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외래단백질을 고효율로 생산하는 리더서열

  • 기술번호 : KST2015170817
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 외래단백질을 고효율로 생산하는 리더서열 및 그를 이용한 외래단백질의 고효율 생산 방법에 관한 것으로, 구체적으로는 외래단백질을 고효율로 발현하게 하는 75종의 리더서열과 상기 리더서열을 포함하는 발현벡터, 상기 발현벡터에 의해 형질감염된 세포주 및 상기 세포주를 이용한 재조합 외래 단백질의 생산방법 및 외래단백질을 고발현시키기 위한 최적의 리더서열을 선별할 수 있는 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명의 리더서열과 벡터 및 세포주에 의해 고역가로 대량생산된 외래단백질은 여러 가지 바이오의약품 생산에 유용하게 사용될 수 있다. 리더서열, 외래단백질, 가용성 수용체, 싸이토카인, 인간 단클론항체, 인간화 단클론항체
Int. CL C07K 14/00 (2006.01) C07K 7/00 (2006.01)
CPC C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01) C07K 14/00(2013.01)
출원번호/일자 1020080086232 (2008.09.02)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1618767-0000 (2016.04.29)
공개번호/일자 10-2010-0027352 (2010.03.11) 문서열기
공고번호/일자 (20160509) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2013.07.02)
심사청구항수 16

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박영우 대한민국 대전광역시 유성구
2 전재원 대한민국 대전광역시 유성구
3 박지현 대한민국 경상남도 함안군
4 정준구 대한민국 대전광역시 서구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2008.09.02 수리 (Accepted) 1-1-2008-0624294-43
2 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.07.02 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0595535-44
3 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2013.07.02 수리 (Accepted) 1-1-2013-0595544-55
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2014.03.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2014.04.08 수리 (Accepted) 9-1-2014-0027718-79
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2014.10.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0728080-39
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.12.26 수리 (Accepted) 1-1-2014-1263751-15
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.12.26 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-1263749-23
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
10 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2015.05.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0354681-87
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2015.06.29 수리 (Accepted) 1-1-2015-0625912-72
12 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2015.06.29 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2015-0625916-54
13 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2015.08.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0585148-14
14 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2015.10.01 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2015-0951616-75
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2015.10.01 수리 (Accepted) 1-1-2015-0951617-10
16 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2015.12.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0891433-77
17 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2016.02.16 수리 (Accepted) 1-1-2016-0150990-49
18 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2016.02.16 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-0151002-44
19 등록결정서
Decision to grant		 2016.04.25 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0301006-03
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
서열번호 8의 리더서열 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 인간 항체 Fc 절편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 골격벡터의 프로모터에 작동가능하도록 연결된 재조합 벡터
2 2
삭제
3 3
제 1항에 있어서, 상기 리더서열 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 83의 핵산 서열로 구성된 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
4 4
삭제
5 5
삭제
6 6
제 1항에 있어서, 상기 골격벡터는 포유동물 발현벡터인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
7 7
제 6항에 있어서, 상기 포유동물 발현벡터는 pcDNA, pCMV, pEF, pSI, pCI, pCI-neo, pTK-neo, pFLAG 및 p3xFLAG로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
8 8
제 1항에 있어서, 상기 골격벡터는 엡스타인-바르 바이러스(Epstein-Barr virus)로부터 유래한 oriP 복제 기원이 삽입된 벡터인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
9 9
삭제
10 10
제 1항에 있어서, 상기 리더 서열 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되는 외래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
11 11
제 10항에 있어서, 상기 외래 단백질은 성장인자(growth factor), 가용성 수용체(soluble receptor), 사이토카인(cytokine) 또는 단클론항체(monoclonal antibody)인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
12 12
제 11항에 있어서, 상기 성장인자는 형질전환 성장인자(TGF-β), 과립구-콜로니 자극인자(G-CSF), 과립구-대식구 콜로니 자극인자(GM-CSF), 신경 성장인자(NGF), 뉴로트로핀(neurotrophin), 혈소판 유래 성장인자(PDGF), 에리트로포이에틴(EPO), 트롬보포이에틴(TPO), 미오스타틴(GDF-8), 성장 분화인자-9(GDF9), 산성 섬유아세포 성장인자(aFGF 또는 FGF-1), 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF 또는 FGF-2), 상피 성장인자(EGF), 간세포 성장인자(HGF), 골형성인자(BMP) 또는 혈관내피 성장인자(VEGF)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합, 상기 가용성 수용체는 G-단백질 관련 수용체, 수용체 티로신 키나제 또는 이온통로성 수용체(ionotropic receptor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합, 또는 상기 사이토카인은 인터류킨-2(IL-2), 인터페론(INF), 인터류킨-10, 인터류킨-1, 인터류킨-12 또는 케모카인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합인 것을 특징으로 하는 재조합 벡터
13 13
제 1항의 재조합 벡터로 숙주세포를 형질감염시켜 제조한 형질감염 숙주세포
14 14
제 13항에서 있어서, 상기 숙주세포는 HEK-293E 세포, CHO(Chinese hamster ovary) 세포, BHK(baby hamster kidney) 세포, NIH-3T3 세포, HEK-293T 세포 또는 COS-7 세포인 것을 특징으로 하는 형질감염 숙주세포
15 15
i) 서열번호 8의 리더서열 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터에서 상기 리더서열 펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 하류에 외래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 작동가능하도록 삽입하여, 재조합 발현벡터를 제조하는 단계;ⅱ) 상기 재조합 발현벡터로 숙주세포를 형질감염시켜, 형질감염된 숙주세포를 제조하는 단계;ⅲ) 상기 형질감염된 숙주세포를 배양하는 단계; 및ⅵ) 배양 상등액으로부터 상기 외래단백질을 회수하는 단계를 포함하는 외래 단백질의 생산 방법
16 16
제 15항에 있어서, 상기 외래 단백질은 성장인자(growth factor), 가용성 수용체(soluble receptor), 사이토카인(cytokine) 또는 단클론항체(monoclonal antibody)인 것을 특징으로 하는 생산 방법
17 17
제 16항에 있어서, 상기 성장인자는 형질전환 성장인자(TGF-β), 과립구-콜로니 자극인자(G-CSF), 과립구-대식구 콜로니 자극인자(GM-CSF), 신경 성장인자(NGF), 뉴로트로핀(neurotrophin), 혈소판 유래 성장인자(PDGF), 에리트로포이에틴(EPO), 트롬보포이에틴(TPO), 미오스타틴(GDF-8), 성장 분화인자-9(GDF9), 산성 섬유아세포 성장인자(aFGF 또는 FGF-1), 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF 또는 FGF-2), 상피 성장인자(EGF), 간세포 성장인자(HGF), 골형성인자(BMP) 또는 혈관내피 성장인자(VEGF)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합, 상기 가용성 수용체는 G-단백질 관련 수용체, 수용체 티로신 키나제 또는 이온통로성 수용체(ionotropic receptor)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합, 또는 상기 사이토카인은 인터류킨-2(IL-2), 인터페론(INF), 인터류킨-10, 인터류킨-1, 인터류킨-12 또는 케모카인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 또는 이의 조합인 것을 특징으로 하는 생산 방법
18 18
ⅰ) 골격벡터에 엡스타인-바르 바이러스(Epstein-Barr virus)로부터 유래한 oriP 복제 기원 및 상기 골격벡터의 프로모터에 의해 발현 가능한 형태로 인간 항체 Fc를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하여 재조합 골격벡터를 제조하는 단계;ⅱ) 후보 리더서열 펩티드에 연결된 외래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 상기 재조합 골격벡터의 인간 항체 Fc를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 앞에 작동가능하도록 연결하여, 재조합 발현벡터를 제조하는 단계;ⅲ) 상기 재조합 발현벡터 및 상기 외래단백질에 상기 후보 리더서열 펩티드 대신 지표 리더서열이 연결된 융합단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 대조군 발현벡터를 각각 숙주세포에 형질감염시켜 실험군 및 대조군 숙주세포를 제조하는 단계;ⅳ) 상기 실험군 및 대조군 숙주세포를 배양하여 각각의 배양 상등액을 회수하는 단계; ⅴ) Fc에 특이적인 항체를 이용하여, 외래단백질의 발현양을 정량하는 단계; 및ⅵ) 대조군과 비교하여, 실험군에서 외래 단백질의 생산량을 증가시킨 후보 리더서열 펩티드를 선별하는 단계를 포함하는 외래단백질의 고효율 생산을 위한 리더서열의 스크리닝 방법
19 19
제 18항에 있어서, 상기 외래 단백질은 가용성 수용체 CD1D인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법
20 20
제 18항에 있어서, 상기 지표 리더서열은 외래단백질 자체의 리더서열, AMV(alfalfa mosaic virus) RNA4 리더 서열, 효모의 인버타제 분비신호 또는 효모의 산 포스파타제 리더서열인 것을 특징으로 하는 스크리닝 방법
21 21
삭제
22 22
삭제
23 23
삭제
24 24
삭제
25 25
삭제
26 26
삭제
27 27
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28 28
삭제
29 29
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30 30
삭제
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