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PRL-1 단백질의 결정 구조 및 이의 결정화 방법

  • 기술번호 : KST2015171020
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 간 재생 포스파타아제(Phospatase of Regenerating Liver, 이하 "PRL"로 약칭함) 단백질의 결정 및 상기 단백질의 결정화 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 PRL-1 단백질의 결정과 i) 인간 유래의 PRL-1 단백질을 발현 및 정제하는 단계; ii) 상기 단백질을 결정화하는 단계; 및 iii) 상기 단백질 결정을 최적화하는 단계로 구성되는 PRL-1 단백질의 결정화 방법에 관한 것이다. 본 발명의 PRL-1 단백질 결정은 6개의 알파-나선구조에 의하여 둘러싸인 5 가닥의 베타-시트로 구성되어 있고, 폐쇄된(closed) P-루프를 가진 잘 정렬된 활성 부위가 존재하며, 한쪽 면을 따라 PRL-1 각 단백질 분자의 C-말단 파네실레니션 부위가 모여있는 삼합체를 형성하여 세포내 이동 및 막으로의 편재화가 가능한 것으로 확인되었다. 상기한 본 발명의 PRL-1 단백질의 결정 구조는 발암 및 암의 전이를 막는 저해제 개발에 유용하게 이용될 수 있다.
Int. CL C12N 9/16 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020040028774 (2004.04.26)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-0678425-0000 (2007.01.29)
공개번호/일자 10-2005-0103576 (2005.11.01) 문서열기
공고번호/일자 (20070205) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2004.04.26)
심사청구항수 15

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 류성언 대한민국 대전광역시유성구
2 정대균 대한민국 대전광역시유성구
3 김승준 대한민국 대전광역시유성구
4 김재훈 대한민국 제주도제주
5 손정희 대한민국 대전광역시유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application
2004.04.26 수리 (Accepted) 1-1-2004-0173679-12
2 전자문서첨부서류제출서
Submission of Attachment to Electronic Document
2004.04.27 수리 (Accepted) 1-1-2004-5066477-58
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2005.05.09 수리 (Accepted) 4-1-2005-0016474-59
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2006.01.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0037437-40
5 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.03.24 수리 (Accepted) 1-1-2006-0210155-93
6 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.04.24 수리 (Accepted) 1-1-2006-0284362-05
7 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.05.24 수리 (Accepted) 1-1-2006-0362790-30
8 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.06.26 수리 (Accepted) 1-1-2006-0451315-32
9 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.07.24 수리 (Accepted) 1-1-2006-0528401-44
10 지정기간연장신청서
Request for Extension of Designated Period
2006.08.24 수리 (Accepted) 1-1-2006-0607310-74
11 의견서
Written Opinion
2006.09.22 수리 (Accepted) 1-1-2006-0687480-70
12 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.
2006.09.22 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2006-0687523-45
13 등록결정서
Decision to grant
2007.01.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2007-0042216-19
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2008.04.10 수리 (Accepted) 4-1-2008-5054980-73
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
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번호 청구항
1 1
서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 가지며, 단사정계의 공간 그룹(monoclinic space group)이 P21이고, 유니트 셀 파라미터(unit-cell parameters)는 a=59
2 2
삭제
3 3
제 1항에 있어서, 상기 PRL-1 단백질은 중앙에 β1 내지 β5의 5 가닥 베타-시트(β-sheet)가 α1 내지 α6의 6개 알파-나선(α-helices)구조에 의하여 둘러싸여 있으며, 베타-시트의 한쪽 면은 α1 및 α2의 알파-나선구조로, 다른 쪽 면은 α3 내지 α6의 알파-나선구조로 덮여 있는 3차원 구조를 가지는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
4 4
제 3항에 있어서, 서열번호 4로 기재되는 PRL-1 단백질의 아미노산 서열을 기준으로, α1은 30 내지 39 번째 아미노산 잔기; α2는 56 내지 60번째 아미노산 잔기; α3은 78 내지 94 번째 아미노산 잔기; α4는 110 내지 121 번째 아미노산 잔기; α6은 143 내지 150 번째 아미노산 잔기; β1은 10 내지 14 번째 아미노산 잔기; β2는 17 내지 21 번째 아미노산 잔기; β3은 42 내지 47 번째 아미노산 잔기; β4는 64 내지 67 번째 아미노산 잔기; 및, β5는 99 내지 103 번째 아미노산 잔기로 구성되는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
5 5
제 1항에 있어서, 상기 PRL-1 단백질은, 서열번호 4로 기재되는 PRL-1 단백질의 아미노산 서열을 기준으로, P-루프(His103-Cys-(X)5-Arg110)를 포함하는 활성 부위(active site)가 분자 내 중앙에 위치하고 있으며, 68 내지 72 번째 아미노산 잔기에 WFPDD 루프가 존재하고, 분자의 표면에 Arg134, Arg137 및 Arg138의 양이온성의 패치(patch)와 Glu50, Asp71 및 Asp72의 음이온 잔기들의 클러스터(cluster)를 포함하는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
6 6
제 5항에 있어서, 서열번호 4로 기재되는 PRL-1 단백질의 아미노산 서열을 기준으로, 활성 부위는 Val105-Ala106-Gly107-Leu108-Gly109의 소수성 잔기를 포함하며, 8 Å의 넓은 도입부(entrance)를 가지는 포켓(pocket)으로 구성되는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
7 7
제 5항에 있어서, 서열번호 4로 기재되는 PRL-1 단백질의 아미노산 서열을 기준으로, 활성 부위의 Cys104는 Cys49와 가역적으로 이황화 결합(disulfide bond)을 형성하는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
8 8
제 1항에 있어서, 상기 결정은 비대칭 유니트 내의 PRL-1 분자들이 3중으로 대칭-연합된 삼합체를 형성하는 3차원 구조를 가지는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
9 9
제 8항에 있어서, 삼합체는 PRL-1 각 단백질 분자의 파네실레이션(farnesylation)되는 부위인 CAAX 모티브(C:시스테인, A:지방족 아미노산, X:아미노산)를 포함하는 C 말단 후위부(tails)가 활성 부위의 반대쪽 면에 모여 있는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정
10 10
1) PRL-1 단백질을 발현 및 정제하는 단계; 2) 25%(w/v) PEG4000, 0
11 11
제 10항에 있어서, 상기 단계 1)의 PRL-1 단백질은, 서열번호 4로 기재되는 PRL-1 아미노산 서열을 기준으로 104번째 위치에 대응하는 시스테인이 세린으로 치환된 아미노산을 포함하며, 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 가지는 PRL-1(C104S)인 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정화 방법
12 12
서열번호 4로 표시되는 PRL-1 아미노산 서열을 기준으로 104번째 위치에 대응하는 시스테인이 세린으로 치환된 아미노산을 포함하며, 서열번호 1로 기재되는 아미노산 서열을 가지며, 제 1항의 결정구조를 형성하는 것을 특징으로 하는 재조합 PRL-1(C104S) 단백질
13 13
도 6의 개열지도로 표시되는 제 12항의 PRL-1(C104S) 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자 서열을 포함하는 발현벡터 pCRPRL1
14 14
제 13항의 발현벡터 pCRPRL1를 포함하는 대장균 형질전환체 E
15 15
제 10항에 있어서, 단계 1)의 정제는 니켈-친화성 크로마토그래피 및 이온 교환 크로마토그래피(ion exchange chromatography)를 이용하는 것을 특징으로 하는 PRL-1 단백질의 결정화 방법
16 16
제 1항의 PRL-1 단백질의 결정을 이용하여 이의 저해제를 개발하는 방법
17 16
제 1항의 PRL-1 단백질의 결정을 이용하여 이의 저해제를 개발하는 방법
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US07998719 US 미국 FAMILY
2 US20090117580 US 미국 FAMILY
3 WO2005103242 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 US2009117580 US 미국 DOCDBFAMILY
2 US7998719 US 미국 DOCDBFAMILY
3 WO2005103242 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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