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a) 체액 유래 단백질을 포함하는 체액 시료를 환원 및 알킬화하는 단계;b) 리간드가 결합된 렉틴과 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 비드를 반응시켜 얻어지는 렉틴-비드 복합체에 상기 환원 및 알킬화된 체액 시료를 가하여 반응시키는 단계;c) 상기 렉틴-비드 복합체에 결합한 체액 유래 단백질을 용출하는 단계;d) 리간드가 결합된 다른 종류의 렉틴과 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 비드를 반응시켜 얻어지는 다른 종류의 렉틴-비드 복합체에 상기 c) 단계에서 렉틴-비드 복합체에 결합하지 않은 체액 시료를 가하여 반응시키는 단계;e) 상기 다른 종류의 렉틴-비드 복합체에 결합한 체액 유래 단백질을 용출하는 단계;f) 상기 c) 단계 및 e) 단계에서 용출된 체액 유래 단백질을 절단(digestion)하여 질량분석하는 단계;를 포함하는, 렉틴 친화성을 나타내는 체액 유래 단백질을 동정하는 방법
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제1항에 있어서,a) 단계 이전에 체액 시료 내의 과상존 단백질을 제거하는 단계가 부가되는 것을 특징으로 하는 방법
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제2항에 있어서,상기 과상존 단백질 제거 단계는 과상존 단백질 제거용 크로마토그래피를 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,각기 다른 종류의 렉틴으로 상기 d) 단계 및 e) 단계를 여러 번 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 리간드는 바이오틴 및 아비딘 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 리간드는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 렉틴 및 다른 종류의 렉틴은 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4), LCA(lens culinaris agglutinin), DSA(Datura stramonium agglutinin), AAL(Aleuria aurantia agglutinin), rhE-셀렉틴, 콘카나발린 A(Concanavalin-A, Con-A), WGA(Wheat germ agglutinin), 자칼린(Jacalin), SNA(Sambucus Nigra agglutinin) 및 갈렉틴(galectin) 중 선택된 2종임을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 c) 단계 및 e) 단계에서 렉틴-비드 복합체와 결합된 체액 유래 단백질의 용출은 카오트로픽제(chaotropic agent)를 처리하고 원심분리하여 렉틴-비드 복합체로부터 분리함을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 f) 단계의 절단 방법은 용액 내 절단(in-solution digestion)임을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 e) 단계에서 렉틴-비드 복합체에 결합하지 않은 체액 시료를 모아 전기영동(electrophoresis)으로 분리하고, 젤내 절단(in-gel digestion)하여 질량분석하는 단계를 추가하는 것을 특징으로 하는 방법
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제1항에 있어서,상기 체액 시료를 각각 정상 대조구 시료 및 분석구 시료로 하여 양적 및/또는 질적 변화를 나타내는 체액 유래 단백질을 동정하는 것을 특징으로 하는 방법
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제11항에 있어서,상기 양적 및/또는 질적 변화를 나타내는 체액 유래 단백질은 종양 바이오마커 단백질임을 특징으로 하는 방법
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상기 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법에 의해 탐지된 인히빈 베타 E 사슬(Inhibin beta E chain); 세르핀(Serpin) B4; 짧은 구개, 폐 및 비강 상피암-관련 단백질 2(Short palate, lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 2); 메탈로리덕테이즈(Metalloreductase) STEAP2; 트랜스멤브레인 부고환 단백질 1(Transmembrane epididymal protein 1); 및 콘드로렉틴(Chondrolectin)으로 구성되는 단백질 군 중 선택된 1종 이상을 포함하는 간암 진단용 바이오마커 조성물
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제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법으로 탐지되며, 대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대한 각각의 항체가 흡착된 기질; 상기 당단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대하여 상기 항체와는 다른 항원부위를 인식하는 각각의 항체;리간드가 결합된 N-연결형 당쇄변화 측정용 렉틴 2종 이상; 발색 효소, 발광 효소, 발색물질 및 발광물질 중 선택된 1 이상으로 표지된 2차 항체;및 발색 효소, 발광 효소, 발색물질 및 발광물질 중 선택된 1 이상으로 표지된 상기 리간드의 수용체;를 포함하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서, 상기 암은 대장암, 위암, 폐암, 간암, 자궁암, 유방암, 췌장암을 포함하는 고형암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서, 상기 기질은 니트로셀룰로오즈 막, 폴리비닐 수지로 합성된 웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 웰 플레이트 및 유리로 된 슬라이드글라스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서, 상기 발색 또는 발광 효소는 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스파테이즈로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서, 상기 리간드는 바이오틴 및 아비딘 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서,상기 리간드는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서, 발색 또는 발광 기질액을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서,상기 렉틴은 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4), LCA(lens culinaris agglutinin), DSA(Datura stramonium agglutinin), AAL(Aleuria aurantia agglutinin), rhE-셀렉틴, 콘카나발린 A(Concanavalin-A, Con-A), WGA(Wheat germ agglutinin), 자칼린(Jacalin), SNA(Sambucus Nigra) 및 갈렉틴(galectin) 중 선택된 것임을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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제14항에 있어서,상기 대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 단백질은 인히빈 베타 E 사슬(Inhibin beta E chain); 세르핀(Serpin) B4; 짧은 구개, 폐 및 비강 상피암-관련 단백질 2(Short palate, lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 2); 트랜스멤브레인 부고환 단백질 1(Transmembrane epididymal protein 1); 및 콘드로렉틴(Chondrolectin)으로 구성되는 단백질 군 중 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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