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다중렉틴을 이용한 체액 유래 단백질 동정 방법 및 이 방법에 의하여 탐지된 간암 바이오마커

  • 기술번호 : KST2015171396
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 암의 발생과 진행과정에서 양적 변화를 보이거나 당쇄 구조의 변화를 보이는 당단백질들을 다양한 렉틴을 이용하여 포집한 후 질량분석기로 동정하여 암 혈청에 특이적인 단백질들을 바이오마커 후보군으로 설정하는 방법과, 동정된 후보군을 바이오마커로 지정하는 것에 관한 것이다.바이오마커, 당단백질, 간암, 렉틴, 진단용 키트
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) G01N 30/00 (2006.01) G01N 33/574 (2006.01)
CPC G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01) G01N 33/6848(2013.01)
출원번호/일자 1020090095940 (2009.10.09)
출원인 한국생명공학연구원
등록번호/일자 10-1207797-0000 (2012.11.28)
공개번호/일자 10-2011-0038778 (2011.04.15) 문서열기
공고번호/일자 (20121204) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.10.09)
심사청구항수 22

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 고정헌 대한민국 대전광역시 유성구
2 김용삼 대한민국 대전광역시 유성구
3 김선희 대한민국 부산광역시 남구
4 유향숙 대한민국 대전광역시 서구
5 유종신 대한민국 서울특별시 강남구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 강성혜 대한민국 대전 유성구 지족로***번길 **, ***-*호 (지족동, 성훈프라자)(아이앤아이특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국생명공학연구원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2009.10.09 수리 (Accepted) 1-1-2009-0618704-10
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2011.03.08 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2011.04.15 수리 (Accepted) 9-1-2011-0033538-39
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2011.04.29 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0234571-33
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2011.05.24 수리 (Accepted) 1-1-2011-0386656-44
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2011.05.24 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0386649-24
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2011.11.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0712782-49
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2011.12.14 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0991884-72
9 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2011.12.14 수리 (Accepted) 1-1-2011-0991888-54
10 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2012.05.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0318403-64
11 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2012.07.06 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0540716-00
12 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2012.07.06 수리 (Accepted) 1-1-2012-0540715-54
13 등록결정서
Decision to grant
2012.11.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0722066-91
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2015.02.05 수리 (Accepted) 4-1-2015-0007152-08
15 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)
2016.05.17 수리 (Accepted) 1-1-2016-0471199-35
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번호 청구항
1 1
a) 체액 유래 단백질을 포함하는 체액 시료를 환원 및 알킬화하는 단계;b) 리간드가 결합된 렉틴과 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 비드를 반응시켜 얻어지는 렉틴-비드 복합체에 상기 환원 및 알킬화된 체액 시료를 가하여 반응시키는 단계;c) 상기 렉틴-비드 복합체에 결합한 체액 유래 단백질을 용출하는 단계;d) 리간드가 결합된 다른 종류의 렉틴과 상기 리간드에 결합하는 리간드 수용체가 결합된 비드를 반응시켜 얻어지는 다른 종류의 렉틴-비드 복합체에 상기 c) 단계에서 렉틴-비드 복합체에 결합하지 않은 체액 시료를 가하여 반응시키는 단계;e) 상기 다른 종류의 렉틴-비드 복합체에 결합한 체액 유래 단백질을 용출하는 단계;f) 상기 c) 단계 및 e) 단계에서 용출된 체액 유래 단백질을 절단(digestion)하여 질량분석하는 단계;를 포함하는, 렉틴 친화성을 나타내는 체액 유래 단백질을 동정하는 방법
2 2
제1항에 있어서,a) 단계 이전에 체액 시료 내의 과상존 단백질을 제거하는 단계가 부가되는 것을 특징으로 하는 방법
3 3
제2항에 있어서,상기 과상존 단백질 제거 단계는 과상존 단백질 제거용 크로마토그래피를 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
4 4
제1항에 있어서,각기 다른 종류의 렉틴으로 상기 d) 단계 및 e) 단계를 여러 번 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
5 5
제1항에 있어서,상기 리간드는 바이오틴 및 아비딘 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 방법
6 6
제1항에 있어서,상기 리간드는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제1항에 있어서,상기 렉틴 및 다른 종류의 렉틴은 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4), LCA(lens culinaris agglutinin), DSA(Datura stramonium agglutinin), AAL(Aleuria aurantia agglutinin), rhE-셀렉틴, 콘카나발린 A(Concanavalin-A, Con-A), WGA(Wheat germ agglutinin), 자칼린(Jacalin), SNA(Sambucus Nigra agglutinin) 및 갈렉틴(galectin) 중 선택된 2종임을 특징으로 하는 방법
8 8
제1항에 있어서,상기 c) 단계 및 e) 단계에서 렉틴-비드 복합체와 결합된 체액 유래 단백질의 용출은 카오트로픽제(chaotropic agent)를 처리하고 원심분리하여 렉틴-비드 복합체로부터 분리함을 특징으로 하는 방법
9 9
제1항에 있어서,상기 f) 단계의 절단 방법은 용액 내 절단(in-solution digestion)임을 특징으로 하는 방법
10 10
제1항에 있어서,상기 e) 단계에서 렉틴-비드 복합체에 결합하지 않은 체액 시료를 모아 전기영동(electrophoresis)으로 분리하고, 젤내 절단(in-gel digestion)하여 질량분석하는 단계를 추가하는 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제1항에 있어서,상기 체액 시료를 각각 정상 대조구 시료 및 분석구 시료로 하여 양적 및/또는 질적 변화를 나타내는 체액 유래 단백질을 동정하는 것을 특징으로 하는 방법
12 12
제11항에 있어서,상기 양적 및/또는 질적 변화를 나타내는 체액 유래 단백질은 종양 바이오마커 단백질임을 특징으로 하는 방법
13 13
상기 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법에 의해 탐지된 인히빈 베타 E 사슬(Inhibin beta E chain); 세르핀(Serpin) B4; 짧은 구개, 폐 및 비강 상피암-관련 단백질 2(Short palate, lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 2); 메탈로리덕테이즈(Metalloreductase) STEAP2; 트랜스멤브레인 부고환 단백질 1(Transmembrane epididymal protein 1); 및 콘드로렉틴(Chondrolectin)으로 구성되는 단백질 군 중 선택된 1종 이상을 포함하는 간암 진단용 바이오마커 조성물
14 14
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법으로 탐지되며, 대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대한 각각의 항체가 흡착된 기질; 상기 당단백질군 중 하나 또는 그 이상의 단백질에 대하여 상기 항체와는 다른 항원부위를 인식하는 각각의 항체;리간드가 결합된 N-연결형 당쇄변화 측정용 렉틴 2종 이상; 발색 효소, 발광 효소, 발색물질 및 발광물질 중 선택된 1 이상으로 표지된 2차 항체;및 발색 효소, 발광 효소, 발색물질 및 발광물질 중 선택된 1 이상으로 표지된 상기 리간드의 수용체;를 포함하는 암 진단용 키트
15 15
제14항에 있어서, 상기 암은 대장암, 위암, 폐암, 간암, 자궁암, 유방암, 췌장암을 포함하는 고형암으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
16 16
제14항에 있어서, 상기 기질은 니트로셀룰로오즈 막, 폴리비닐 수지로 합성된 웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 웰 플레이트 및 유리로 된 슬라이드글라스로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
17 17
제14항에 있어서, 상기 발색 또는 발광 효소는 퍼옥시데이즈, 알칼라인 포스파테이즈로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
18 18
제14항에 있어서, 상기 리간드는 바이오틴 및 아비딘 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 바이오틴 및 아비딘 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
19 19
제14항에 있어서,상기 리간드는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 선택된 1종이며, 리간드 수용체는 프로테인 A 및 프로테인 G 중 1종 이상 및 IgG Fc 중 리간드가 아닌 1종인 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
20 20
제14항에 있어서, 발색 또는 발광 기질액을 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 암 진단용 키트
21 21
제14항에 있어서,상기 렉틴은 L4-PHA(Phytohemagglutinin-L4), LCA(lens culinaris agglutinin), DSA(Datura stramonium agglutinin), AAL(Aleuria aurantia agglutinin), rhE-셀렉틴, 콘카나발린 A(Concanavalin-A, Con-A), WGA(Wheat germ agglutinin), 자칼린(Jacalin), SNA(Sambucus Nigra) 및 갈렉틴(galectin) 중 선택된 것임을 특징으로 하는 암 진단용 키트
22 22
제14항에 있어서,상기 대조구와 분석구 사이에 β1,6 N-아세틸글루코사민 당쇄 가지의 차이를 보이는 단백질은 인히빈 베타 E 사슬(Inhibin beta E chain); 세르핀(Serpin) B4; 짧은 구개, 폐 및 비강 상피암-관련 단백질 2(Short palate, lung and nasal epithelium carcinoma-associated protein 2); 트랜스멤브레인 부고환 단백질 1(Transmembrane epididymal protein 1); 및 콘드로렉틴(Chondrolectin)으로 구성되는 단백질 군 중 선택된 1종 이상임을 특징으로 하는 암 진단용 키트
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 한국생명공학연구원 해외우수연구기관 유치사업 프레드헛친슨 암연구소(FHCRC) 유치를 통한 종양마커의 개발