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1) 양성-음성 선발마커 유전자 및 외래의 목적유전자를 포함하는 발현벡터를 제작하는 단계;
2) 상기 발현벡터를 아그로박테리움에 도입하는 단계;
3) 상기 발현벡터가 도입된 아그로박테리움을 벼 또는 벼의 조직과 공동배양하여 형질전환 벼(T0)를 생산하는 단계; 및
4) 상기 생산된 형질전환 벼(T0)의 조직을 N-AcPt(N-아세틸-포스피노트리신) 로 처리하여 상기 양성-음성 선발마커 유전자가 포함되지 않은 형질전환 벼(T0)를 선발하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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2
1) 양성-음성 선발마커 유전자 및 외래의 목적유전자를 포함하는 발현벡터를 제작하는 단계;
2) 상기 발현벡터를 아그로박테리움에 도입하는 단계;
3) 상기 발현벡터가 도입된 아그로박테리움을 벼 또는 벼의 조직과 공동배양하여 형질전환 벼(T0)를 생산하는 단계;
4) 상기 형질전환 벼(T0)를 배양하여 종자(T1)를 수득하는 단계; 및
5) 상기 수득된 종자(T1)의 조직을 N-AcPt 로 처리하여 상기 양성-음성 선발마커 유전자가 포함되지 않은 형질전환 종자(T1)를 선발하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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3
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 양성-음성 선발마커 유전자와 외래 목적유전자는 상이한 Ti 플라스미드에 삽입되는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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4
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 양성 선발마커 유전자는 hpt 유전자 또는 NPTII 유전자인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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5
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 음성 선발마커 유전자는 argE 유전자인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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| 6 |
6
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 발현벡터는 pSN-K(KCTC10538BP) 또는 pSN-H(KCTC10539BP) 벡터인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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7
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 3)단계의 벼의 조직은 완숙벼 유래 배발생 캘러스인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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8
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 N-AcPt는 L-PPT(L-포스피노트리신)을 아세틸화하여 제조되는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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9
제8항에 있어서,
상기 N-AcPt는, L-PPT를 아세트산 무수물 및 테트라하이드로퓨란(THF)과 혼합하는 단계를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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10
제1항에 있어서,
상기 4)단계 이후,
5) 상기 형질전환 벼(T0)를 배양하여 종자(T1)를 수득하는 단계; 및
6) 상기 수득된 종자(T1)의 조직을 N-AcPt로 처리하고 그 결과를 4)단계에 대비하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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11
제1항에 있어서,
상기 4)단계의 상기 생산된 형질전환 벼(T0)의 조직은 잎인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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12
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 N-AcPt의 농도는 10mg/ℓ~ 15mg/ℓ인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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13
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 외래 목적유전자는 환경 스트레스 내성유전자인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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14
제13항에 있어서,
상기 환경 스트레스 내성유전자는 CAT, SOD, APX, NDPK 및 NDPK2 유전자 중 어느 하나 이상의 유전자인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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15
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 벼는 자포니카인 것을 특징으로 하는 선발마커가 제거된 형질전환 벼의 제조방법
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16
제1항 또는 제2항 중 어느 한 항의 방법을 통해 제조된 선발마커가 제거된 형질전환 벼
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