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ＦＲＥＴ 바이오센서를 이용한 리간드의 검출방법

  • 기술번호 : KST2015170973
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 FRET (fluorescence resonance energy transfer; 형광공명에너지전이) 현상을 적용한 바이오센서를 이용한 리간드의 검출방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 바이오센서를 구성하는 리간드 결합단백질(ligand-binding protein)이 특정한 임계온도 이상에서 가역적 구조풀림(unfolding temperature)이 나타나고, 이 구조풀림의 수준이 리간드의 농도에 따라 달라지는 현상을 이용하여, 상기 임계온도를 유지시키는 조건에서 바이오센서의 FRET을 측정하여 시료 중의 리간드를 간단히 검출하는 방법이다. 본 발명에 따른 방법은 리간드 결합단백질과 형광물질을 이용하는 다양한 종류의 FRET 바이오센서에 폭넓게 적용시킬 수 있다. 바이오센서(biosensor), FRET(fluorescence resonance energy transfer; 형광공명에너지전이), 리간드 결합단백질(ligand-binding protein), 세포막간 결합 단백질(periplasmic-binding protein), 형광단백질 (fluorescent protein)
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020090036575 (2009.04.27)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1073989-0000 (2011.10.10)
공개번호/일자 10-2010-0117877 (2010.11.04) 문서열기
공고번호/일자 (20111017) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.04.27)
심사청구항수 12

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이승구 대한민국 대전광역시 유성구
2 하재석 대한민국 대전광역시 유성구
3 송재준 대한민국 대전광역시 서구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2009.04.27 수리 (Accepted) 1-1-2009-0254834-10
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2010.09.08 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2010.10.19 수리 (Accepted) 9-1-2010-0066192-63
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.03.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0152877-08
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.05.17 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0363945-51
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.05.17 수리 (Accepted) 1-1-2011-0363944-16
7 등록결정서
Decision to grant		 2011.09.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0565614-83
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
형광공여체(fluorescence donor) 및 형광수여체(fluorescence acceptor)를 포함하는 신호발생부(signaling domain)와 상기 형광공여체 및 형광수여체를 연결하는 리간드 결합단백질을 포함하는 감지부(sensing domain)를 포함하는 FRET 바이오센서를 이용한 리간드의 검출방법에 있어서, 가역적 구조풀림(unfolding)이 나타나며 리간드가 상기 리간드 결합단백질에 결합함에 따른 FRET 비율(ratio)의 변화가 가장 큰 온도구간인 임계온도에서, 리간드를 함유하는 시료를 상기 FRET 바이오 센서와 접촉시키는 것을 특징으로 하는 리간드의 검출방법
2 2
다음의 단계를 포함하는, 형광공여체 및 형광수여체를 포함하는 신호발생부와 상기 형광공여체 및 형광수여체를 연결하는 리간드 결합단백질을 포함하는 감지부를 포함하는 FRET 바이오센서를 이용한 리간드 농도의 측정방법: (a) 가역적 구조풀림(unfolding)이 나타나며 리간드가 상기 리간드 결합단백질에 결합함에 따른 FRET 비율(ratio)의 변화가 가장 큰 온도구간인 임계온도에서, 리간드를 함유하는 시료를 상기 FRET 바이오센서와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 형광 공여체와 형광 수여체의 발광량 비율의 변화를 측정하여 리간드의 농도를 측정하는 단계
3 3
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 임계온도에 변화를 가하기 위하여 산(acid), 염기(base), 환원제(reducing agent), 변성제(denaturant, chaotropic agent), 안정제(stabilizer), 계면활성제(surfactant), 유화제(emulsifier) 및 불활성화제(detergent) 중 어느 하나 이상을 첨가한 다음, 변화된 임계온도에서 리간드와 접촉시키는 것을 특징으로 하는 방법
4 4
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 임계온도에 변화를 가하기 위하여 상기 리간드 결합단백질이 저온성 또는 호열성 미생물 유래의 PBP(periplasmic-binding protein) 또는 이의 기질특이성을 개량한 PBP인 FRET 바이오센서를 이용하여 변화된 임계온도에서 리간드와 접촉시키는 것을 특징으로 하는 방법
5 5
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 리간드는 당, 아미노산, 단백질, 지질, 유기산, 금속 또는 금속이온, 산화물, 수산화물 또는 그 컨쥬게이트(conjugates), 무기 이온, 아민 또는 폴리아민 및 비타민으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법
6 6
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 형광공여체는 형광단백질(fluorescent protein), 형광 안료(fluorescent dye), 생체발광 단백질(bioluminescent protein) 및 양자점(quantum dot)으로 구성된 군에서 선택되고; 상기 형광수여체는 상기 형광공여체와 파장이 상이한 형광단백질, 형광 안료 및 양자점으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 형광공여체는 형광단백질(fluorescent protein), 형광 안료(fluorescent dye), 생체발광 단백질(bioluminescent protein) 및 양자점(quantum dot)으로 구성된 군에서 선택되고; 상기 형광수여체는 상기 형광 공여체의 형광세기를 감소시키는 소광체(quencher) 또는 금나노입자(Au-nano particle)인 것을 특징으로 하는 방법
8 8
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 형광공여체 또는 형광수여체는 하나 이상의 링커를 통하여 상기 리간드 결합단백질에 연결되는 것을 특징으로 하는 방법
9 9
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 리간드 결합단백질이 PBP인 경우, 상기 임계온도는 49~54℃인 것을 특징으로 하는 방법
10 10
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 리간드 결합단백질이 MBP(maltose-binding protein)인 경우 상기 임계온도는 약 54℃인 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 리간드 결합단백질이 GGBP(galactose/glucose binding protein)인 경우 상기 임계온도는 약 50℃인 것을 특징으로 하는 방법
12 12
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 리간드 결합단백질이 ALBP(allose-binding protein) 또는 ARBP(arabinose-binding protein)인 경우 상기 임계온도는 약 49℃인 것을 특징으로 하는 방법
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1 CN102449485 CN 중국 FAMILY
2 EP02426500 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
3 EP02426500 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
4 JP05710595 JP 일본 FAMILY
5 JP24525582 JP 일본 FAMILY
6 US09921215 US 미국 FAMILY
7 US20120083048 US 미국 FAMILY
8 WO2010126272 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
9 WO2010126272 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN102449485 CN 중국 DOCDBFAMILY
2 CN102449485 CN 중국 DOCDBFAMILY
3 EP2426500 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
4 EP2426500 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
5 EP2426500 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
6 JP2012525582 JP 일본 DOCDBFAMILY
7 JP5710595 JP 일본 DOCDBFAMILY
8 US2012083048 US 미국 DOCDBFAMILY
9 US9921215 US 미국 DOCDBFAMILY
10 WO2010126272 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
11 WO2010126272 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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