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카스파제(Caspase) 내에 존재하는 시스테인계 단백질 가수분해효소의 인식부위가 비시스테인계 단백질 가수분해효소(Non-Cysteine proteases)의 인식부위로 치환된 재조합 카스파제 전구체
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제 1항에 있어서, 카스파제는 카스파제 2, 카스파제 3, 카스파제 6, 카스파제 7 및 카스파제 9로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 1항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소는 4 내지 10개의 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 1항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소 인식부위는 트롬빈 인식부위(Thrombin; 서열번호 79: LVPRGS), 엔테로키나제 인식부위(Enterokinase; 서열번호 91: DDDDK), TEV 인식부위(서열번호 92: ENLYFQG) 및 Factor Xa 인식부위(서열번호 93: IEGR 또는 서열번호 94: IDGR)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 1항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소는 트롬빈, 엔테로키나제, TEV 및 Factor Xa로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 1항에 있어서, 시스테인계 단백질 가수분해효소의 인식부위는 아스파틱산(aspartic acid)을 중심으로 4 내지 10개의 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 2항에 있어서, 카스파제 3은 23번째에서 32번째 아미노산(서열번호 95) 또는 170번째에서 179번째 아미노산까지(서열번호 96)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 2항에 있어서, 카스파제 7은 19번째에서 28번째 아미노산(서열번호 81) 및 194번째에서 203번째 아미노산까지(서열번호 83)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 2항에 있어서, 카스파제 2는 162번째에서 171번째 아미노산(서열번호 84), 297번째에서 306번째 아미노산(서열번호 85) 또는 319번째에서 328번째 아미노산까지(서열번호 86)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 2항에 있어서, 카스파제 6은 19번째에서 28번째 아미노산까지(서열번호 87)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 2항에 있어서, 카스파제 9는 134번째에서 143번째 아미노산(서열번호 88), 301번째에서 310번째 아미노산(서열번호 89) 또는 311번째에서 320번째 아미노산까지(서열번호 90)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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카스파제 3의 28번째 아미노산을 포함하는 6개의 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드(서열번호 78: ESMDSG; 아미노산 25번째에서 30번째까지)를 트롬빈에 의해 인식되어 절단되는 6개의 연속적인 아미노산(서열번호 79: LVPRGS)으로 치환하고, 180번째 아미노산과 181번째 아미노산 사이에 트롬빈에 의해 인식되어 절단되는 6개의 연속적인 아미노산(서열번호 79: LVPRGS)이 삽입된 재조합 카스파제 3 전구체
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카스파제 내에 존재하는, 적어도 하나 이상의 시스테인계 단백질 가수분해효소의 인식부위 내의 하나 이상의 아미노산 잔기가 상기 시스테인계 단백질 가수분해효소가 인식할 수 없는 아미노산으로 치환되고, 상기 시스테인계 단백질 가수분해효소의 인식부위의 주변에 비시스테인계 단백질 가수분해효소 인식부위가 삽입된 재조합 카스파제 전구체
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14
제 13항에 있어서, 카스파제는 카스파제 2, 카스파제 3, 카스파제 6, 카스파제 7 및 카스파제 9로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소는 4 내지 10개의 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소 인식부위는 트롬빈 인식부위(Thrombin; 서열번호 79: LVPRGS), 엔테로키나제 인식부위(Enterokinase; 서열번호 91: DDDDK), TEV 인식부위(서열번호 92: ENLYFQG) 및 Factor Xa 인식부위(서열번호 93: IEGR 또는 서열번호 94: IDGR)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 비시스테인계 단백질 가수분해효소는 트롬빈, 엔테로키나제, TEV 및 Factor Xa로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 시스테인계 단백질 가수분해효소의 인식부위는 아스파틱산(aspartic acid)을 중심으로 4 내지 10개의 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 14항에 있어서, 카스파제 3은 23번째에서 32번째 아미노산(서열번호 95) 또는 170번째에서 179번째 아미노산까지(서열번호 96)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 14항에 있어서, 카스파제 7은 19번째에서 28번째 아미노산(서열번호 81) 및 194번째에서 203번째 아미노산까지(서열번호 83)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 14항에 있어서, 카스파제 2는 162번째에서 171번째 아미노산(서열번호 84), 297번째에서 306번째 아미노산(서열번호 85) 또는 319번째에서 328번째 아미노산까지(서열번호 86)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 14항에 있어서, 카스파제 6은 19번째에서 28번째 아미노산까지(서열번호 87)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 14항에 있어서, 카스파제 9는 134번째에서 143번째 아미노산(서열번호 88), 301번째에서 310번째 아미노산(서열번호 89) 또는 311번째에서 320번째 아미노산까지(서열번호 90)가 비시스테인계 단백질 가수분해효소에 의해 인식되어 절단되는 연속적인 아미노산으로 구성된 펩타이드로 치환되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 시스테인계 단백질 가수분해효소가 인식할 수 없는 아미노산은 아스파틱산(Aspartic acid)을 제외한 아미노산인 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 시스테인계 단백질 가수분해효소가 인식할 수 없는 아미노산은 페닐알라닌, 알라닌, 류신 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 13항에 있어서, 아미노산 잔기가 치환되지 않은 시스테인계 단백질 가수분해효소 인식부위는 비시스테인계 단백질 가수분해효소 인식부위로 치환될 수 있는 것을 특징으로 하는 재조합 카스파제 전구체
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제 1항 내지 제 26항 중의 어느 한 항의 재조합 카스파제 전구체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드
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제 27항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현벡터
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제 28항의 발현벡터가 형질도입된 형질전환체
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30
1) 제 1항 내지 제 26항 중의 어느 한 항의 재조합 카스파제 전구체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;
2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및,
3) 상기 형질전환체를 배양하여 재조합 단백질의 발현을 유도하고 이를 수득하는 단계로 구성되는 재조합 카스파제 전구체의 제조방법
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31
제 1항 내지 제 26항 중의 어느 한 항의 재조합 카스파제 전구체를 비시스테인계 단백질 가수분해효소로 처리하는 단계를 포함하는 상기 재조합 카스파제 전구체를 활성화하는 방법
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제 31항에 있어서, 상기 비시스테인계 단백질 가수분해효소는 트롬빈, 엔테로키나제, TEV 및 Factor Xa로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
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제 32항의 방법으로 활성화된 재조합 카스파제
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1) 제 33항의 활성화된 재조합 카스파제에 카스파제 특이적 기질 및 후보 물질을 처리하는 단계;
2) 상기 활성화된 재조합 카스파제의 기질에 대한 효소 활성을 측정하는 단계; 및,
3) 후보 물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 상기 활성화된 재조합 카스파제의 효소 활성을 감소시키거나 증진시킨 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 카스파제 활성 저해제 또는 촉진제의 스크리닝 방법
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