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1) 실험군으로서 위 유래 세포에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 실험군 세포와 처리하지 않은 대조군 세포의 서열번호 1로 기재되는 염기서열 또는 그의 단편을 포함하는 위암 진단용 ZNF312b 마커 유전자의 발현수준을 측정하여 비교하는 단계; 및
3) 상기 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 증가시키는 피검 조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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2
제 1항에 있어서, 단계 2)의 단편은 서열번호 1로 기재되는 염기서열 중 카르복시 말단(carboxy-terminal) 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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3 |
3
1) 실험군으로서 위 유래 세포에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 실험군 세포와 처리하지 않은 대조군 세포의 서열번호 1로 기재되는 염기서열 또는 그의 단편을 포함하는 위암 진단용 ZNF312b 마커 유전자의 발현수준을 측정하여 비교하는 단계; 및
3) 상기 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 감소시키는 피검 조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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4 |
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제 3항에 있어서, 단계 2)의 단편은 서열번호 1로 기재되는 염기서열 중 카르복시 말단(carboxy-terminal) 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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5 |
5
1) 서열번호 6으로 기재되는 염기서열로 구성되는 ZNF312b 프로모터 및 그의 단편에 작동가능하게 연결된 리포터 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트(construct)를 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 유전자 컨스트럭트를 발현벡터에 도입한 후, 동물 세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 형질전환체에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군을 설정하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 실험군 및 대조군의 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)의 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 증가시키는 피검조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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6
제 5항에 있어서, 단계 1)의 단편은 서열번호 6으로 기재되는 염기서열 중 전사개시점을 기준으로 -850 bp ~ +1 bp 부위(서열번호 9)를 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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7
제 5항에 있어서, 단계 1)의 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase) 유전자인 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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1) 서열번호 6으로 기재되는 염기서열로 구성되는 ZNF312b 프로모터 및 그의 단편에 작동가능하게 연결된 리포터 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트(construct)를 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 유전자 컨스트럭트를 발현벡터에 도입한 후, 동물 세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 형질전환체에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군을 설정하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 실험군 및 대조군의 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)의 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 감소시키는 피검조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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9 |
9
제 8항에 있어서, 단계 1)의 단편은 서열번호 6으로 기재되는 염기서열 중 전사개시점을 기준으로 -850 bp ~ +1 bp 부위(서열번호 9)를 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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10
제 8항에 있어서, 단계 1)의 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase) 유전자인 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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11
1) 서열번호 12로 기재되는 염기서열로 구성되는 K-ras 프로모터 및 그의 단편에 작동가능하게 연결된 리포터 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트(construct)를 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 유전자 컨스트럭트를 발현벡터에 도입한 후, 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 ZNF312b 및 그의 단편을 발현하는 동물 세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 형질전환체에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군을 설정하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 실험군 및 대조군의 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)의 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 증가시키는 피검조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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12 |
12
제 11항에 있어서, 단계 1)의 단편은 서열번호 16으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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13
1) 서열번호 12로 기재되는 염기서열로 구성되는 K-ras 프로모터 및 그의 단편에 작동가능하게 연결된 리포터 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트(construct)를 제조하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 유전자 컨스트럭트를 발현벡터에 도입한 후, 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열로 구성되는 ZNF312b 및 그의 단편을 발현하는 동물 세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계;
3) 상기 단계 2)의 형질전환체에 피검조성물 또는 피검화합물을 처리한 실험군과 처리하지 않은 대조군을 설정하는 단계;
4) 상기 단계 3)의 실험군 및 대조군의 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하는 단계; 및
5) 상기 단계 4)의 실험군의 발현수준을 대조군에 비해 유의성 있게 감소시키는 피검조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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제 13항에 있어서, 단계 1)의 단편은 서열번호 16으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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1) 실험군으로서 서열번호 12로 기재되는 염기서열로 구성되는 K-ras 프로모터 또는 그의 단편을 포함하는 올리고뉴클레오티드에 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 ZNF312b 단백질 또는 그의 단편과 피검조성물 또는 피검화합물을 함께 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 실험군과 처리하지 않은 대조군에서 K-ras 프로모터 또는 그의 단편에 대한 ZNF312b 단백질 또는 그의 단편의 결합수준을 측정하여 비교하는 단계; 및
3) 상기 실험군의 결합수준을 대조군에 비해 유의성 있게 증가시키는 피검 조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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16
제 15항에 있어서, 단계 1)의 K-ras 프로모터의 단편은 서열번호 16으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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17
제 15항에 있어서, 단계 1)의 ZNF312b 단백질의 단편은 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열 중 카르복시 말단을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 유발물질 스크리닝 방법
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18
1) 실험군으로서 서열번호 12로 기재되는 염기서열로 구성되는 K-ras 프로모터 또는 그의 단편을 포함하는 올리고뉴클레오티드에 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 ZNF312b 단백질 또는 그의 단편과 피검조성물 또는 피검화합물을 함께 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 실험군과 처리하지 않은 대조군에서 K-ras 프로모터 또는 그의 단편에 대한 ZNF312b 단백질 또는 그의 단편의 결합수준을 측정하여 비교하는 단계; 및
3) 상기 실험군의 결합수준을 대조군에 비해 유의성 있게 감소시키는 피검 조성물 또는 피검화합물을 선별하는 단계를 포함하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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19
제 18항에 있어서, 단계 1)의 K-ras 프로모터의 단편은 서열번호 16으로 기재되는 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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20
제 18항에 있어서, 단계 1)의 ZNF312b 단백질의 단편은 서열번호 2로 기재되는 아미노산 서열 중 카르복시 말단을 포함하는 것을 특징으로 하는 위암 억제물질 스크리닝 방법
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