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변이된 Acs(Acetyl-CoA synthase) 유전자 프로모터(Acs 프로모터) 라이브러리를 포함하는 개량된 자가유도 발현 시스템(evolved autoinduction expression system)
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제 1 항에 있어서, 상기 변이된 Acs 프로모터는 벡터 내에 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 자가유도 발현 시스템
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제 2 항에 있어서, 상기 벡터에 있는 변이 Acs 프로모터에 발현하고자 하는 목적단백질-코딩 뉴클레오타이드 서열이 작동적으로(operatively) 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 자가유도 발현 시스템
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제 1 항에 있어서, 상기 변이된 Acs 프로모터는 자연형(natural-occurring) Acs 프로모터와 비교하여 적합한 발현 양상을 나타내는 것을 특징으로 하는 자가유도 발현 시스템
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제 4 항에 있어서, 상기 적합한 발현 양상은 발현력 및 발현 시간 프로파일인 것을 특징으로 하는 자가유도 발현 시스템
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(a) Acs(Acetyl-CoA synthase) 유전자의 프로모터에 변이를 유발하여(mutagenesis)하여 상기 Acs 프로모터의 변이 라이브러리를 구축하는 단계; 및 (b) 상기 Acs 프로모터의 변이 라이브러리로부터 변이 유발 전 자연형(natural-occurring) Acs 프로모터와 비교하여 적합한 발현 양상을 나타내는 변이 Acs 프로모터를 선택하는 단계를 포함하는 자가유도 발현용 개량된 Acs 프로모터의 스크리닝 방법
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제 6 항에 있어서, 상기 변이 유발은 DNA 셔플링법, StEP법, RPR법, 분자육종법, ITCHY법, 에러 유발(error prone) PCR 또는 포인트 돌연변이법을 이용하여 실시되는 것을 특징으로 하는 방법
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제 7 항에 있어서, 상기 변이 유발은 에러 유발(error prone) PCR을 이용하여 실시되는 것을 특징으로 하는 방법
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제 6 항에 있어서, 상기 적합한 발현 양상은 발현력 및 발현 시간 프로파일인 것을 특징으로 하는 방법
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제 9 항에 있어서, 상기 적합한 발현 양상은 자연형(natural-occurring) Acs 프로모터와 비교하여 높은 발현력을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법
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제 8 항에 있어서, 상기 방법은 단계 (a) 후, 단계 (a-1) 상기 Acs 프로모터의 변이 라이브러리 및 상기 Acs 프로모터의 변이 라이브러리에 작동적으로(operatively) 결합된 리포터 유전자를 포함하는 벡터를 제작하는 단계; 단계 (a-2) 상기 벡터로 박테리아 세포를 형질전환시키는 단계; 및 단계 (a-3) 상기 형질전환된 박테리아 세포를 정지기(stationary phase)까지 배양하여 상기 리포터 유전자의 자가유도 발현을 야기시키는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법
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제 11 항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP(green fluorescent protein) 유전자, 루시퍼라아제 유전자, β-갈락토시다아제 유전자, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라아제 유전자, 인간성장호르몬 유전자 또는 분비성 태반 알칼린 포스파테이즈(secreted placental alkaline phosphatase) 유전자인 것을 특징으로 하는 방법
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제 12 항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 GFP 유전자인 것을 특징으로 하는 방법
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제 11 항에 있어서, 상기 단계 (b)는 리포터 유전자의 발현 정도를 측정하여 실시되는 것을 특징으로 하는 방법
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제 14 항에 있어서, 상기 단계 (b)는 GFP로부터의 형광을 측정하여 실시되는 것을 특징으로 하는 방법
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제 11 항에 있어서, 상기 박테리아 세포는 E
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