부터 총염색체 DNA를 제조하는 단계; ⅱ) 상기 총염색체 DNA로부터 최대 5 kb의 게놈 DNA를 무작위적으로 함유하는 라이브러리를 제조하는 단계; ⅲ) 상기 라이브러리로부터 알파-글루칸 포스포릴라제를 코딩하는 유전자의 염기서열을 결정하는 단계; ⅳ) 상기 결정한 유전자의 염기서열을 플라스미드 벡터에 결합한 후, 상기 벡터로 대장균을 형질전환시키는 단계; 및 ⅴ) 상기 형질전환 대장균을 배양하여 재조합 알파-글루칸 포스포릴라제를 생산 및 정제하는 단계를 포함하는 알파-글루칸 포스포릴라제의 제조방법
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제 8항에 있어서, 상기 제조방법은 추가적으로 알파-글루칸 포스포릴라제를 전분과 반응시키면서 최대활성을 나타내는 pH 및 온도를 측정하는 단계를 포함하는 제조방법
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알파-글루칸 및 인산 완충용액으로부터 제 1항의 알파-글루칸 포스포릴라제를 이용한 알파-디-포도당-1-인산염의 합성방법
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제 10항에 있어서, 상기 알파-글루칸은 전분, 아밀로스, 아밀로펙틴, 글리코겐(glycogen) 및 덱스트린(dextrin)으로 이루어진 군중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 합성방법
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제 11항에 있어서, 상기 알파-글루칸은 전분이고, 합성된 알파-디-포도당-1-인산염을 추가적으로 30 내지 90%의 에탄올 농도증가에 의한 반복적인 침전으로 전분으로부터 분리하는 것을 특징으로 하는 합성방법
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제 12항에 있어서, 상기 알파-디-포도당-1-인산염을 분리한 후, 추가적으로 초산마그네슘과 암모니아의 혼합액을 첨가하여 상기 인산 완충용액을 제거함으로써 알파-디-포도당-1-인산염을 정제하는 것을 특징으로 하는 합성방법
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제 13항에 있어서, 상기 정제된 알파-디-포도당-1-인산염을 중수에 용해시킨 후, 핵자기 공명 분광기(NMR)로 구조를 분석하는 것을 특징으로 하는 합성방법
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제 10항에 있어서, 상기 알파-글루칸의 농도는 20 내지 50 g/ℓ인 것을 특징으로 하는 합성방법
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제 10항에 있어서, 상기 인산 완충용액의 농도는 0
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제 10항에 있어서, 상기 인산 완충용액의 농도는 0
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