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혈액 시료 내의 과상존 단백질을 과상존 단백질 제거용 크로마토그래피로 제거하는 단계;
상기 과상존 단백질이 제거된 시료를 환원 및 알킬화하는 단계;
리간드가 결합된 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4)와 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 글라이칸 비드를 반응시켜 얻어지는 L4-PHA-글라이칸 비드에 상기 환원 및 알킬화된 시료를 가하여 반응시키는 단계;
상기 L4-PHA-글라이칸 비드에 결합한 시료를 용출하는 단계;
상기 용출된 시료를 소화하여 질량분석하는 단계;
를 포함하는 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 혈액 유래 당단백질을 동정하는 방법
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2 |
2
제1항에 있어서,
상기 글라이칸 비드는 아가로스 또는 세파로스 비드인 것을 특징으로 하는, 당단백질을 동정하는 방법
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3
제1항에 있어서,
상기 리간드 및 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘인 것을 특징으로 하는, 당단백질을 동정하는 방법
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4 |
4
제1항에 있어서,
상기 용출 단계는 우레아 또는 SDS-PAGE 변성완충용액을 이용하는 것을 특징으로 하는, 당단백질을 동정하는 방법
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5
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 당단백질은 종양 발생 또는 전이의 마커인 것을 특징으로 하는, 당단백질을 동정하는 방법
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6
대조구 및 분석구의 혈액 시료 내의 과상존 단백질을 각각 과상존 단백질 제거용 크로마토그래피로 제거하는 단계;
상기 과상존 단백질이 제거된 대조구 및 분석구 시료를 각각 환원 및 알킬화하는 단계;
리간드가 결합된 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4)와 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 글라이칸 비드를 반응시켜 얻어지는 L4-PHA-글라이칸 비드에 상기 환원 및 알킬화된 대조구 및 분석구 시료를 각각 가하여 반응시키는 단계;
상기 L4-PHA-글라이칸 비드에 결합한 대조구 및 분석구 시료를 각각 용출하는 단계;
상기 용출된 대조구 및 분석구 시료를 소화하여 질량분석하는 단계;
를 포함하는 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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7
제6항에 있어서,
상기 글라이칸 비드는 아가로스 또는 세파로스 비드인 것을 특징으로 하는, 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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8 |
8
제6항에 있어서,
상기 리간드 및 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘인 것을 특징으로 하는, 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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9
제6항에 있어서,
상기 용출 단계는 우레아 또는 SDS-PAGE 변성완충용액을 이용하는 것을 특징으로 하는, 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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10
제6항에 있어서,
상기 대조구 및 분석구는 각각 정상인의 혈액과 진단 대상자의 혈액인 것을 특징으로 하는, 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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11
제6항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질은 종양 발생 또는 전이의 마커인 것을 특징으로 하는, 특정 렉틴 친화 크로마토그래피를 이용하여 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질을 검출하는 방법
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상기 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질은 암 발생 및 전이에 관여하는 다이아실글리세롤 키나아제 제타의 긴 아이소폼(Isoform Long of Diacylglycerol kinase zeta), JmjC 도메인 함유 히스톤 디메틸화 단백질 2A(JmjC domai-containing histone demethylation protein 2A), 프로토카데린 알파 C2 전구체의 긴 아이소폼(Isoform Long of Ptorocadherin alpha C2 precursor), 뇌-구조-인자-1(Brain-rescue-factor-1), 숙주 세포 인자 2(Host cell factor 2), 이중 기능성 헤파란 설페이트 N-디아세틸화효소/N-황전이효소 4(Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 4), 폴리아민 변환 인자 1-결합 단백질 1(Polyamine modulated factor 1-binding protein 1), 카복시펩타다아제 B2 전구체의 아이소폼 2(Isoform 2 of Carboxypeptidase B2 precursor), FLJ00268 단백질(조각){FLJ00268 protein(Fragment)}, α-3 타입 Ⅵ 콜라겐 아이소폼 1 전구체 유사(Similar to alpha 3 type Ⅵ collagen isoform 1 precursor), B0416
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13
제6항 내지 제10항 중 어느 한 항의 방법으로 검출되며, 대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대한 각각의 항체가 흡착된 기질;
상기 당단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대한 각각의 항체;
리간드가 결합된 N-연결형 당쇄변화 측정용 렉틴;
발색 또는 발광 효소로 표지된 2차 항체;
및 발색 또는 발광 효소로 표지된 상기 리간드의 수용체;를 포함하는 암 진단용 키트
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14
제13항에 있어서, 상기 암은 대장암, 위암, 폐암, 간암, 자궁암, 유방암 및 췌장암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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15
제13항에 있어서, 상기 기질은 니트로셀룰로오즈 막, 폴리비닐 수지로 합성된 웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 웰 플레이트 및 유리로 된 슬라이드글라스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제13항에 있어서, 상기 발색 또는 발광 효소는 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스파테이즈로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제13항에 있어서, 상기 리간드 및 상기 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제13항에 있어서, 발색 또는 발광 기질액을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제13항에 있어서, 상기 N-연결형 당쇄 변화 측정용 렉틴은 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4) 및 LCA(lens culinaris agglutinin) 중 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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20
제13항에 있어서,
대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 당단백질은 다이아실글리세롤 키나아제 제타의 긴 아이소폼(Isoform Long of Diacylglycerol kinase zeta), JmjC 도메인 함유 히스톤 디메틸화 단백질 2A(JmjC domai-containing histone demethylation protein 2A), 프로토카데린 알파 C2 전구체의 긴 아이소폼(Isoform Long of Ptorocadherin alpha C2 precursor), 뇌-구조-인자-1(Brain-rescue-factor-1), 숙주 세포 인자 2(Host cell factor 2), 이중 기능성 헤파란 설페이트 N-디아세틸화효소/N-황전이효소 4(Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 4), 폴리아민 변환 인자 1-결합 단백질 1(Polyamine modulated factor 1-binding protein 1), 카복시펩타다아제 B2 전구체의 아이소폼 2(Isoform 2 of Carboxypeptidase B2 precursor), FLJ00268 단백질(조각){FLJ00268 protein(Fragment)}, α-3 타입 Ⅵ 콜라겐 아이소폼 1 전구체 유사(Similar to alpha 3 type Ⅵ collagen isoform 1 precursor), B0416
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