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다음 단계를 포함하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법:
(a) 돼지 히알루로니다제 PH-20의 투명대 결합 도메인을 포함하는 재조합 단백질을 제조하는 단계;
(b) 상기 재조합 단백질을 정제한 후, 동물에 주사하여 면역반응을 유도하는 단계; 및
(c) 상기 면역반응이 유도된 동물의 혈청으로부터 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체를 분리하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 돼지 히알루로니다제 PH-20의 투명대 결합 도메인은 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열인 것을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 돼지 히알루로니다제 PH-20의 투명대 결합 도메인을 포함하는 재조합 단백질은 돼지 히알루로니다제 PH-20을 코딩하는 유전자를 주형으로 하고, 서열번호 5 및 6의 염기 서열로 표시되는 유전자를 프라이머로 하여 PCR 증폭된 산물을 클로닝한 후, 이를 미생물 또는 세포에 도입시켜 제조한 것임을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제3항에 있어서, 상기 돼지 히알루로니다제 PH-20은 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제3항에 있어서, 상기 미생물은 대장균, 살모넬라 타이피, 살모넬라 타이피뮤리움, 비브리오 콜레라, 마이코박테리움 보비스, 시겔라, 바실러스, 스테필로코커스, 코리네 박테리아, 리스테리아 모노싸이토제네스 및 스트랩토코커스로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나이고, 상기 세포는 인간 배아 신장(Human Embryonic Kidney, HEK) 293 세포인 것을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제1항에 있어서, (d) 상기 (c) 단계에서 분리한 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체를 코딩하는 유전자를 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)으로 증폭하는 단계;
(e) 상기 증폭된 PCR 산물을 글루타치온 에스 트랜스퍼라제(GST)가 내재된 벡터에 클로닝하고, 상기 클로닝된 벡터를 미생물에 도입하여, 재조합 미생물을 제작하는 단계; 및
(f) 상기 재조합 미생물로부터 글루타치온 에스 트랜스퍼라제(GST)가 융합된 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제6항에 있어서, 상기 미생물은 대장균, 살모넬라 타이피, 살모넬라 타이피뮤리움, 비브리오 콜레라, 마이코박테리움 보비스, 시겔라, 바실러스, 스테필로코커스, 코리네 박테리아, 리스테리아 모노싸이토제네스 및 스트랩토코커스로 이루어지는 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제7항에 있어서, 상기 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체의 제조방법
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제1항 내지 제8항에서 선택되는 어느 한항의 방법에 의해 제조된 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체
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제9항의 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체를 이용하여 돼지의 체외수정시 발생되는 다정자 침입(polyspermy)을 방지하는 방법
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제9항의 돼지의 히알루로니다제 PH-20을 특이적으로 인식하는 항체를 이용하여 돼지의 정원세포(spematogonia stem cell)를 선별하는 방법
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